Оценка состояния ценопопуляций некоторых редких видов растений Пермского края с использованием молекулярно-генетических методов

• Автор: Бельтюкова, Надежда Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.05, 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 232 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ПОПУЛЯЦИОННОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ РАСТЕНИЙ ДЛЯ РЕШЕНИЯ ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ БИОРАЗНООБРАЗИЯ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Понятие биоразнообразия и проблема его сохранения.

1.2. Популяция как объект изучения при сохранении биоразнообразия.

1.3. Применение молекулярногенетических методов при изучении

генетической структуры популяций редких и исчезающих видов растений

1.4. Популяционногенетические исследования редких и исчезающих видов растений на Урале.
1.5. Изучение особенностей биологии, популяционных параметров и молекулярногенетические исследования некоторых редких видов растений рода i и iii i i

ГЛАВА 2. РЕГИОН, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Регион исследований.

2.2. Объекты исследований
2.3. Методы исследований.
ГЛАВА 3. ЧИСЛЕННОСТЬ И ВОЗРАСТНАЯ СТРУКТУРА ЦЕНОПОПУЛЯЦИЙ ТРЕХ РЕДКИХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ ПЕРМСКОГО КРАЯ
3.1. Показатели численности и возрастной спектр ценопопуляций . vi.
3.2. Возрастная структура и показатели численности ценопопуляций . iii.
3.3. Численность и возрастная структура ценопопуляций
. i
ГЛАВА 4. СЕМЕННАЯ ПРОДУКТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ РЕДКИХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ
4.1. Семенная продуктивность двух видов рода i
4.2. Семенная продуктивность . i
ГЛАВА 5. АНАЛИЗ ГЕНЕТИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ ИССЛЕДОВАННЫХ ЦЕНОПОПУЛЯЦИЙ РЕДКИХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ
5.1. Генетическое разнообразие и межпопуляционная дифференциация ценопопуляций Я. vi.
5.2. Генетическая изменчивость и межпопуляционная дифференциация А. БЬгса.
5.3. Генетическое разнообразие и межпопуляционная дифференциация ценопопуляций . гап1фога.
5.4. Молекулярногенетическая идентификация А. vi.
ГЛАВА 6. КОМПЛЕКСНЫЙ АНАЛИЗ И ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ ИЗУЧЕННЫХ ЦЕНОПОПУЛЯЦИЙ НЕКОТОРЫХ РЕДКИХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ
6.1. Комплексный анализ состояния ценопопуляций А. чегпаШ
6.2. Комплексная оценка состояния ценопопуляций А. яЬгса
6.3. Комплексный анализ состояния ценопопуляций О. гапс1фогаЛЪЪ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В ДНКфингерпринтинге предусматриваются две основные стратегии I классический фингерпринтинг, основанный на ДНКгибридизации II ПЦРанализ, заключающийся в амплификации специфичных ДНКпоследовательностей i vi с помощью олигонуклеотидов праймеров и термостабильной ДНКполимеразы с последующим электрофоретическим разделением амплифицированных фрагментов ДНК и определением молекулярного полиморфизма посредством различных методов окрашивания полученных ДНКфрагментов Чесноков, . Изобретение полимеразной цепной реакции П1ДР, англ. i i способствовало созданию новых типов ДНКмаркеров ii . Метод ПЦР позволяет быстро и с небольшими затратами материальных ресурсов и времени получить более миллионов копий определенной последовательности ДНК, первоначально представленной одной или несколькими молекулами. Различные модификации метода ПЦР легли в основу создания разнообразных типов ДНКмаркеров, широко используемых в настоящее время в различных областях биологии и медицины Сулимова, . Одним из подходов к изучению сложных геномов растений является использование молекулярных маркеров, представляющих собой полиморфные последовательности ДНК, которые могут быть обнаружены с помощью методов, основанных на полимеразной цепной реакции ПЦР. Полиморфизм нуклеотидных последовательностей между отдельными образцами ДНК выявляется по присутствию или отсутствию конкретных полос в спектре фрагментов ДНК при электрофорезе. Отсутствие полосы может быть следствием точечных мутаций, вставок, делеций или инверсий в последовательности ДНКматрицы Гостимский и др. С введением молекулярных маркеров в практику биологических исследований появились новые возможности изучения генетического разнообразия, определения родства на внутри и межвидовом уровне. Использование молекулярных ДНКмаркеров открыло большие перспективы для детального картирования хромосом, идентификации генов, их клонирования, конструирования новых сортов растений и паспортизации сортов Гостимский и др. Соболев и др. Анисимова и др. Одним из наиболее распространенных методов выявления генетического полиморфизма у растений в недавнее время являлся метод ii i или произвольно амплифицируемая полиморфная ДНК . ii . Этот метод основан на использовании полимеразной цепной реакции со случайными одиночными 9членными праймерами с преобладающим составом и достаточно низкими температурами отжига. Обычно праймеры дают в среднем от 3 до продуктов амплификации . Участки ДНК, амплифицируемые методом, распределены по всему геному и представляюг собой в основном повторяющиеся последовательности, гомологичные праймеру, близко расположенные друг к другу на хромосоме и находящиеся в инвертированном состоянии. Преимуществом данного метода является техническая простота и быстрота в его осуществлении. метод не требует информации о последовательности ДНК и больших начальных количеств ДНК, что особенно важно при работе с редкими видами растений . Vi , . Несмотря на ряд преимуществ, главным ограничением данного метода выступает низкая воспроизводимость результатов фингерпринтов, связанная с довольно короткими последовательностями праймеров. Улучшение метода достигается с помощью увеличения точности отжига путем увеличения длины праймеров. К одному из таких методов относится использование Iмаркеров I i , или межмикросателлитный анализ iii . В этой методике, также как и в , используется один или несколько праймеров длиной нуклеотида. В данном случае праймеры состоят из тандемных коротких 24 нуклеотидных повторов и одного селективного нуклеотида на Зконце праймера iii , Календарь, Глазко, . Такие праймеры позволяют амплифицировать фрагменты ДНК, которые находятся между двумя достаточно близко расположенными микросателлитными последовательностями как правило, это уникальная ДНК. В результате амплифицируется большое число фрагментов, представленных на электрофореграмме дискретными полосами Iфингерпринтинг. Полученные паттерны ПЦРпродуктов видоспецифичны. В геномах растений и животных количество микросателлитных повторов очень велико, что делает этот метод удобным для генетического анализа.