Роль сибирского подтипа вируса клещевого энцефалита в этиологии острых и хронических форм заболевания (в сопоставлении с дальневосточным подтипом)

• Автор: Безрукова, Екатерина Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 185 с. : 40 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список условных сокращений

Введение

Часть I. Обзор литературы.

Глава 1. Генетическая вариабельность

вируса клещевого энцефалита.

1.1. Организация и стратегия генома вируса клещевого энцефалита

1.2. Подтипы вируса клещевого энцефалита

1.3. Типирование генотипировапие вируса клещевого энцефалита

Глава 2. Многообразие клинических форм клещевого энцефалита.

2.1. Классификации клинических форм клещевого энцефалита.

2.2. Клинические особенности клещевого энцефалита
в разных частях нозоареала
2.3. Патоморфоз клещевого энцефалита.
2.4. Коммерческие тестсистемы
для диагностики клещевого энцефалита
методом иммуноферментного анализа
Глава 3. Клещевой энцефалит одна болезнь или три.
Часть II. Собственные исследования.
Глава 4. Материалы и методы
4.1. Штаммы, клоны, изоляты РНК вируса
клещевого энцефалита
4.2. Клинический материал
4.3. Секционный материал
4.4. Клещи.
4.5. Экспедиции и командировки.
4.6. Заражение тканевых культур
4.7. Титрование вируса.
4.8. Учет цитопатогенного действия.
4.9. Оценка инвазивных свойств и нейровирулентности
вируса клещевого энцефалита
4 Молекулярногенетические исследования
4 Иммуноферментный анализ.
4 Фосфоресцентный микроанализ ФОСФАН.
4 Статистическая обработка результатов исследований.
Глава 5. Генотипирование штаммов, клонов и изолятов РНК вируса клещевого энцефалита, выделенных от больных и погибших пациентов.
5.1. Объем вирусологических и
молекулярнобиологических исследований
5.2. Штаммы и изоляты РНК, выделенные при инаппарантной инфекции и острых нелегальных формах клещевого энцефалита
5.3. Штаммы и изоляты РНК, выделенные при очаговых
летальных формах клещевого энцефалита
5.4. Штаммы, выделенные при
хроническом клещевом энцефалите
Глава 6. Микстштаммы вируса клещевого энцефалита, изолированные от больных и погибших людей
Глава 7. Определение эффективности диагностикумов, изготовленных на основе штаммов дальневосточного подтипа, в зоне доминирования сибирского подтипа вируса клещевого энцефалита
по материалам Кемеровской области
7.1. Изучение современной генетической структуры природной популяции вируса клещевого энцефалита
и вирулентности штаммов Прокопьевский район, г.
7.2. Иммунологические исследования
7.3. Нетипичные случаи энцефалита на территории
Новосибирской и Кемеровской области в и годах.
Обсуждение .
Выводы.
Список литературы


Два коротких полипептида СТ1ГО и Рг являются лидерными аминокислотными последовательностями белков С и М соответственно, а третий короткий полипротеин 2К выщепляется из участка между полипротеинами 4 и 4. Таким образом, все три коротких белка ВКЭ не имеют собственных генов, а образуются в ходе процессинга. Ген, кодирующий белок М, называется М, так как в результате его непосредственной трансляции образуется не сам белок М, а его предшественник РгМ, который затем подвергается протеолизу с образованием белка М. Белки С, М и Е называются структурными белками, так как являются строительным материалом для сборки вириона. Структурные белки вириона. Белок С имеет молекулярную массу около кДа а. С и концы белка содержат большое количество основных остатков, имеют положительный заряд и поэтому специфически связываются с отрицательно заряженной вирусной РНК, формируя нуклеокапсид вириона 0. Центральный домен белка С содержит гидрофобный район, который, видимо, взаимодействует с клеточными мембранами и играет важную роль в сборке вириона. Незрелая форма белка С содержит терминальный гидрофобный домен полипептид, состоящий из а о. в ходе процессинга 2. Модификация сайтов протеолиза в этой области может определять скорость созревания вирусных частиц в инфицированных клегках. Белок М имеет молекулярную массу около 8 кДа а. М приблизительно кДа. М и входит в состав зрелой вирусной частицы. Он имеет относительно короткий эктодомсн а. Антитела к району а. М способны нейтрализовать вирусную инфекционность, это позволяет предположить, что белок М играет важную роль в проникновении вируса в клетки, и можно его использовать в целях иммунизации для формирования противовирусного иммунитета 7. Белок Е имеет молекулярную массу около кД 6 а. Белок Е формирует гомодимеры, располагающиеся параллельно липидной оболочке на внешней поверхности вирусных частиц 8. Согласно рентгеноструктурной модели, белок Е включает сформированный 15 а. БКОХУОЩСОХРСКО позиция 1 а. ВКЭ, а также и для вируса Западного Нила ВЗН 8. Белок Е является основным структурным мембранным белком ВКЭ, который опосредует связывание ВКЭ с клеточными рецепторами, определяет тропизм, вирулентность и обеспечивает образование вируснсйтрализующих антител 9. Среди прочих вирионных белков ВКЭ белок Е представляет особый интерес. Он определяет основные свойства и поведение вируса. Основными вируснсйтрализующими антителами в ходе иммунного ответа являются антитела к белку Е 9. Отсюда следует вывод, что основные антигенные свойства ВКЭ закодированы в гене Е. Кроме того, в Сконцевом участке белка Е есть два гидрофобных фрагмента, закрепляющих молекулу белка Е на внутренних мембранах клетки и в оболочке вириона, что делает эти фрагменты недоступными для действия иротеолитических ферментов 7. Белок Е также регулирует синтез вирусных РНК и способен блокировать его на этапе инициации 4. Рекомбинантный белок, содержащий последовательность 64 а. Е, обладает выраженными антигенными свойствами до 0 чувствительности и специфичности определения антиВКЭ 8. Нуклеотидная последовательность, соответствующая концу белка Е, весьма вариабельна и поэтому часто используется для генотипироваиия изолятов РК ВКЭ и проведения дифференциальной генетической диагностики. Неструктурные белки ВКЭ. Белок 1 имеет молекулярную массу около кД 3 а. Он содержит высококонсервативных остатков цистеина, которые участвуют в образовании дисульфидных связей. Хотя белок 1 связан с мембранами, он не содержит канонических трансмембрапных районов и достаточно легко отделяется от мембран при щелочных значениях или при обработке мочевиной. Белок 1 встречается в трех гликозилированных формах внутриклеточной, экспонированной на поверхности плазматической мембраны клетки и секретируемой во внеклеточное пространство. Они частично гидрофобны и периферически ассоциированы с мембраной. 1 включает в себя 3 потенциальных сайта гликозилирования, и в процессе секреции три димера объединяются в растворимую гексамерную форму гомодимер , 4, 8. Гомодимер имеет выраженный гидрофобный характер и связан с различными мембранами клетки.