Особенности взаимодействия эстераз насекомых и млекопитающих с производными 1,3,2-дигетерафосфоринана и тио- и дитиокислот фосфора, содержащими фрагменты N-ацилированных аминокислот

• Автор: Хрунин, Андрей Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений Введение

Основные ферментные системы, участвующие в метаболизме инсектицидов обзор литературы

Моноксигеназы

Эстеразы

Г лутатионвтрансферазы

Синергисты инсектицидов

Материалы и методы исследований

Материалы

Методы исследований

Биохимические методы исследований

Приготовление растворов и гомогенатов
Определение активности холинэстераз
Определение суммарной активности эстераз
Дискэлектрофорез в полиакриламидном геле
Токсикологические методы исследований
Определение токсичности соединений
Определение характера совместного действия соединений
в смеси с перметрином
Статистическая обработка результатов
Исследование чувствительности эстераз насекомых и
млекопитающих к производным 1,3,2д и гетера
фосфоринана
Антиэстеразная активность производных 1,3,2дигетерафосфоринана
Электрофоретическое исследование чувствительности эстераз к ингибирующему воздействию производных 1,3,2дигетерафосфоринана
Механизм фосфорилирования эстераз производными 1,3,2оксазафосфоринана
3.4. Токсичность производных 1,3,2дигетерафосфоринана и характер их совместного действия в смеси с перметрином Глава 4. Сравнительный анализ чувствительности эстераз насекомых и млекопитающих к производным тио и дитиокислот фосфора, содержащих фрагменты Мацилированных аминокислот
4.1. Антиэстеразное действие соединений содержащих фрагменты Ыацилированных аминокислот
4.2. Электрофоретическое исследование чувствительности эстераз к ингибированию тио и дитиофосфатами
4.3. Токсичность производных тио и дитиокислот фосфора, содержащих фрагменты Мацилированных аминокислот и характер их совместного действия в смеси с перметрином Заключение
Литература


А. и лаборатории фосфорорганических соединений ИНЭОС РАН д. Шипову А. Э., к. Генкиной Г. К., к. Артюшину О. И., рук. Мастрюковой Т. А. за предоставленные для работы материалы и консультации. ГЛАВА 1. Большинство ксенобиотиков, попадающих в организм, липофильные соединения, способные проникать через липидные мембраны и транспортироваться липопротеинами в жидкие среды организма. Метаболизм ксенобиотиков обычно включает две фазы, обе из которых поддерживаются комплексами относительно малоспецифичных ферментов. В первой фазе фаза несинтетического метаболизма в молекулу вводится полярная группа, которая хотя и повышает растворимость соединения, но, главным образом, превращает его в субстрат для второй фазы метаболизма. Во второй фазе фаза синтетического метаболизма измененное соединение взаимодействует с эндогенными субстратами с образованием водорастворимых конъюгатов, которые легко выводятся из организма. Хотя эта последовательность событий обычно представляет собой механизм детоксикации, в некоторых случаях промежуточные или конечные продукты являются более токсичными, чем исходные соединения. В процессах несинтетического метаболизма инсектоакарицидов одной из наиболее распространенных групп ксенобиотиков определяющую роль играют три группы ферментов гидролазы эстеразы, фосфатазы, амидазы, монооксигеназы и глутатионБтрансферазы , , . Большинство реакций первой фазы метаболизма катализируется системой микросомальных цитохром Р0зависимых монооксигеназ МО, локализованных в эндоплазматическом ретикулуме клетки. Данная система, состоящая из трех основных компонентов гемопротеина цитохрома Р0, НАДФНцитохром Р0 редуктазы и окружающих фосфолипидов эндоплазматической мембраны, изучена во многих органах и тканях насекомых , , , i, . Ключевой компонент МО системы цитохром Р0, работающий как терминальная оксидаза, представляет собой гемопротеин с молекулярной массой 0 0 Да, содержащий участки, связывающие кислород и молекулы различных субстратов. , , , i, iv, i . . Цитохром Р0 у насекомых обнаружен в жировом теле, стенках кишечника, мальпигиевых сосудах, каркасе , , . Показано его наличие и в нервной системе , , . Помимо эндоплазматического ретикулума, цитохром Р0 присутствует и в митохондриях , , . Второй компонент микросомальной МО системы НАДФНцитохром Р0 редуктаза флавопротеин с молекулярной массой около 0 Да, содержащий по одной молекуле флавинмононуклеотида и флавинадениндинуклеотида, опосредует перенос электронов с НАДФН на цитохром Р0 . . Посредством иммунологического анализа показано, что редуктазы насекомых очень близки между собой , , . Составляющие окружение фосфолипиды, главным образом, фосфатидилхолин, не участвуют непосредственно в передаче электрона, но способны оказывать на нее модулирующее влияние, а также стабилизировать иили индуцировать функционально активные конформации цитохрома Р0 , , , . Среди других компонентов микросом насекомых следует отметить цитохром , являющийся альтернативным донором второго электрона для цитохром Р0 поступающего с НАДН , . Показано, что цитохром Ь5 необходим для активации метаболизма ряда соединений, в том числе и инсектицидов, однако, вовлечение его в цитохром Р0 МО активность определяется участвующими в реакции изоформами цитохрома Р0 , , , . Восст. Р0 окисл. Цит. Каталитический цикл цитохрома Р0 выглядит следующим образом связывание субстрата в активном центре вызывает переход из низкоспинового состояния с шестикоординационным железом ферриформа в высокоспиновое с пятикоординационным железом и последующее присоединение электрона с образованием ферроформы, способной связывать молекулу кислорода одноэлектронное восстановление кислородного аддукта, последнего стабильного интермедиата в цикле, приводит к высвобождению молекулы воды Иванов и др.