Разработка культуральных моделей нервной ткани и их использование для изучения воздействия гиполипидемических препаратов на клетки мозга человека

• Автор: Павлов, Олег Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1994
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 139 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ингибиторы ГМГКоА редуктазы и пробукол как представители наиболее эффективных современных антигиперхолестеринемических препаратов

1.2. Влияние гиполипидемических препаратов на ЦНС I viv

1.3. Теоретические основы нейротропного действия гиполипидемических препаратов

1.3.1. Проникновение липофильных соединении через гематоэнцефэлический барьер

1.3.2. Особенности метаболизма холестерина в ЦНС

1.4. Культура нервной ткани как адекватная модель для изучения нейротропных эффектов гиполипидемических препаратов

1.4.1. Способы культивирования клеток нервной ткани и их применение

1.4.2. Бессывороточное культивирование клеток нервной ткани

1.4.3. Клетки животных и клетки человека
1.5. Заключение
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.2. Методы
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1.1. Получение читыx,, нейрональных культур
3.1.2. Выбор оптимальных условий культивирования
астроцитов человека
3.1.3. Выбор оптимальных условий культивирования для определения уровня синтеза холестерина в астроглиальных клетках человека
3.2.1. Влияние ингибиторов ГМГКоА редуктазы и пробукола на синтез холестерина в клетках ЦНС человека
3.2.2. Влияние ловастатина и пробукола на активность ЛНПрецепторов в астроглиальных клетках человека
3.2.3. Влияние ловастатина и пробукола на пролиферацию иммортализованных астроцитов АБСЬ
3.2.4. Влияние ловастатина и пробукола на нейритогенез и выживаемость клеток в чистых культурах нейрональных агрегатов
3.2.5. Ультраструктурный анализ эксплантатов головного мозга человека, культивируемых в присутствии ловастатина и пробукола
3.2.6. Совместное влияние ловастатина и пробукола на чистые культуры нейрональных агрегатов
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Вместе с тем, современные методы культивирования позволяют получить различные типы клеточных культур и разработать на их основе адекватные модели для изучения различных аспектов функционирования клеток мозга человека и нейротропных эффектов фармакологических препаратов, проникающих в мозг. Целью настоящего исследования явилось изучение влияния терапевтических концентраций ловастатина и его аналогов, а также пробукола на культивируемые i vi клетки ЦНС человека. ЦНС человека, в частности отдельные стадии метаболизма холестерина, пролиферативную активность, рост и выживаемость, ультраструктурнуга организацию. Разработаны новые методы получения нейронов и астроцитов ЦНС человека, способных к длительному существованию в условиях клеточной культуры. Выявлен нейротокоический эффект ловастатина на культуры клеток мозга человека при концентрациях препарата, которые присутствуют в организме пациентов в процессе лечения. Установлено, что пробукол стимулирует рост и дифференцировку нервных клеток, а также увеличивает срок их жизни в культуре. Показано, что пробукол заметно нивелирует негативные цитотокоические эффекты ловастатина в культурах нейронов человека при комбинированном применении этих препаратов. В процессе исследования были разработаны оригинальные методы получения и долговременного культивирования клеток ЦНС человека. ЦНС человека и стимулирующее влияние пробукола на рост и развитие нейрональных клеток. Полученные в ходе данного исследования результаты могут быть использованы для выработки рекомендаций по практическому применению гиполипидемических препаратов с учетом их возможного действия на центральную нервную систему человека. Разработанные в ходе исследования культуральные модели могут быть использованы для тестирования новых лекарственных препаратов на стадии предклинических испытаний, что позволит существенно сократить сроки их внедрения в практику здравоохранения. Данные модели дают возможность за относительно короткий срок обнаружить возможные побочные эффекты препаратов, для выявления которых в клиннике требуются годы. Обнаруженный нейритстимулирующий эффект пробукола после дополнительных исследований может быть использован для стимуляции регенерационных процессов в нервной системе. Научные результаты, представленные в диссертации, были доложены на II Всесоюзном симпозиуме Возбудимые клетки в культуре ткани Пущино, г. Сиднея Австралия, 24 февраля г. Тезисы работы были опубликованы в сборнике Возбудимые клетки в культуре ткани и Трудах Австралийского общества нейронаук i i i i, , V. Диссертация изложена на 9 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, их обсуждения и выводов. Работа содержит рисунок и 8 таблиц. Список литературы включает 9 источников. Применение гиполипидемических препаратов для лечения сердечнососудистых заболевании, связанных с нарушением липидного обмена и высоким содержанием холестерина в крови, в настоящее время приняло массовый характер. Активно ведутся разработки ноеых лекарственных препаратов, способных аффективно понижать содержание липидов, в первую очередь холестерина, в крови. Одним из наиболее эффективных и перспективных классов антигиперхолестеринемических препаратов в настоящее время считается группа ингибиторов ЗгидроксиЗметилглутарил коэнэим А ГМГКоА редуктазы. Некоторые соединения из этой группы, называемые также статинами или монаколинами, которые являются структурными аналогами, представлены на Рис. Наиболее известными среди них являются компактин мевастатин, ловастатин мевинолин, Мевакор, симвастатин, правастатин Рис. Особенно широкое распространение получил ловастатин, который используется в клинической практике уже в течение многих лет. Например, в США только с по гг. Механизм действия этого класса препаратов достаточно хорошо изучен. Вс они являются конкурентными ингибиторами ГМГКоА редуктазы, ключевого фермента в биосинтезе холестерина Рис. Реакция, катализируемая этим ферментом, является лимитирующим звеном в синтезе холестерина и проходит в две стадии с образованием промежуточного продукта С3. МЭНАКОЛИН х осснссн. Рис.