Молекулярный анализ гена BRCA1 у больных семейными формами рака молочной железы и яичника в Санкт-Петербурге

• Автор: Тихомирова, Оксана Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 113 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Цель работы
Задачи

Научная новизна

Теоретическая и практическая значение работы

Положения, выносимые на защиту

Апробация работы

Личный вклад диссертанта

Структура и объем диссертации
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Статистика заболеваемости раком молочной железы
1.2 Риск развития рака молочной железы у носительниц мутаций в гене ВЯСА1 в течение жизни.
1.3 Особенности семейных форм рака молочной железы
1.4 Возможные механизмы развития рака при мутациях в генах опухолевых супрессоров.
1.5 Тканеспецифичность проявления мутаций в гене ВЕСА 1
1.6 Другие заболевания, связанные с мутациями в генах ВЯСА1 и ВВСА
1.7 Роль гена ВЯСА1 в развитии рака молочной железы в сопоставлении с другими генами.
1.8 Наследственная предрасположенность к раку молочной железы
1.9 Структура гена и белка ВЯСА 1
1. ВЯСА1 и репарация ДНК
1. Роль 1 в регуляции транскрипции
1. Роль 1 в росте и дифференцировке клеток
1. Мутации гена 1
1. Спектр мутаций в гене 1 в разных популяциях
1. Поиск мутаций в гене 1 в России
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Пациенты
2.2.1 Выделение ДНК из свежей и замороженной крови по методу Кюнкеля
Выделение ДНК из свежей крови
Выделение ДНК из замороженной крови
2.2.2 Электрофорез ДНК в агарозном геле
2.2.3 Полимеразная цепная реакция
2.2.4 Электрофорез ДНК в полиакриламидном геле
2.2.5 Электрофорез в ПААГ в денатурирующих условиях
2.2.6 Гетеродуплексный анализ
2.2,7. Рестрикционный анализ
2.2.8 Окрашивание образцов ДНК
2.2.8.1 Окрашивание бромистым этидием
2 2.8.2 Окрашивание нитратом серебра
2.2.9 Клонирование
2.2.9.1 Лигирование
2.2.9.2 Трансформация .i
2.2. Тестирование трансформантов путм а комплементации
2.2. Идентификация рекомбинантов путем амплификации клонированных последовательностей.
2.2. Выделение плазмидной ДНК
2.2. анализ разделение в трисглициновой системе
2.2. Автоматический флуоресцентный анапиз
2.2. Секвенирование ДНК
2.2. Компьютерный анализ и статистическая обработка данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Мутация А с. А
3.2 Мутация 3 с.
3.3 Мутация i .i
3.4 Мутация 2V с.
3.5 Полиморфизм 1 с. СТ
3.6 Полиморфизм с.ТС
3.7 Полиморфизм 6 с.
3.8 Поиск мутаций в 5, и экзонах гена 1
3.9 Заключение
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


От 5 до всех случаев РМЖ составляют семейные формы, из которых лучше всего охарактеризованы и наиболее часто встречаются случаи, когда прослеживается связь заболевания с мутациями в генах ВЯСА1 и ВЯСА2. Несмотря на то, что частота встречаемости патологических мутаций в гене ВКСА1 оценивается как 10 1 Баранов и др. Поскольку эффективность терапии и хирургии определяется в значительной степени тем, насколько рано выявлено заболевание, идентификация носителей мутаций в гене ВЯСА1 и последующее диспансерное наблюдение за этими лицами позволяет спасти им жизнь. . В настоящее время в мире известно более мутаций в гене 1 Ii , I. Встречаемость вариантов последовательности гена 1 сильно отличается между разными популяциями и этническими группами, и в каждом регионе есть свои наборы мажорных и минорных мутаций, предрасполагающих к заболеванию. Поэтому только знание национальных и этнических особенностей спектров мутаций может позволить наладить ДНКдиагностику для выявления группы высокого риска развития рака молочной железы. Эффективность лечения рака молочной железы во многом зависит от своевременной диагностики. ДНКдиагностика позволяет выявить предрасположенность к РМЖ и осуществить постановку на учет к онкологу еще до возникновения клинических проявлений заболевания. Б связи с постоянным ростом заболеваемости РМЖ проблема ранней диагностики приобретает чрезвычайную актуальность. Целью работы было изучение спектра мутаций гена 1 у больных семейными формами РМЖ и РЯ из числа жителей СанктПетербурга. Изучить встречаемость мутации i в м экзоне гена 1 у пациентов с раком яичника. Идентифицировать обнаруженные мутации методом секвенирования ДНК. Разработать быстрые методы детекции обнаруженных мутаций. У больных с семейными формами рака молочной железы и яичника в СанктПетербурге идентифицировано четыре мутации в гене ВЯСА1 тС, с1е1А, с1е и А2У. Мутация тС выявлена более чем у трети обследованных больных с раком яичника. Две мутации бе1А и бе, обнаруженные в настоящей работе, являются новыми, никем ранее в мире не описанными. Их идентификация свидетельствует о том, что значительная доля мутаций гена ВЯСА1 в России придется на неизвестные в мире мутации. Впервые в России обнаружена миссенсмутация 1 и показано, что она является редким полиморфным вариантом, не ассоциированным с заболеванием. В СанктПетербурге впервые выявлены два сцепленных друг с другом полиморфизма , Р1Ь, ранее известных во многих странах мира, и определена частота аллелей этих полиморфных маркеров. Теоретическая и практическая значение работы. В результате работы выявлены новые мутации в гене ВЯСА1, характерные только для СанктПетербурга, а также показано, что миссенсмутация является редким полиморфным вариантом, не ассоциированным с заболеванием. Эти данные следует учитывать при проведении ДНК диагностики для выявления групп высокого риска развития рака молочной железы и рака яичника. Теоретическим выводом из работы является установленная специфика спектра мутаций гена I на СевероЗападе России. Положении, выносимые на защиту. В СанктПетербургской популяции в гене 1 распространены как известные в других популяциях мира мутации, так и специфичные для России. Из числа идентифицированных изменений последовательности гена 1 некоторые, такие как , 3, являются вероятной причиной предрасположенности к РМЖ, а другие варианты, такие как 6, 1 и , не ассоциированы с повышенным риском развития заболевания. По теме диссертации опубликовано научных работ в отечественных журналах, а также в сборниках по материалам конференций. Материалы работы докладывались на следующих конференциях 7ая Всероссийская медикобиологическая конференция молодых исследователей Человек и его здоровье СанктПетербург, , юбилейная научная конференция молодых ученых СевероЗападного региона, посвященная летию Российской академии медицинских наук СанктПетербург, , Петровские чтения, Конференция по фундаментальной онкологии СанктПетербург, , , Молекулярная генетика онкологических заболеваний Новосибирск, .