Механизмы регуляции активности эндонуклеазы бактерий Serratia marcescens

• Автор: Романова, Юлия Джафаровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 106 с. : ил.

Содержание Стр.

Список сокращений

Введение.

1 Литературный обзор..

1.1 Эндонуклеаза i уникальные свойства фермента

1.2 Некоторые биохимические и физикохимические свойства эндонуклеазы

1.3 Структура эндонуклеазы.

1.4 Механизм действия эндонуклеазы

1.5 Конформационные особенности субстратов эндонуклеазы.

1.6 Взаимодействие 2 и других ионов с нуклеиновыми кислотами.

2 Материалы и методы исследования.

3 Результаты исследований.
3.1 Выбор субстрата для последующих исследований
3.2 Исследование механизма регуляции активности
эндонуклеазы катионами магния.
3.2.1 Определение оптимального содержания магния для гидролиза I I
3.2.2 Спектральный анализ РНК и ДНК.
3.2.3 Кинетический анализ гидролиза ДНК и РНК.
3.3 Определение предпочтения субстрата при
одновременном присутствии в среде ДНК и РНК.
3.4 Влияние мононуклеотидов на активность эндонуклеазы
3.4.1 Влияние нуклсозидмонофосфатов на активность эндонуклеазы
3.4.2 Влияние нуклеозидтри фосфатов на активность эндонуклеазы
3.5 Обсуждение результатов
Заключение
Слисок литературы.
Список сокращений
1. аденозин 5 монофосфат АМР
2. гуанозин 5 монофосфат
3. цитидин 5 монофосфат СМР
4. уридин 5 монофосфат
5. 2дезоксиаденозин 5 монофосфат АМР
6. 2дезоксигуанозин 5 монофосфат
7. 2,дезоксицитидин 5 монофосфат
8. 2,дезокситимидин 5 монофосфат
9. аденозин 5 трифосфат
. гуанозин 5 трифосфат
. цитидин 5 трифосфат СТР
. уридин 5 трифосфат
. 2дезоксиаденозин5 трифосфат
. 2дезоксигуанозин5 трифосфат
. 2дезоксицитидин5 трифосфат СТР
. 2дезокситимидин5 трифосфат
. аргинин
. аспарагин
. гистидин i
. глутаминовая кислота
. цистеин С
. полиадениловая кислота ноли А
. полигуаниловая кислота поли Г
. полицитидиловая кислота поли Ц
. полиурациловая кислота поли У
. фосфодиэфирная связь ФДЭсвязь
. этилендиаминтетраацетат ЭДТА
Введение
Актуальность


Показано, что независимо от конформационных особенностей, степени полимерности и спирализации субстрата, прочность связывания эндонуклеазы с субстратом постоянна и не зависит от наличия в среде катионов магния. Установлено, что в отсутствии катионов магния эндонуклеаза проявляет специфичность к типу гидролизуемого субстрата. Показано, что присутствие отражается на скорости распада ферментсубстратного комплекса с образованием продукта. Установлено, что нуклеозидмонофосфаты не влияют на активность эндонуклеазы по отношению к ДНК и подавляют активность к РНК, ингибируя фермент по бесконкурентному типу в случае , , и частично конкурентному типу в случае АМР и АМР. Выявлено, что дезоксирибонуклеозидтрифосфаты не влияют на активность эндонуклеазы ни по отношению к ДНК, ни к РНК, а СТР, , только к ДНК, и, напротив, подавляют РНКазную активность. Показано, что АТР играет роль положительного эффектора в присутствии РНК и отрицательного в присутствии ДНК, ингибируя или активируя эндонуклеазу по частично смешанному типу. Установлены механизмы регуляции активности эндонуклеазы мононуклеотидами, различающимися типом азотистых оснований, углеводного остатка и числом фосфатных групп. Практическая значимость. Установленные механизмы регуляции активности эндонуклеазы повышают эффективность ее применения и способствуют ее дальнейшему продвижению в практику. Результаты определения оптимального соотношения Ррнк были использованы при разработке антимикробного препарата на основе эндонуклеазы, защищенного Патентом РФ 9. При оптимальном для проявления активности содержании 2 происходит изменение вторичной структуры субстратов. При этом прочность связывания эндонуклеазы с субстратом в отличие от скорости продуктивного распада ферме 2, конформационных особенностей, степени полимерности и спирализации субстрата, что лежит в основе механизма регуляции эндонуклеазы 2. Мононуклеотиды могут служить эффекторами эндонуклеазы, регулируя ее активность, предпочтительно по отношению к РНК, по частично конкурентному, бесконкурентному или частичному смешанному типу, что зависит от их содержания в среде и химического состава, а также содержания в среде и представляет суть механизмов регуляции активности эндонуклеазы мононуклеотидами. Апробация работы. Студент и научнотехнический прогресс Новосибирск, , Биология наука века, Пущино, . Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 9 работ, в числе которых 1 патент, 3 статьи, 5 тезисов. Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 6 страницах и включает в себя введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований, выводы, заключение, список литературы 1 источник, в том числе иностранных. Диссертация содержит таблиц и иллюстрации. Эндонуклеаза . Первые сообщения о внеклеточной нуклеазе появились в году Лещинская И. Б. и др. v . В настоящее время сформировалось мнение, что эндонуклеаза это фермент, проявляющий широкую субстратную специфичность . Лещинская И. Б. и др. i . i . Она способна гидролизовать одно и двуцепочечные ДНК и РНК с образованием 5моно, ди, три, тетра, пента и олигонуклеотидов . Лещинская И. Б. и др. Львова Т. Н. и др. Эндонуклеаза обладает высокой каталитической активностью, которая в несколько раз выше активности стафилококковой нуклеазы и более чем в раз ДНКазы I Филимонова М. Н., . На начальных этапах исследование эндонуклеазы проводили, предварительно выделяя фермент из природных штаммов бактерий . Лещинская И. Ь. и др. Филимонова М. Н. и др. К началу х годов были достигнуты успехи в изучении экспрессии генов, секреции фермента и получены рекомбинантные штаммы бактерий Т. . . i . i . Эндонуклеазу . применяют как средство для лечения и профилактики вирусных заболеваний пчел Полидорова О. И. и др. Салганик Р. И. и др. Также возможно применение эндонуклеазы в качестве средства профилактики респираторных заболеваний телят, вызываемых ДНК и РНКсодержащими вирусами различных семейств.