Молекулярная генодиагностика лейкоза крупного рогатого скота

• Автор: Зиннатов, Фарит Фатихович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 120 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 .Лейкоз крупного рогатого скота.

1.2.Возбудитель болезни лейкоза крупного рогатого скота.

1.2.1 Химический состав и геном вириона

1.2.2.Устойчивость вируса

1.2.3Антигенная структура

1.2.4. Патогенез лейкоза крупного рогатого скота.

1.3. Эпизоотическое состояние по лейкозу в Российской Федерации

1.4. Эпизоотическое состояние по лейкозу в Республике Татарстан.

1.5. Вирус иммунодефицита на фоне лейкоза крупного
рогатого скота
1.6. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота
1.6.1. Выявление больных коров гематологическим методом
1.6.2.Патоморфологический метод исследования
при лейкозе крупного рогатого скота
1.6.3. Полимеразная цепная реакция
1.6.4. Полимеразная цепная реакция в диагностике лейкоза крупного рогатого скота.
ГЛАВА 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 .Материалы исследования.
2.2.Реактивы и оборудование.
2.3. Полимеразная ценная реакция
2.4. Методы исследования
2.5. Рестрикционный анализ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 .Сравнение различных ПЦР Гест систем для обнаружения провирусной ДНК вируса лейкоза крупного рогатого скота.
3.2. Исследование крови коров и телят с применением метода ПЦР.
3.3.Исследования проб молока, полученных из неблагополучных по лейкозу крупного рогатого скота хозяйств РТ.
ЗАТипирование вируса лейкоза крупного рогатого скота
3.5.Исследование сывороток крови серопозитивных коров на обнаружение циркулирующих иммунных комплексов ЦИК с провирусной ДНК ВЖРС
3.6. Выявление вируса иммунодефицита крупного рогатого скота
ВИКРС среди больных и инфицированных лейкозом коров.
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
ЛИТЕРАТУРА


Из литературных источников известно, что вирус иммунодефицита крупного рогатого скота ВИКРС часто сопровождает вирус лейкоза КРС 0 Лимане кая и др. Ю.Н. Федоров, . . Верховский, . В связи с этим большой интерес представляет изучение степени коинфицироваиности КРС в неблагополучных по лейкозу хозяйств вирусом иммунодефицита. Существующие традиционные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота реакция иммунной диффузии РИД, иммунофермеитный анализ ИФА, клинические и патологоанатомические методы, гематологические исследования не обеспечивают полного обнаружения всех инфицированных животных, так как молодняк до 6ти месячного возраста остается вне плановых исследований в связи с тем, что методы РИД и ИФА практически не пригодны для диагностики лейкоза у телят С. В.Чичинина и др. . i . Метод полимеразной цепной реакции ПЦР, основанный на обнаружении генома ретровируса, на два порядка чувствительнее и специфичнее иммунологических методов и имеет хорошую перспективу для диагностики лейкоза, так как позволяет определять наличие генов гликопротеииа возбудителя лейкоза у телят с дневного возраста, что крайне важно для изоляции зараженных с раннего возраста животных. По данным М. И. Гулюкнна А. Н. Шарова , известно, что метод ПЦР выявляет до животных, зараженных вирусом лейкоза среди РИДнегативиых животных, а число зараженных телят достигает до ,6. Кроме того, высокая чувствительность метода ПЦР позволяет использовать его для рекогносцировочных исследований путем определения возбудителя в сборном молоке . I . Сюрин т др. . . В связи с этим выявление зараженных животных в наиболее ранние сроки приобретает особую актуальность, и поэтому применение ГИДР в диагностике лейкоза имеет важное значение, т. Целые исследований являлась оптимизация молекулярной генодиагностики ВЛКРС для оздоровления хозяйств от этой инфекции. М. лсигь е а КРС. Определить возможность использования цельной крови, сыворотки крови, молока и крови телят с ти дневного возраста для диагностики лейкоза крупного рогатого скота методом ПЦР. З.Генотипировать ВЛКРС, циркулирующего па территории сельскохозяйственных предприятий РТ с применением ПЦР ПДРФ анализа. Исследовать циркулирующие иммунные комплексы ЦИК в сыворотке крови на наличие в них провирусной ДНК ВЛКРС. Определить степень коинфицированиости ВЛКРС и ВИКРС животных в хозяйствах Республики Татарстан. Научная новизна. Подобраны видоспецифические праймеры для идентификации ДНК провируса лейкоза и иммунодефицита КРС. Проведена оценка чувствительности и специфичности тестсистем. Проведено исследование крови и молока крупного рогатого скота из нескольких животноводческих хозяйств на содержание провирусной ДНК ВЛКРС и ВИКРС. Республики Татарстан. Установлена циркуляция провирусной ДНК вируса лейкоза крупного рогатого скота в составе циркулирующих иммунных комплексов. Впервые показана коинфицированность зараженных лейкозом молочного скота вирусом иммунодефицита крупного рогатого скота на территории Республики Татарстан. Практическая значимость Результаты научных исследований были использованы при разработке целевой программы по оздоровлению хозяйств РТ от лейкоза крупного рогатого скота на гг. Сравнительный анализ специфичности праймеров, рекомендованных МХсиге е а. Ьокот, и АмплиСенс и оптимизация метода ГЦР. Данные исследования проб крови и молока крупного рогатого скота и телят из различных хозяйств РТ на содержание провирусной ДНК ВЛКРС. Типирование вируса лейкоза крупного рогатого скота, циркулирующего на территории Республики. ДНК ВЛКРС в циркулирующих иммунных комплексах сыворотки крови инфицированных вирусом лейкоза коров. Идентификация коинфицированности крупного рогатого скота ВЛКРС и ВИКРС. Апробация результатов исследования. Результаты работы доложены и опубликованы в материалах на Международного симпозиума Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикаптов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний г. Казань, ФГУ ФЦТРБ ВНИВИ, ноябрь Всероссийской научно практической конференции Молодые ученые в реализации национальных проектов г.