Молекулярно-генетический анализ моногенных форм атеросклероза и рака молочной железы у жителей Санкт-Петербурга

• Автор: Мандельштам, Михаил Юрьевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 241 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Цель исследования

Задачи работы

Научная новизна

Теоретическое значение работы

Практическое значение работы

Положения, выносимые на защиту

Личный вклад автора

Апробация
Публикации
Структура и объем диссертации
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Семейная гипсрхолсстеринемия
1.1.1. Общая характеристика заболевания
1.1.2. Риск развития ишемической болезни сердца у носителей мутаций в гене рецептора ЛНП
1.1.3. Место семейной гипсрхолсстсринсмии среди моногенных гиперхолестеринемий
1.1.4. Рецептор липопротеинов низкой плотности ключевой белок метаболизма холестерина в организме человека. Механизм атеросклероза при семейной гипсрхолсстсринсмии
1.1.5. Диагностика семейной гиперхолестеринемии. Особенности и трудности разных видов диагностики
1.1.6. Структура гена рецептора ЛНП и кодируемого им белка регуляция работы гена взаимодействующие с рецептором белки
1.1.7. Спектры мутаций гена рецептора ЛНП в разных этнических группах 1.2. Рак молочной железы, обусловленный мутациями в гене
1.2.1. Особенности семейных форм рака молочной железы
1.2.2. Риск развития рака молочной железы у носительниц мутаций
в гене ВЯСА1 в течение жизни
1.2.3. Структура гена ВЯСА1 и кодируемого им белка
1.2.4. Белок ВЯСЛ1 ключевой участник репарации двунитевых разрывов в ДНК
1.2.4.1. Механизм развития заболевания при дефектах ВЯСА 1
1.2.4.2. Тканеспецифичность возникновения опухолей при
мутациях в гене ВЯСА 1
1.2.5. Роль гена ВЯСА1 в развитии рака молочной железы в сопоставлении с другими генами
1.2.6. Современные подходы к клинической диагностике и профилактике семейных форм рака молочной железы
1.2.7. Спектры мутаций гена ВЯСА1 в разных этнических группах
1.3. Молекулярная диагностика семейной гиперхолестеринемии и семейных форм рака молочной железы сравнительный аспект
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Пациенты
2.2. Выделение ДНК
2.3. Молекулярное клонирование
2.4. Амплификация и анализ ДНК
2.4.1. Полимеразная цепная реакция
2.4.2. Идентификация мутации с. 8
в гене АРОВ с помощью сайтнаправленного мутагенеза
2.4.3. Электрофорез продуктов амплификации ДНК в
полиакриламидном геле ПААГ
2.4.4. Протокол получения и идентификации гетеродуплексов для определения мутаций 5 и i в гене 1
2.4.5. Проведение анализа конформационного полиморфизма однонитевых фрагментов ДНК анализ
2.4.6. Окрашивание ДНК серебром
2.4.7. Проведение электрофореза в агарозном геле
2.4.8. Секвенирование и анализ последовательностей ДНК
2.5. Компьютерный анализ и статистическая обработка данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Изучение спектра мутаций в гене рецептора ЛНП и в гене 1 в популяции СанктПетербурга. Общая стратегия исследования
3.2. Поиск мутаций в гене рецептора ЛНП. Особенности идентификации отдельных мутаций в гене рецептора ЛНП
3.3. Идентификация и изучение частоты встречаемости полиморфных маркеров в гене рецептора ЛНП
3.4. Изучение встречаемости широко распространенной мутации
в гене АРОВ у больных семейной гиперхолестеринемией
СанктПетербурга
3.5. Поиск часто встречающихся в мире мутаций в гене
5, i и
3.6. Характеристика мутаций, найденных в одиннадцатом экзоне
гена 1
3.7. Идентификация и изучение частоты встречаемости полиморфных маркеров в гене
3.8. Подготовка Интернетресурсов по молекулярной генетике семейной гиперхолестеринемии и наследуемых форм рака молочной железы
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Значение мутаций в гене рецептора ЛНП для развития семейной гиперхолестеринемии
4.2. Значение обнаруженных мутаций в гене для развития рака молочной железы
4.3. Особенности спектра мутаций гена рецептора ЛНП и гена 1 России и СанктПетербурга
4.3.1. Сравнение спектра мутаций гена рецептора ЛНП в СанктПетербурге и в других популяциях мира
4.3.2. Сравнение спектра мутаций гена 1 в СанктПетербурге и в других популяциях мира
4.3.3. Сравнение генетического разнообразия гена рецептора ЛНП и гена I
4.4. Особенности и трудности ДНКдиагностики семейной гиперхолестеринемии и семейных форм рака молочной железы. Практическое значение работы
4.4.1. О наличии преобладающих мутаций в гене рецептора ЛНП и в гене
4.4.2. Эффективность ДНКдиагностики
4.4.2.1. Возможный вклад других локусов в развитие моногенных форм гиперхолестеринемии и рака молочной железы у жителей СанктПетербурга
4.4.2.2. Проблемы эффективности поиска мутаций внутри генов
4.4.3. Результаты консультирования в семьях пробандов. Перспективы в диагностике семейной гиперхолестеринемии и
семейных форм рака молочной железы
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Уровень общего холестерина у пациентов с гетерозиготной формой СГ составляет мгдл в норме до 0 мгдл, а у редко встречающихся гомозиготных больных он повышен еще более сильно и варьирует между 0 и мгдл i . Уровень триглицеридов у пациентов с СГ обычно остается нормальным Табл. Некоторое снижение содержания холестерина липопротеинов высокой плотности ЛВП и повышение концентрации липопротеина а у больных СГ не являются диагностически ценными признаками для диагностики заболевания. Для лиц с СГ характерно развитие сухожильных ксантом, в особенности ксантом в области ахилловых сухожилий и пястнофаланговых суставов присутствие первых часто является важнейшим признаком для постановки диагноза СГ. Кроме того, у многих пациентов с СГ присутствуют липоидные дуги роговицы и ксантелазмы век. Таблица 1. Уровень липидов плазмы крови у пациентов с гетерозиготной формой СГ с подтвержденными мутациями в гене рецептора ЛНП и в группе контроля по материалам исследования в Греции МШабоБ е а. Различия с р0, считаются статистически достоверными. Частота гетерозиготной формы СГ составляет в большинстве популяций людей белой расы 1 случай на 0 обследованных, а гомозиготной . Заметно более высокая частота СГ наблюдается в изолированных этнических группах, среди потомков буров ЮАР, известных как африканеры i, . Ливана , . Максимальная частота гетерозиготной формы СГ, достигающая 1 случая на обследованных, наблюдается у евреевжителей Йоханнесбурга . В СанктПетербурге значительное число больных СГ было выявлено при популяционных исследованиях липидных показателей жителей города, проведенных под руководством академика РАМН А. Н. Климова Эпидемиология и факторы риска ишемической болезни сердца, . Однако в России в целом отсутствуют данные о распространенности СГ, и мы можем лишь предполагать, что встречаемость заболевания в нашей стране не отличается от наблюдаемой в большинстве смешанных популяций частоты . Риск развития ишемической болезни сердца у носителей мутаций в гене рецептора ЛНП. Среди пациентов мужского пола, перенесших инфаркт миокарда в возрасте до лет, около 5 имеют гетерозиготную форму СГ. Климов, Никульчева, . Эти данные свидетельствуют о существенном повышении риска развития инфаркта миокарда у пациентов с СГ. Популяционные оценки вероятности развития инфаркта миокарда у пациентов с СГ к разному возрасту приведены в таблице 2. Средний возраст развития ИБС и связанной с ней сердечнососудистой катастрофы у мужчин с СГ составляет около лет, у женщин лет . Табл. Кроме того, при сравнении продолжительности жизни пациентов с СГ и их родственников без этого заболевания, хорошо видно, что продолжительность жизни первых заметно меньше Табл. Особенно значительно увеличение риска осложнений коронарного атеросклероза у молодых пациентов с СГ. Первые работы iii i i, показали, что риск фатального инфаркта в возрастном интервале между и годами увеличен приблизительно в 0 раз у пациентов с гетерозиготной формой СГ по сравнению с лицами того же возраста из популяции. Относительный риск смерти изза ИБС у пациентов с СГ в возрастном интервале лет считался повышенным 8кратно по сравнению с лицами аналогичного возраста из популяции. Однако после года широкое применение статиновой терапии позволило снизить степень риска ранней смерти у пациентов с СГ в том же возрастном интервале до 3,7 раза по сравнению с общепопуляционным iii i i, . Поскольку проявления ИБС возможны у пациентов с гетерозиготной формой СГ уже в относительно молодом возрасте, а своевременное начало статиновой терапии существенно снижает вероятность развития у них сердечнососудистых катастроф, актуально развитие подходов к ранней диагностике заболевания. Таблица 2. Вероятность развития инфаркта миокарда к разному возрасту у пациентов с СГ из Великобритании. Нет данных Нет данных . Нет данных ,5 Нет данных . Нет данных Нет данных Нет данных . Таблица 3. Средний возраст развития проявлений ИБС у пациентов с СГ в разных исследованиях. Канада . Франция ,2 ,1 . Финляндия Vi . Таблица 4. Средний возраст смерти пациентов с СГ и их родственников без СГ .