Состав и обмен полярных липидов морских организмов

• Автор: Васьковский, Виктор Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 325 c. : ил

Для обнаружения холинсодержащих и других соединений с четвертичными аммониевыми группировками использовали реактив Драгендорфа, приготовленный по методу . Чувствительность реагента несколько увеличивается, если в него добавить на больше СНдСООН, чем указано в прописи, или после обработки реактивом Драгендорфа опрыскать пластинки хлорной кислотой. Стероидные соединения обнаруживали по методу . Последовательная обработка хроматограмм различными реагентами, при идентификации липидов удобно проводить последовательную обработку хроматограмм для специфического и общего обнаружения компонентов смеси а нингидрином для обнаружения аминосодержащих липидов б реактивом Драгендорфа холинсодержащие липида в реагентом на фосфолипида Л 2. После каждой операции результаты фиксируют фотографируют, срисовывают хроматограмму в рабочий журнал или зарисовывают пятна на обратной стороне пластинки. Определение обших и нейтральных липидов. Количество липидов в экстрактах определяли взвешиванием высушенных в вакууме до постоянного веса аликвот экстракта или же модифици
рованным методом количество бихромата калия в реагенте было увеличено до 2,3 г на I л серной кислоты. Этот же метод использовали в ряде опытов для количественного анализа нейтральных липидов после разделения ТСХ. Для построения калибровочных кривых брали липидные экстракты или липиды, которые анализировали количественно или максимально близкие к ним по составу. Для анализа нейтральных липидов, разделенных микроТСХ, применяли модифицированный нами метод . Пластинки перед хроматографией липидов очищают, хроматографируя в двух направлениях в системе гексансерный эфирСН3СН 1. Зону силикагеля, в которую собирается при этом грязь с пластинки, удаляют микрошпателем. После разделения липидов хроматограмму высушивают не менее мин в токе теплого воздуха. Затем ее тщательно опрыскивают серной кислотой в метаноле, следя за тем, чтобы весь сорбент был равномерно смочен, но не было на нем потеков растворителя. Пластинку нагревают 5 мин на электроплитке, поверхность которой имеет температуру . После охлаждения окрашенные зоны силикагеля переносят с помощью микрошпателя в микропробирки, приливают по 0,5 мл М серной кислоты, содержимое тщательно перемешивают с помощью вибратора. Пробирки нагревают минут на кипящей водяной бане. После охлаждения силикагель осаждают центрифугированием при е в течение 5 мин, надосадочную жидкость фотометрируют при 5 нм. Для построения калибровочных кривых используют очищенные препапараты соответствующих веществ жирных кислот, триглицеридов, холестерина и т. Готовят их растворы, содержащие 0,,бмкг вещества в I мл хлороформа. На пластинки в стартовые зоны наносят по 4 полоски следующих объемов растворов 5, , и мкл. Хроматографию и дальнейшую обработку проводят как описано выше. При анализе липидов на хроматограмму наносят 4 полоски анализируемой смеси и полоски стандартов для проверки калибровочной кривой. В.2. Определение ФосФолишшов. Для определения количества фосфолипидов в экстрактах и отдельных классах фосфолипидов после разделения микроТСХ анализировали содержание фосфора в аликвотах экстракта или зонах силикагеля с пластинок, содержащих фосфолипида. В зависимости от количества веществ определение фосфора проводили в конечном объеме 5 мл вариант I или 0,5 мл вариант П. Вариант X. К аликвоте липидного экстракта, упаренной в мм стандартной цробирке из термостойкого стекла, или силикагелю с фосфолипидами приливают 0,2 мл хлорной кислоты и пробу нагревают в блоке для сожжения в течение мин при . После охлаждения в пробирку добавляют 4,8 мл рабочего реактива I, приготовленного из универсального реагента 2. Смесь в пробирке перемешивают с помощью вибратора и пробирки помещают на кипящую водяную баню, где их выдерживают мин, затем охлаждают, центрифугируют если анализируют пробу с силикагелем и фотометрируют при 5 нм. Вариант Д. К пробе в микропробирке добавляют 0, мл хлорной. Отличие заключается в том, что в микропробирки после сожжения добавляют 0, мл рабочего реактива П 5 мл универсального реагента смешивают с мл 1н серной кислоты, объем смеси доводят до 0 мл дистиллированной водой.