Клонирование генов, активируемых в эмбриональных стволовых клетках мыши, индуцированных к дифференцировке in vitro

• Автор: Якубович, Елена Игоревна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 105 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ Список сокращений и обозначений

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Дифференцировка эмбриональных стволовых

1.1. Культура эмбриональных стволовых клеток

1.2. ЭСК как модельная система для изучения

ранних стадий эмбриогенеза

1.3. Дифференцировка ЭСК i vi в

специализированные типы клеток

1.3.1. Дифференцировка кроветворных клеток

1.3.2. Дифференцировка мышечных клеток

1.3.3 Дифференцировка нервных клеток
2. Молекулярные механизмы ретиноид
зависимых сигнальных путей
2.1. Ретиноиды и их рецепторы
2.2. Взаимодействие ретиноидных рецепторов с
другими биологическими факторами
2.3. Участие ретиноидов в процессах
пролиферации, дифференцировки и апоптоза.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Конструирование клонотек кДНК.
2. Конструирование субтрактивных клонотек кДНК
3. Анализ клонированных последовательностей.
4. Анализ генов, активируемых в результате
индукции дифференцировки ЭСК
4.1. Гены, гомологичные митохондриальным генам
4.2. Новые гены
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Успехи в развитии новых биотехнологий позволяют проводить исследования в этой области на качественно новом уровне. Это прежде всего технологии рекомбинантных ДНК и получения трансгенных животных. Кроме того, открытие способа культивирования i vi эмбриональных стволовых клеток ЭСК дало дополнительные экспериментальные возможности для изучения молекулярных механизмов дифференцировки клеток млекопитающих. . i, , . При этом дифференцировка ЭСК в культуре во многом аналогична дифференцировке клеток в эмбриогенезе . . , . В настоящее время культуры ЭСК широко используются в качестве модельной системы для изучения ранних стадий эмбрионального развития, а также механизмов регуляции ранних этапов клеточной дифференцировки i . i . . Кроме того, способность ЭСК после их слияния с бластоцистами участвовать в образовании всех типов клеток развивающегося эмбриона, в том числе и половых, позволяет использовать их для идентификации и анализа новых генов, вовлеченных в различные сигнальные пути, а также исследования биологических функций уже известных генов в процессе эмбрионального развития, вводя изменения в генетический материал на уровне ЭСК i . i . ii . . Несмотря на то, что проблемой клеточной дифференцировки занимаются давно и интенсивно, многие вопросы, касающиеся конкретных молекулярных механизмов регуляции этого процесса, остаются невыясненными. В значительной степени это относится к самым ранним этапам дифференцировки клеток, поскольку постановка эксперимента до недавнего времени была затруднительна по чисто техническим причинам, в частности изза невозможности получить достаточное количество исходного материала. В связи с этим, ЭСК представляются нам наиболее адекватной экспериментальной моделью для изучения ранних стадий дифференцировки. Целью данной работы были поиск и анализ генов, экспрессия которых активируется на начальных этапах индуцированной i vi дифференцировки ЭСК линия ССЕ. Дифференцировка индуцировалась двумя способами 1 воздействием на монослойную культуру ЭСК ретиноевой кислоты, являющейся естественным морфогеном и играющим важную роль в эмбриогенезе позвоночных 2 культивированием клеток в суспензии в условиях, приводящих к образованию так называемых эмбриоидных телец, аналогичных по своей структуре раннему мышиному эмбриону. Конструировать клонотеки кДНК контрольных и индуцированных к дифференцировке ЭСК. С помощью метода вычитательной гибридизации получить субтрактивные клонотеки, обогащенные последовательностями, экспрессируемыми на ранних этапах дифференцировки ЭСК. Провести дифференциальный анализ скрининг клонотек, определить первичную структуру секвенировать и проанализировать с помощью специальных компьютерных программ нуклеотидные последовательности отобранных клонов в банках данных для установления гомологий с известными генами. Изучить экспрессию выделенных последовательностей на уровне транскрипции в постэмбриональном периоде развития мыши. ЭСК. Среди клонированных генов выявлено 7 новых, функции которых пока не выяснены. Проведен анализ их транскрипции в различных тканях взрослой мыши, выявивший для трех последовательностей ярковыраженный тканеспецифичный характер экспрессии. Новые последовательности зарегистрированы в банке данных с присвоением им идентификационных номеров. Исследование относится к разряду теоретических работ. Дифференцировка представляет собой сложный процесс, в котором участвует множество различных генов. К настоящему времени выделена и функционально проанализирована только малая их часть. Материалы диссертации докладывались на VI и VIII Международной Конференции СПИД, РАК И РОДСТВЕННЫЕ ПРОБЛЕМЫСПетербург, , г. XII Всероссийском Симпозиуме Структура и функции ядра СПетербург, , на VII Международной Конференции СПИД, РАК И РОДСТВЕННЫЕ ПРОБЛЕМЫ СПетербург, , на Всероссийском Симпозиуме Биология клетки в культуреСПетербург, .