Метаболизм водорода у фототрофных микроорганизмов

• Автор: Гоготов, Иван Николаевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 349 c. : ил

Содержание металлов и серы

стр.

3.3. Доноры и акцепторы электронов, взаимодействующие

с гидрогеназами

3.4. Кинетика реакций, катализируемых гидрогеназами . .

3.5. Стабильность и активность гидрогеназ

3.5.1. Температура .

3.5.2. Кислород

3.5.3. Действие восстановителей

3.5.4. Ионы металлов.

3.5.5. Концентрация ионов водорода и ионная сила буфера

3.5.6. Иммобилизация гидрогеназ
3.6. Регуляция синтеза и активности гидрогеназ .
Заключение .
ГЛАВА 4. Нитрогеназа и ее роль в образовании н2 микроорганизмами
4.1. Активность нитрогеназы у фототрофов .
4.2. Регуляция синтеза нитрогеназы .
4.2.1. Температура и среды
4.2.2. Влияние р.
4.2.3. Интенсивность света и скорость роста
4.2.4. Источники азота .
4.3. Свойства нитрогеназы пурпурных бактерий .
4.3.1. Доноры электронов .
4.3.2. Потребности в энергии .
4.3.3. Фермент, активирующий нитрогеназу .
4.3.4. Стабильность нитрогеназы
4.3.5. Образование н2, катализируемое нитрогеназой. .9 Заключение
стр.
ГЛАВА 5. НАД Ф редуктазы
5.1. Регуляция синтеза НАДФредуктаз
5.2. Локализация НАДФредуктаз
5.3. Спектры поглощения и природа ахстивного центра . . .
5.4. Молекулярная масса и субъединичный состав
5.5. Стабильность.
5.6. Катализируемые реакции и выполняемые функции . . .
Заключение
ГЛАВА 6. Переносчики электронов, участвующие в функционировании гидрогеназ и нитрогеназ
6.1. Ферредоксины.
6.2. Флаводоксины.
6.3. Цитохроыы
Заключение
ГЛАВА 7. Фотообразование н2 биокаталитическими системами,
содержащими хлоропласти
7.1. Хлоропласты
7.2. Гидрогеназа
7.3. Переносчики электронов .
7.4. Интенсивность света
7.5. Действие ингибиторов и разобщителей электронтранспортной иепи
Заключение
ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕН.
ЛИТЕРАТУРА


А с размером гранул 0,0, ш. В качестве детектора применяли катарометр, газноситель аргон. Расчет количества выделяемого Н2 проводили по калибровочной кривой, построенной с помощью стандартных газовых смесей в диапазоне 0,2 водорода в аргоне. Н2 Реакция I преобладает, когда концентрация дейтерия в воде ниже , тогда как уравнения 2 и 3 характеризуют реакции при высоких концентрациях дейтерия и в 0 2. Для определения гидрогеназной активности по реакции обмена в сосудики типа Варбурга мл, заполненные гелием, вводили шприцом 12 мл препарата фермента. После двухкратной замены газовых фаз смесью Не 2 сосудики помещали на качалку 0 колеб. Через 0 минут из них отбирали по 0,5 мл газовой смеси и определяли ее изотопный состав методом газовой хроматографии рис. Разделение изотопов водорода проводили на двухметровой колонке диаметром 3 мл, заполненной окисью алюминия для хроматографии II степени активности с размером гранул 0,0, мм. Обработку и активацию Ао проводили по методу Шипмана i, . Для увеличения чувствительности метода анализа изотопы водорода после разделения окисляли до воды, пропуская газовую смесь при 0 через трубку из нерхавеющей стали, заполненную СиО. Рис. Хроматограмма смеси изотопов водорода после обменной реакции, катализируемой гидрогеназой т. А контроль Б в присутствии экстракта клеток Зорин, Гоготов, . Измерения проводили на газовом хроматографе типа Хром4 ЧССР. Детектор катарометр. Скорость реакции обмена о2Н определяли по убыли дейтерия в газовой фазе рис. Кинетика реакции была линейной при обмене до т2. Гоготов, Глинский, , по включению в клетки, а также в их фракции 2 спектральноизотопным методом Столбова и др. Львов, Кретович, Гоготов, Глинский, с помощью анализатора тяжелого азота I4 ГДР, по реакции образования клетками н2, не чувствительного к окиси углерода и по способности бесклеточных препаратов к АТФзависимому выделению Н2 из дитионита , i, v, Серебрякова, Гоготов и др. Количество образуемого этилена измеряли методом газовой хроматографии, используя колонку длиной 2 м и диаметром 3 мм Гоготов, Глинский, . В качестве наполнителя применяли силикагель марки КСК с размером зерен 0,0, мм. Измерения проводили на газовом хроматографе Цвет4 с пламенным ионизационным детектором в изотермическом режиме при . В качестве газаносителя использовали гелий млмин. Из сосудиков, куда помещали реакционную смесь, откачивали воздух и заполняли их смесью Не. Органические и неорганические субстраты добавляли в количестве мкМ. Общий объем реакционной смеси 2 мл. Ш 2 0,5 Ш Мп2 8 Ш . АТФ 2 мкмоля креатинфосфат мкмоль креатинфосфокиназа 0,4 мг. Остальные компоненты варьировали в зависимости от задач эксперимента. Измерения проводили с помощью анализатора тяжелого азота 4 ГДР эмиссионноспектрометрическим методом Гоготов, Глинский, . По сравнению с массспектрометрическим методом он обладает более высокой чувствительностью, позволяя проводить измерения тт при содержании в пробах мкг азота. В описанные выше реакционные сосудики раздел 2. Анализ образцов проводили в ампулах из стекла пирекс, в которые вносили пробы с содержанием азота мкг, что позволяло создавать в разрядной ампуле давление 27 мм рт. При объеме пробы менее I мл ее переносили непосредственно в капилляр из стекла пирекс 1,5x мм, выпаривали и помещали в ампулу. При использовании пробы более I мл образец переносили на шлифованную палочку из стекла пирекс методом микродиффузии аммиака Любимов и др. Львов, Кретович, . В ампулу, кроме стеклянной палочки с образцом, предварительно вносили да смеси катализатора СиОСаО 11, необходимого для перевода аммонийной соли в и2, поглощения следов со и воды, которые мешают определению линии молекул азота. После откачки Ю4 мм рт. 4, измеряя высоты пиков, соответствующие н и и. К2. Относительная ошибка измерения зависит от обогащения пробы при обогащениях 0,81,0 ат.