Структурно-аналитическое исследование церулоплазмина белых крыс

• Автор: Захарова, Елена Тихоновна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Ленинград
• Количество страниц: 188 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I. ГЕНЕТИЧЕСКИ ОБУСЛОВЛЕННЫЕ НАРУШЕНИЯ ОБМЕНА МЕДИ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ

1.1. Биологическая роль меди и медьсодержащие

белки .

1.2. Нарушения обмена меди

1.3. Открытие ЦП, его распространение в животном мире

ГЛАВА П. ФИЗИКОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЦП ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ

2.1. Молекулярная масса и другие физикохимические параметры ЦП .

2.2. Каталитическая оксидазная активность ЦП .

2.3. Влияние ионов на каталитическую активность
2.4. Структурная организация молекулы ЦП человека одноцепочечная структура и доменное строение .
2.5.Генетический полиморфизм. Структурные варианты ЦП.
2.6. Молекулярная гетерогенность ЦП
2.6.1. Углеводы в составе молекулы ЦП
2.7. Аминокислотный состав ЦП.
2.8. Типы ионов ыеди,ыедьсвязывающие.сайты.Эволюция ЦП
2.9. Иммунологический анализ ЦП.
ГЛАВА Ш. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ФУНКЦИИ ЦП
3.1. Ферроксидазная активность ЦП КФ.13.1.
3.2. Медьтранспортная функция ЦП.
3.3. Антиоксидантные свойства ЦП .
3.4. Регуляция уровня биогенных аминов
3.5. Роль ЦП в гомеостазе меди .
3.6. Полифункциональность ЦП .
ГЛАВА 1У. ОБМЕН ЦП В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ
4.1. Биосинтез,регуляция и катаболизм ЦП
4.2. Молекулярная организация гена ЦП крысы .
4.3. Последовательность реакций котрансляционного созревания ЦП крысы.
4.4. Дефект синтеза,созревания и структуры ЦП при ГЛД ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА У. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
5.1. Выделение ЦП крысы и человека .
5.2. Седиментационный анализ ЦП
5.3. Электрофоретический анализ ЦП .
5.4. Определение оксидазной активности ЦП
5.5. Получение апоЦП
5.6. Получение специфических антител к ЦП крысы и человека .
5.7. Иммунодиффузия.
5.8. Иммуноэлектрофорез
5.9. Восстановление и карбоксиметилирование ЦП .
5 Пептидные карты ЦП крысы и человека
5 Получение йодированных производных белков и их фрагментов .
5 Тонкослойные пептидные карты йодированных белков
5 Аминокислотный анализ белков .
5 Определение цконцевых аминокислотных остатков
5 Определение содержания триптофана и тирозина
5 Определение свободных сульфгидрильных групп
5 Определение углеводного состава
5 Определение содержания меди
5 Определение содержания белка .
5 Выделение фракции аппарата Гольджи из клеток печени крысы
5 Иммунологический анализ ЦП из аппарата Гольджи.
5 Анализ ЦП методом ЭПРспектроскопии
ГЛАВА У1. ВЫДЕЛЕНИЕ И ФИЗИКОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА КРЫСЫ
6.1. Выделение и очистка ЦП крысы
6.2. Определение удельной оксидазной активности ЦП крысы.
6.3. Определение молекулярной массы ЦП крысы .
6.4. Идентификация апоформы белка в препаратах ЦП крысы
6.5. Химический состав ЦП крысы
6.6. Сравнительный анализ ЦП крысы и ЦП человека методом пептидных карт на бумаге .
6.7. Исследование ЦП крысы и ЦП человека и фрагментов этих белков методом тонкослойных пептидных карт йодированных гидролизатов .
6.8. Каталитически активная форма ЦП из аппарата Гольдки печеночных клеток крысы
6.9. Ферментативные свойства ЦП крысы
6 Иынунохимический анализ ЦП крысы, ЦП человека
и ЦП крысы из аппарата Гольджи
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Уже низкие концентрации СИ ионов вызывают инактивацию АТФазы микросомальных мембран 1. Медь ингибирует также некоторые ферменты гликолиза . Тот факт, что медь является с одной стороны необходимым для жизни элементом, а с другой стороны, что ее избыток токсичен, заставляет с уверенностью предположить существование физиологических механизмов гомеостаза этого элемента в организме человека и животных. Гомеостаз осуществляется путем контроля как всасывания, так и экскреции металла, его транспорта, хранения и детоксикации, причем эффективность, с которой поддерживается этот баланс, видоспецифична. Так, например, собаки очень чувствительны к отравлению медью. Было обнаружено, что сывороточный альбумин собак не содержит гистидина в третьем положении от кконца, и, в силу этого не способен связывать медь 6. В живых метках и жидкостях тела медь формирует стабильные комплексы с органическими молекулами, ассоциируясь прежде всего с белками, затем с аминокислотами, пуринами, пиримидинами, нуклеотидами, ДНК и РНК. Ионы меди соединяются в полости тонкого кишечника с определенными аминокислотами, такими как треонин, гистидин и глутамин , после чего коыплексированная медь активно транспортируется через слизистую оболочку тонкого кишечника. Часть всосавшейся меди соединяется в ворсинках кишечника с металлотионеином, образуя меркаптиды с сульфгидрильными группами. Симеталлотионеин кишечника диссоциирует, и металл диффундирует или прямо в плазму, где образует комплексы с альбумином и аминокислотами 5 тотальной меди плазмы, или выводится с фекалиями рис. Рис. Схематическая диаграмма, иллюстрирующая всасывание меди в кишечнике . АК аминокислоты Ш макромолекулы. После всасывания в тонком кишечнике, медь распределяется по всему телу. Используя радиоактивно меченую медь и компьютерный анализ, Наге1П0 с соавторами 5 исследовали метаболизм меди на изолированной перфузируемой печени крысы и постулировали по крайней мере три различных процесса, протекающих в печени I подготовка меди для экскреции в желчь 2 временное хранение меди и 3 включение меди в ЦП рис. Рис. Схематическая диаграмма, иллюстрирующая гомеостаз меди в нормальных гепатоцитах . Гомеостаз меди в печени достигается в первую очередь контролем экскреции меди с желчью, которая содержит как низкомолекулярные комплексы меди с аминокислотами и пептидами, так и макромолекулярные медьсодержащие комплексы результат катаболизма асиалоЦП и других медьсодержащих белков в лизосомах 0. Детоксикацию и хранение избытка меди связывают с металлотионеином, который содержит большую часть меди цитозоля гепатоцитов . Третьей функцией печени в поддержании гомеостаза меди в организме является синтез ЦП в гепатоцитах, с включением меди в этот белок и последующим возвращением ее в кровь в составе ЦП, что представляет важное звено в метаболизме меди у млекопитающих. В сутки в организме здорового человека разрушается 4. ЦП на I кг веса тела, что в пересчете в среднем на массу взрослого человека соответствует выведению 12 мг меди. Эта величина указывает на существование нулевого баланса меди в организме и подтверждает участие ЦП в поддержании гомеостаза меди . Сама медь или специфические внутриклеточные комплексы ионов меди с органическими молекулами могут регулировать важные биохимические процессы, контролируя биосинтез белка или экспрессию активности фермента. В печени, например, содержание Симет а ллотионеина в цитозоле уменьшается во время дефицита меди и значительно возрастает при кормлении крыс медью . Дефицит меди вызывает уменьшение количества лизилоксидазы в аорте, а в печени снижение количества медьсодержащих ферментов цитохромоксидазы и супер окси дди см ут аз ы. Нарушения обмена меди. В настоящее время известно несколько наследственных заболеваний человека болезнь Менкеса болезнь курчавых волос, болезнь ВильсонаКоновалова и животных болезнь Бедлингтонских терьеров, при которых патологические симптомы связаны с нарушением гомеостаза меди в организме.