Кальциевая регуляция активности лизосомальных ферментов миокарда

• Автор: Романов, Борис Константинович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Рязань
• Количество страниц: 279 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Основные условные обозначения и сокращения

Введение

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Экспериментальные модели

Модель острой гипоксической ГИПОКСИИ.

Модель острой тотальной ишемии миокарда

Модель экспериментальной гиперлипидсмии .

2.2. Средства разнонаправленной модуляции Са2 баланса

2.3. Биохимические методы исследования.

2.3.1. Пробоподготовка крови и гомогената миокарда
Пробоподготовка крови
Получение исходного гомогентата миокарда.
Получение безъядерного гомогената миокарда.
Получение лизосомальномитохондриальной фракции
2.3.2. Определение активности лизосомальных ферментов
2.3.3. Количественный анализ Са регулирующих средств
2.3.4. Определение уровня кальция в крови и в миокарде
2.3.5. Анализ газового состава, липидного баланса крови и ПОЛ
Анализ газового состава р и рС крови
Определение концентрации малонового диальдегида
Определение показателей липидного обмена.
2.4. Статистические методы анализа.
Глава 3. СОБСТВЕННЫЕ ДАННЫЕ
3.1. Влияние кальцийрегулирующих лекарственных средств
на показатели активности лизосомальных ферментов миокарда белых крыс в условиях нормоксии
3.2. Влияние кальцийрегулирующих лекарственных средств на показатели активности лизосомальных ферментов миокарда белых крыс при острой гипоксической гипоксии
3.3. Влияние кальцийрегулирующих лекарственных средств на показатели активности лизосомальных ферментов миокарда белых крыс при острой тотальной ишемии
3.4. Влияние кальцийрегулирующих лекарственных средств на показатели активности лизосомальных ферментов миокарда белых крыс при экспериментальной дислипидемии и при острой гипоксической гипоксии на фоне эксперимен
тальной дислипидемии
3.5. Влияние кальцийрегулирующих лекарственных средств на показатели активности лизосомальных ферментов миокарда белых крыс при острой тотальной ишемии на фоне
экспериментальной дислипидемии.
Таблицы
Диаграммы
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ .
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ЛИТЕРАТУРА


Очевидно, что обеспечить стабильную работу системы регуляции лизосомальной активности может только такая мессенджерная система, основной передатчик которой может дозозависимо работать в широком диапазоне условий от физиологической нормы до терминальных состояний, не меняя при этом своих свойств. В максимальной степени этим условиям отвечает кальциевая мессенджерная система, являющаяся филогенетически более древней по сравнению с системами цАМФ и цГМФ, но менее изученной вследствие сложностей, связанных с определением чрезвычайно малых количеств внутриклеточных ионов кальция 7 М Березов Т. Т., Романов Б. К., . Са флюоресцентного зонда i 2 с года, а в последние годы с развитием микроэлектродной техники ионселективной потенциометрии Карпищенко А. И., . Используемые ранее для решения задач изучения регуляторных механизмов методики атомноадсорбционного определения физиологически неактивного общего кальция в настоящее время не могут быть признаны удовлетворительными. Известно, что ионам кальция принадлежит центральная роль в регуляции многих клеточных функций Березов Т. Т., . Изменение концентрации внутриклеточного кальция приводит к изменению активности специфической Са2кальмодулинзависимой протеинкиназы. Регуляторной субъединицей этого фермента оказался Са связывающий белок кальмодулин, являющийся составной частью множества других Са2связывающих белков. С Са мессенджерной системой оказались тесно связанными ещ две мессенджерных системы диацилглицерол и инозитол1,4,5трифосфат. Эти модуляторы освобождаются из фосфолипидов мембран фосфорилированных производных фосфатидилинозитола под действием мембраносвязанной фосфолипазы С. Действие диацилглицерола, как и свободных ионов Са2 опосредовано через мембраносвязанный Са2зависимый белок протеинкиназу С, катализирующей фосфорилирование ферментов, в том числе и гидролитических. Инозитол1,4,5трифосфат связывается со специфическим рецептором на саркоплазматическом ретикулуме, способствуя выходу из него ионов Са в цитозоль. Таким образом, ионы кальция, являясь не только субстратом кальциевой мессенджерной системы, но и контролируя активность цАМФрегулируемых протеинкиназ типа А, цГМФрегулируемых протеинкиназ типа в, Са зависимых протеинкиназ, а также, в синергизме с диацилглицеролом и кислыми фосфолипидами Са2кальмодулинзависимых протеинкиназ С, интегрируют активность других мессенджерных системы. Подобная универсальность кальциевой мессенджерной системы и ее максимальная эффективность по сравнению с другими системами в отношении регуляции состояния лизосомальных мембран Романов Б. К., и др. Так, известно, что при назначении блокаторов кальциевых каналов верапамила и дилтиазема в эффективных дозах, происходят статистически значимое снижение ионов кальция в ткани миокарда Меерсон Ф. З., . Известно также, что существуют лекарственные средства, повышающие уровень ионов кальция в кардиомиоцитах сердечные гликозиды и кардиостимулятор азаклорзин в больших дозах Винокурова Е. Н., . Указанные обстоятельства позволяют сделать предположение об активном участии кальциевого механизма в активации лизосомального аппарата. Избыточное накопление кальция вследствие активации фосфолипаз и процессов псрекисного окисления липидов, может приводить к дестабилизации лизосомальных мембран и выходу в цитозоль кислых гидролаз, в том числе протеиназ и липаз, усугубляющих повреждение клеточных мембран. В таком случае можно предположить, что поступление в клетки ионов кальция будет сопровождаться высвобождением лизосомальных ферментов. Изменение кальцийрегулирующими лекарственными средствами активности лизосомального аппарата в миокарде может быть опосредовано их влиянием на три процесса Березов Т. На транспорт кальция по потенциалзависимым медленным каналам внутрь клетки. Саркоплазматический ретикулум содержит два варианта кальциевых депо продольные и терминальные цистерны, контактирующие с цистернами Тсистемы кардиомиоцитов. Са АТФаза, регулируемая протеолипидом фосфоламбаном, закачивает кальций в ретикулум. В ретикулуме кальций связывается с белками кальсеквестрином и Са связывающим белком, расположенными рядом с Са2каналами.