Характеристика генетической вариабельности штаммов вируса клещевого энцефалита на основе анализа гомологии участков вирусного генома

• Автор: Демина, Татьяна Васильевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Иркутск
• Количество страниц: 157 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

лава 1. Генетическая гетерогенность вируса клетевого

энцефалита, определяемая с помощью фенотипических признаков И

1.1. Патогенность для животных.

1.2. Генетические признаки вирусов, связанные с

особенностями их внутриклеточной репродукции и выявляемые i vi.

1.3. Генетические признаки, обусловленные свойстваии

поверхностной структуры вирусов КЗ и ККЗ

Глава 2. Методы молекулярной биологии, используемые для оценки генетических различий штампов
вируса клещевого энцефалита
2. 1. Изучение вирусспеиифических белков и отдельных
антигенных детерминант
2. 2. Методы изучения вирусных геномов и их фрагментов .
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 3. Материалы и методы.
3.1. Материалы.
3.2. Методы 5
Глава 4. Разработка и применение плазмидных и
лезоксиолигонуклеотидкых зондов для изучения вариабельности вируса клетевого энцефалита
4.1. Генетические варианты вируса КЗ, определяемые
методом МГНК
4.2. Оценка специфичности молекулярных зондов .
4.3. Географическое распространение генетических вариантов
вирусов КЗ
4. 4. Результаты гибридизации РНК штаммов ВКЭ, взятых на
разной уровне пассажей .
4. 5. Оценка возможностей МГНК для генетичесхой
дифференциации ВКЭ
Глава Ь. Характеристика генетической гетерогенности вируса клещевого энцефалита, изученная с помощью полинеразной цепной реакции и секвенирования Фрагментов генома
5.1. Обоснование выбора участка генона для секвенирования .
5. 2. Сравнение полученных и опубликованных данных по
нуклеотидный последовательностям среди штаммов ВКЭ и вирусов ККЭ.
5. 3. Определение уровней сходства и различий между штаммами
ВКЭ и вирусами комплекса КЗ.
5.4. Аминокислотный состав Фрагментов белка Е штаммов ВКЭ .
Глава 6. Генетическое типирование вируса клетевого
энцефалита.
6.1. Критерии генотипирования на основе анализа гомологии
участков вирусного генома .
6.2. Сопоставление результатов генотипирования. полученных
с помощью МГНК и секвенирования фрагментов генома. Географическое распространение генотипов ВКЭ
6. 3. Результаты сравнения фрагментов аминокислотных
последовательностей изученных штаммов ВКЭ с
учетом новых критериев генотипирования
6.4. Построение филогенетических деревьев
Глава 7 Получение и характеристика генотипспеиифических . .
к ДНКзондов.
7.1. Получение новых кДНКзондов
7.2. Результаты испытания полученных зондов .
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
выводы.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Диссертация состоит из введения, обзора литературы две главы, пяти глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы отечественных и зарубежных источников. Общий объем работы 6 страниц машинописного текста, включающего таблиц и рисунков. Глава 1. Вирусы, как. Те свойства, которые перелаются по наследству, получили название генетических признаков. До применения методов молекулярной биологии вирусологу были доступны лишь фенотипические проявления генетических признаков. Фенотипический подход не всегда позволял проводить летальное количественное изучение изменений наследственных свойств вирусов и анализировать механизмы этой изменчивости Но таковы исторические закономерности развития науки и изучение фенотипов важная составляющая полноценного представления о том. Изучение генетических признаков имеет большое значение не только для. Только при глубоком их знании можно проводить дифференциацию между близкими штаммами вирусов, отбирать вакцинные штаммы и осуществлять контроль за состоянием штаммов в производстве вирусных вакцин С 9. Наиболее важными в биологической характеристике вирусов являются их патогенные свойства. Патогенность весьма стойкий наследственный признак, однако он может быть изменен в результате специальных воздействий. Енутрибрюшинно. В литературе накоплен обширный материал по изучению патогенности арбовирусов. Мы остановимся лишь на некоторых работах. Основная наша задача получить наиболее полное представления о тон. КЗ. В ряде работ Левкович . Н. с соавт. Погодиной В. В. с соавт. С. 3 изучались штаммов вирусов, входящих в комплекс КЗ. Авторы определяли спектр патогенности вирусов для животных белые мышы, хомяки, овцы, свиньи, обезьяны. Учитывались следующие биологические свойства вирулентность при различных путях заражения, клинические проявления инфекции, уровень вирусемии и патоморфологические изменения в центральной нервной системе ЦНС. При этом были выявлены определенные различия как качественного, так и количественного порядка, позволяющие в ряде случаев дифференцировать вилы вирусов, составляющих антигенный комплекс КЗ, а также наблюдать определенные штамиовые вариации внутри видов. Оценку вирулентности проводили по двум показателям среднему инфекционному титру при заражении мышей в мозг по данным пяти и более опытов титрования и при периферическом введении. Периферическую активность характеризовали индексом инвазивности И, который расчитывали по соотношению средних титров при церебральном и периферическом чаше подкожном заражении в пересчете на 1 ил материала. Восточные штампы вируса КЗ имели максимальный титр . более 9. Западные штаммы были сходны с восточными и не отличались по отмеченному критерию от штаммов вирусов ОГЛ омской геморрагической лихорадки КЛБ Скиассанурскои лесной болезни, и Повассан. Минимальной церебральной активностью обладал штамм малайского вируса Лангат. Несколько сниженные титры имели штаммы вируса ШЭО шотландский энцефаломиелит овец. По индексу инвазивности максимальной активностью расхождение титров при заражении мыий в мозг и под кожу менее 2 знаков десятичного логорифма обладали многие восточные и западные штаммы вируса КЗ. ОГЛ. КЛБ. Повассан. Лангат и ШЭО. Авторы отметили, что группа восточных штаммов вируса КЗ но являлась монолитной по указанным признакам и отдельные штаммы по своей характеристике на мышах приближались к таким, относительно малопатогенным для человека вирусам, как Лангат и ШЭО. По данным Смородиниева . . и Дубова . . С1 средние показатели вирулентности штаммов вируса КЗ, выделенных на Дальнем Востоке, в Западной Сибири, европейской части бывшего СССР, Западной Европе, при внутримозговом заражении мышей составляли 8,5 ил. мл. При подкожном заражении мышей для большинства штаммов показатели вирулентности составляют от 4,5 до 7,0 ил. Довольно редко встречаются штаммы с показателем вирулентности ниже 4 или выше 9 мл. В восточных и западных очагах КЗ преобладают штаммы с высокой периферической активностью индекс инвазивности 0,92,8 у мышей . Во всех очагах встречаются лишь отдельные штаммы с индексом инвазивности более 5.