Лизоцим как биохимический показатель секреторной активности нейтрофилов крови при физической нагрузке

• Автор: Прияткин, Сергей Александрович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 146 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Лейкоцитарный статус крови и его изменение при физиологических воздействиях

1.2. Современные представления о системе нейтрофилов

1.2.1. Морфология и биохимический статус нейтрофилов

1.2.2. Функциональная активность нейтрофилов

1.3. Влияние физической нагрузки на функциональную активность факторов системы неспецифичесхой резистентности и содержание стероидных гормонов в крови

1.4. Структура и свойства лизоцима .

1.4.1. Биологические свойства и локализация лизоцима в организме

1.4.2. Основные физикохимические характеристики лизоцима
1.5. Обзор методов определения лизоцима
1.6. Современные представления о радиоиммуноанализе белков
1.6.1. Принципы и основные этапы радиоиммуноанализа
1.6.2. Получение антисыворотки
1.6.3. Методы получения и очистки радиоактивно меченного белка
1.6.4. Методы разделения фракций свободного и связанного с антителами антигена
1.6.5. Оптимизации радиоиммуноанализа
1.6.6. Радиоиммуноанализ лизоцима
ГЛАВА 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Постановка экспериментов на животных
2.2. Условия обследования людей
2.3. Метод электрофореза в полиакриламидном геле
2.4. Получение антисыворотки к лизоциму человека
2.5. Методы получения меченного ,а1лизоцима
2.6. Оптимизация радиоиммуноанализа лизоцима
2.7. Оптимизированный вариант радиоиммуноанализа лизоцима человека
2.8. Определение чувствительности, точности и воспроизводимости радиоиммуноанализа лизоцима
2.9 Исследование содержания лизоцима в крови
2 Оптимизация турбидиметрического метода определения активности лизоцима
2 Метод определения активности лизоцима
2 Определение суммарных лизосомальных катионных белков в нейтрофилах крови
2 Определение титра комплемента в сыворотке крови
2 Метод радиоиммуноанализа кортизола и кортикостерона
2 Вспомогательные гематологические методы
2 Выделение нейтрофилов из периферической крови
2 Методы математической обработки результатов ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Развитие метода радиоиммуноанализа лизоцима человека
3.1.1. Получение и характеристика антисыворотки к лизоциму
3.1.2. Получение меченного лизоцима
3.1.3. Выбор системы разделения свободной и связанной с антителами фракций лизоцима в радиоиммуноанализе
3.1.4. Оптимизация условий радиоиммуноанализа лизоцима
3.1.5. Построение стандартной кривой и определение основных характеристик радиоиммуноанализа лизоцима
3.2. Развитие турбидиметрического метода определения активности лизоцима в сыворотке крови
3.2.1. Повышение чувствительности метода
3.2.2. Стандартная кривая и характеристики метода определения активности лизоцима
3.3. Изучение влияния физической нагрузки на содержание лизоцима в плазме и лейкоцитах крови
3.3.1. Влияние однократной беговой нагрузки на содержание лизоцима в плазме и нейтрофилах крови гребцовмужчин
3.3.2. Влияние специфической нагрузки на содержание лизоцима в крови гребцовмужчин
3.3.3. Влияние однократной беговой нагрузки на содержание лизоцима и динамику лейкоцитов в крови спортсменок
3.3.4. Влияние специфической нагрузки на содержание лизоцима в крови гребцовженщин
3.4. Применение экслрессмикрометода оценки содержания лизоцима в фагоцитах крови и их секреторной активности
3.5. Исследование взаимосвязи между содержанием лизоцима в крови и работоспособностью спортсменов
3.6. Исследование влияния физической нагрузки на активность лизоцима в сыворотке крови и относительное содержание суммарных лизосомальных катионных белков в нейтрофилах
3.7. Влияние физической нагрузки на титр комплемента в сыворотке крови у спортсменов
3.8. Изменение концентрации кортизола в крови при физической нагруэке
3.9. Влияние однократной физической нагрузки на активность лизоцима и динамику содержания лейкоцитов в крови крыс
3 Влияние физической нагрузки на концентрацию кортикостерона в сыворотке крови крыс
3 Влияние введения кортикостерона на активность лизоцима и содержание нейтрофилов в крови крыс
3 Влияние кортикостерона на секрецию лизоцима клетками крови i vi
3 Секреторная и фагоцитарная активность нейтрофилов крови при физической нагрузке у крыс
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Развитие выносливости в циклических видах спорта Москва, XXIII Всесоюзной конференции по спортивной медицине Москва, Итоговой научной конференции СПб научноисследовательского института физической культуры СанктПетербург, и научнопрактической конференции Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения СанктПетербург, . Основные результаты диссертации опубликованы в печатных работах. ГЛАВА 1. Система крови представляет собой внутреннюю среду, которая играет решающую роль в неспецифических и специфических реакциях защиты организма, влияя на его резистентность и реактивность по отношению к различным воздействиям , . В ответ на воздействие стрессорных факторов происходит быстрая мобилизация и изменение активности большого числа клеток белой крови, которые принято подразделять на клетки системы кеслецифической резистентности и клетки иммунной системы. Ведущим клеточным звеном системы неспецифической резистентности являются нейтрофилы, которые представляют одну из первых линий защиты организма от микробов , , , 5. Специфические иммунные реакции защиты обеспечиваются в основном лимфоцитами, а мононуклеарные фагоцитарные клетки моноциты, микрофаги занимают промежуточное, связующее место между клетками неспецифической защиты и лимфоцитами. У взрослых здоровых людей основную массу лейкоцитов периферической крови их число в 1 мм3 составляют нейтрофилы , лимфоциты и моноциты 2. В 1е сутки постнатального периода количество нейтрофилов составляет около лейкоцитов, количество которых в этот период составляет в 1 мм5, затем оно быстро уменьшается до минимума к концу 1го года жизни, после чего вновь начинает возрастать и к годам достигает уровня взрослого человека . Соотношение различных классов лейкоцитарных клеток крови имеет существенные межвидовые особенности. Так, например, у лабораторных беспородных белых крыс преобладающим типом белых кровяных клеток являются лимфоциты, которые по различным данным составляют лейкоцитов периферической крови , 5, 4. Популяции нейтрофилов и моноцитов составляют и соответственно , 5, 4. Содержание минорных типов гранулоцитарных лейкоцитов эозинофилы, базофилы существенно не различается у людей и лабораторных крыс, и в норме их доля не превышает 5 от общего количества лейкоцитов. Подобно другим клеткам, участвующим в иммунологическом ответе, нейтрофилы представлют собой, повидимому, гетерогенную популяцию. Зрелые нейтрофилы задерживаются в синусах костного мозга в течение дней. Количество депонированных в костном мозге нейтрофилов в раз больше, чем в крови. В среднем полупериод нахождения нейтрофилов в циркуляции составляет ч, в тканях дней 2, . Основная масса нейтрофилов находится в тканях организма, где осуществляется реализация их функционального потенциала 2, . Даже незначительные изменения функционального состояния организма сопровождаются изменениями количества нейтрофилов в крови. Обычно эти изменения кратковременны, обратимы и не выходят за пределы физиологических значений . Однако, интенсивные ФН, характерные для спортивной деятельности, могут вызывать значительный лейкоцитоз, который получил название миогенного , , . На начальном этапе активизируется деятельность кровераспределительных механизмов, а затем в реакцию на мышечную деятельность вовлекаются органы кроветворения . Как правило, выделяют две фазы миогенного лейкоцитоза. Сначала наблюдается лимфоцитарная фаза, которая появляется уже через несколько минут физического напряжения и обеспечивается преимущественно засчет увеличения количества лимфоцитов в кровяном русле, а через 0,,5 ч развивается вторая фаза нейтрофильная, которая сопровождается значительным нейтрофилезом до 0 и сдвигом лейкоформулы крови влево , . Многочисленные данные свидетельствуют о том, что в возникновении лейкоцитарных сдвигов в крови под воздействием различных стрессорных факторов важную роль играют катехоламины и глюкокортикоиды, секреция которых в кровь также существенно увеличивается при этих воздействиях , . Зрелые нейтрофилы, выходящие их костного мозга в кровь и ткани, представляют высокодифференцированные, неспособные к дальнейшей пролиферации клетки и содержат в своих структурах богатейший набор биологически активных веществ, необходимых для защиты макроорганизма от инфекционных агентов .