Разработка технологии изготовления инактивированной вакцины против болезни Ауески из штамма, делеционного по гликопротеину Е

• Автор: Гусева, Марина Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 143 с. : ил.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ.

1.0БР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика болезни Ауески и ее возбудителя

1.2. Факторы вирулентности вируса болезни Ауески.

1.3.Технология приготовления вакцины против вируса

болезни Ауески

1.3.1.Размножение и культивирование вируса

1.3.2. Очистка и концентрирование вируса

болезни Ауески

1.3.3. Инактивация инфекционности вируса

болезни Ауески
1.4. Вакцины против болезни Ауески
1.4.1. Вирусвакцины.
1.4.2. Вакцины из инактивированного вируса
1.4.2.1. Вакцины из вирулентных инактивированных штаммов вируса болезни Ауески
1.4.2.2. Вакцины из инактивированных маркированных штаммов вируса болезни Ауески
1.5. Иммунитет при болезни Ауески
1.5.1. Роль белков в иммунном ответе.
1.6. Заключение по обзору литературы.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.1.1. Вирус.
2.1.2. Животные
2.1.3. Культура клеток.
2.1.4. Аппаратура.
2.1.5. Растворы
2.1.6. Культивирование вируса болезни Ауески
2.1.7. Очистка вируссодержащей суспензии
2.1.8. Инактивация инфекционности вируса.
2.1.9. Концентрирование вируса болезни Ауески
2.1 Количественное определение вируссодержащего
2.1 Постановка 2центрового сэндвич ИФА на основе моноклональных антител к гликопротеинам В и Е вируса болезни Ауески
2.1 Постановка прямого блокирующего иммуноферментного анализа
2.1 Реакция нейтрализации
2.1 Методы испытаний вакцин
2.1 Статистическая обработка результатов исследований.
2.2. Результаты собственных исследований.
2.2.1.Культивирование вируса болезни Ауески
2.2.1.1. Выбор оптимальной системы для репродукции делеционного мутанта по гликопротеину Е
вируса болезни Ауески.
2.2.1.2. Получение вируса болезни Ауески в
культуре клеток ВНК
2.2.2. Инактивация инфекционности вируса болезни
2.2.3. Концентрирование вируса болезни Ауески
2.2.4. Вакцины против болезни Ауески
2.2.4.1. Подбор адъювантов для производства вакцин против болезни Ауески.
2.2.4.2. Исследование колострального иммунитета
2.2.4.3. Иммуногенная активность вакцин против болезни Ауески из инактивированного вируса.
2.2.4.4. Изучение стабильности иммуногенных свойств вакцин против болезни Ауески в процессе хранения.
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.ВЫВОД Ы.
5.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
7.ПРИЛОЖЕНИ Я
Сокращенные термины и примененные обозначения
АЭЭИ аминоэтилэтиленимин
АТ антитела
БА болезнь Ауески
БАК вакцина против болезни Ауески на основе двух
штаммов К и БУК
ВБА вирус болезни Ауески
ВНА вируснейтрализующие антитела
ВНК перевиваемая линия клеток почки сирийского
хомячка
ГК культура клеток гонады козы
ИФА иммуноферментный анализ
КС культиватор стеклянный
ЛД летальная доза вируса, вызывающая гибель
инфицированных животных
МИФ метод иммунофлуоресценции
мкАТ моноклональные антитела.
МПА мясопептонный агар
МПБ мясопептонный бульон
ОВБ общий вирусный белок
ПАК полиакриловая кислота
ППК6 клонированная суспензионномонослойная
культура клеток почки эмбриона свиньи казанской ПСГК перевиваемая линия клеток почки сибирского горного козерога
ПЭГ полиэтиленгликоль
ПЦР полимеразная цепная реакция
реакция нейтрализации
РСК реакция связывания комплемента
спэв
ТЦД
ФА
УЕРО
9Е
первичнотрипсинизированная культура клеток свиной почки
суспензионномонослойная культура клеток эмбриона свиньи тиогликолевая среда
тканевая цитопатическая доза вируса, вызывающая гибель инфицированных клеток тимидинкиназа феракрил.
5 перевиваемая линия клеток, полученная из почки эмбриона макаки резус клона МА4 перевиваемая линия клеток почек африканской мартышки гликопротеин В гликопротеин Е
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


В России к настоящему времени не разработана технология производства маркированных вакцин против болезни Ауески, что затрудняет выявление животных с поствакцинальным и постинфекционным иммунитетом. Разработка и применение вакцин против болезни Ауески из штаммов, имеющих делецию в одном из генов, кодирующего определенные гликопротеины вируса, является актуальной задачей. Принимая во внимание актуальность производства и применения маркированных вакцин против болезни Ауески из инактивированного вируса, перед нами была поставлена цель разработать технологию изготовления вакцины против болезни Ауески из инактивированного вируса применительно к делеционному штамму ВК. Ауески из инактивированного делеционного штамма ВК. Научная новизна. Разработана технология изготовления вакцины против болезни Ауески из инактивированного, делеционного по гликопротеину Е. Выбрана чувствительная система культивирования для делеционного штамма с использованием перевиваемой культуры клеток ВНК и различных культур клеток свиной почки. Разработан метод культивирования делеционного штамма в суспензионной культуре клеток ВНК2. Отработан режим инактивации инфекционности вируса болезни Ауески штамма ВК аминоэтилэтиленимином в концентрации 0. М 1. Подобран адъювант для вакцины из инактивированного вируса маркированного штамма. Вирусвакцина и вакцина из инактивированного возбудителя на основе делеционного штамма ВК создавала у привитых животных напряженный иммунитет и защищала от прямого заражения вирулентным штаммом вируса болезни Ауески. Выявлена корреляция между количеством гликопротеина В и общим вирусным белком в вирусном сырье, а также между уровнем антител к дВ в иммуноферментном анализе и титром антител в реакции нейтрализации. Практическое значение. На основании проведенных исследований штамма ВК вируса болезни Ауески, имеющего делецию гена, кодирующего гликопротеин Е, составлен паспорт и проведено депонирование штамма во Всероссийском научноисследовательском институте защиты животных. Методические рекомендации по культивированию вируса болезни Ауески штамма ВК. Методические рекомендации по инактивации инфекционности вируса болезни Ауески вирулентного штамма К и делеционного по гликопротеину Е штамма ВК аминоэтилэтиленимином. ТУ по изготовлению и применению эмульсионной вакцины из инактивированного вируса против болезни Ауески из штамма, маркированного по гликопротеину Е. Публикации. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 8 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы. Работа иллюстрирована таблицами и 3 рисунками. Список используемой литературы включает 3 наименования, из них источника это работа отечественных авторов и 1 зарубежных. Болезнь Ауески псевдобешенство остро протекающая болезнь сельскохозяйственных животных всех видов, пушных зверей и грызунов. Она характеризуется признаками поражения головного и спинного мозга, легких, сильным зудом и расчесами у всех животных, кроме свиней, норок и собак. Болезнь встречается во всех европейских странах, Южной и Северной Америке. Африке и Азии в виде эпизоотий и наносит большой экономический ущерб. Первые сведения о болезни были получены в Швейцарии Штребелем в году. В году венгерский исследователь Аладар Ауески выделил вирус из патматериала от павших животных быка, кошки, собаки, описал клиническую картину и дал имя новой нозелогической единице, отметив, что после внутримышечного введения суспензии из мозга павших животных у кроликов через часов наблюдалось возбуждение, сильный зуд на месте введения, а через часов кролики погибали . Болезнь Ауески типичная герпесвирусная инфекция, имеющая множество форм течения, в том числе с длительной, практически пожизненной латенцией. Трудность и нередко безуспешность борьбы с болезнью Ауески связана с биологической особенностью герпесвирусов сохраняться в организме в латентном состоянии и реактивироваться в неблагоприятных условиях. Кроме того, недостаточно отработанны методы, средства диагностики и профилактики болезни , .