Исследование механизмов регуляции апоптоза лейкоцитов периферической крови у больных системной красной волчанкой

• Автор: Хассан Мохилдейн Абдел Маруф
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 132 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Перечень основных сокращений, условных обозначений, символов, единиц и

терминов
ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Апоптоз

1.1.1. Определение.

1.1.2. Этапы апоптоза

1.1.3. Биохимическая характеристика апоптоза.

1.1.4. Стадии апоптоза

1.1.5. Апоптоз и клеточный цикл

1.1.6. Роль апоптоза.
1.1.7. Апоптоз и заболевания.
1.2. и
1.2.1. Функция рецептора.
1.2.2. Структура рецептора.
1.2.3. Растворимая форма рецептора.
1.2.4. Экспрессия рецептора
1.2.5. Структура лиганда
1.2.6. Экспрессия лиганда
1.2.7. опосредованный апоптоз
1.2.8. Формы .
1.2.9. Функция .
1.2 может запускать пролиферацию.
1.2 Патология системы
1.3. Системная красная волчанка скв.
1.3.1. Определение
1.3.2. Эпидемиология
1.3.3. Клинические проявления.
1.3.4. Аутоантигены и аутоаититсла при СКВ
1.3.5. Этиология. Причины появления аутоантител.
1.3.6. Патогенез СКВ и антитела.
1.3.7. Роль комплемента в патогенезе системной красной волчанки.
1.3.8. Апоптоз и СКВ
1.3.9. Факторы влияющие на апоптоз при СКВ
1.3 Лимфоциты и СКВ.
1.3 Нейтрофилы и СКВ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1.Использованные материалы и реактивы.
2.2. Группы обследованных больных.
2.3.Методика выделения мононуклсарных лейкоцитов, их фракций и граиулоиитов из периферической крови человека
2.4.Исследование структуры ДНК прямым флуориметричсским методом.
2.5.Методы определения количества апоптотичсских клеток.
2.6. Методы определения и растворимого .
2.7.Мстод определения Вс.
2.8. Определение общей гемолитической активности комплемента
2.9.Статистическая обработка данных.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Повреждение структуры ДНК лейкоцитов периферической крови у больных системной красной волчанкой и другими аутоиммунными заболеваниями как маркер апотогениой готовности
3.1.1. Исследование уровня повреждений ДНК иммунокомпетентных клеток при СКВ.
3.1.2. Изучение апоптоза лимфоцитов и гранулоцитов при СКВ
3.1.3. Исследование корреляции между титром аутоантител, уровнем повреждений ДНК и апоптозом клеток крови
3.1.4. Исследование уровня апоптоза лимфоцитов в зависимости от суточной дозы преднизолона у больных СКВ
3.1.5. Исследование динамического изменения повреждений ДНК в зависимости от терапии у больных СКВ
3.1.6. Анализ субпопуляций лимфоцитов у больных СКВ.
3.2. Исследование роли системы в регуляции апоптоза при СКВ
3.2.1. Оценка уровня экспрессии в лейкоцитах периферической крови при СКВ.
3.2.2. Исследование экспрессии и оценка уровня апоптоза различных субпопуляций лимфоцитов.
3.2.3. Определение растворимого в плазме больных СКВ.
3.2.4.Определение зависимости относительного содержания от
содержания активированных лимфоцитов
3.2.5. Изучение взаимосвязи уровня и титра антиядерных антител
3.2.6. Изучение системы комплемента у больных СКВ.
3.2.7. Изучение антифосфолипидного иммунного ответа.
3.2.8.0пределение экспрессии Ьс у больных СКВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Существует предположение о возможной роли апоптотических клеток в развитии СКВ . У больных СКВ показано возрастание уровня апоптотических лимфоцитов в периферической крови 0. Кроме того, было установлено, что в процессе апоптоза аутоантигены выносятся на поверхность внешней мембраны апоптотических клеток. Это может определять продукцию аутоаптитсл непосредственно к внутриклеточно локализованным антигенам . В эксперименте было показано, что введение большого количества апоптотических клеток животным вызывает у них аутоиммунную реакцию 4. Между тем, результаты исследований, посвященных апоптозу при СКВ, весьма разрозненны. С одной стороны, лимфоциты, полученные от людей, больных СКВ, проявляют увеличение уровня спонтанного апоптоза i vi по сравнению со здоровыми донорами , 6. СКВ, которая приводит к индукции клеточной гибели. Остается неясным, находится ли у больных СКВ уровень апоптоза в равновесии с возрастающим уровнем активированных лимфоцитов и с иммунореактивностью организма больного в целом. Неизвестно также, какие еще факторы, вызывающие апоптоз и сопутствующие ему, могут играть роль в патогенезе заболевания. Апоитоз лимфоцитов может быть инициирован также использованием препаратовиммуносупрессоров 9. С другой стороны, на экспериментальных моделях мышей линий 1рг лнмфоиролнферация и генерализованная лимфопролиферативная болезнь показано, что развитие СКВ прямо связано с дефектами сигнального пути. У мышей обеих линий мутации в гене и приводят к развитию аутоиммунною синдрома с утратой Тклеточной толерантности, Вклеточным нарушениям, гипергаммаглобулинемией и продукцией аутоантител. I мыши имеют мутацию в гене , что приводит в экспрессии мутантного белка и нарушению сплайсинга мРНК, в то время как СЗНI мыши, дефицитны по функциональному лиганду в результате одиночной мутации 6. Дальнейшие исследования СКВ у человека также привели к обнаружению аналогичных дефектов в функционировании и . Однако, до настоящего времени не определена степень участия системы в развитии и регуляции апоптоза при СКВ у человека . Целью диссертационного исследования было изучение механизмов регуляции апоптоза в лейкоцитах периферической крови больных СКВ. Анализ иммуиореактивности больных СКВ с количественным определением активированных лейкоцитов, основных субпопуляций лимфоцитов СПЗ, 4, , , , индекса иммунорегуляпии и уровня обшего комплемента. Изучение зависимости количества различных субпопуляцин лейкоцитов в состоянии апоптоза от степени активности заболевания. Исследование уровня экспрессии и в различных субпопуляииях лейкоцитов и содержания в крови пациентов в зависимости от степени активности заболевания. Анализ изменений ДНК лейкоцитов в качестве раннего маркера апопгоза в зависимости от степени выраженности заболевания. Научная новизна исследования. Степень фрагментации ДНК на начальных стадиях апоитоза лейкоцитов периферической крови больных СКВ значительно превышает значения этого показателя у здоровых доноров. Увеличение числа повреждений ДНК при эюм определяется стадией развития заболевания. Впервые доказана выраженная прямая зависимость между уровнем антител к ДНК и ес фрагментам и степенью повреждения ДНК в лейкоцитах. Показано также, что уровень антиядерных антител и антител к ДНК у больных системной красной волчанкой зависел от выраженности заболевания и активности системы . Установлено, что уменьшение содержания Влимфоцитов в периферической крови больных СКВ не является обязательным признаком. Практическая значимость исследования. Информация о роли системы в патогенезе СКВ, а также обнаруженная зависимость между уровнем антител к ДНК и ее фрагментам и степенью повреждения ДНК в лейкоцитах выражена в виде линейного уравнения регрессии, которое может быть использовано в клинической практике при планировании лечебных мероприятий и прогнозе исхода заболевания. Апробация работы. Основные результаты работы были доложены па заседании кафедры биологической химии ММА им. И.М. Сеченова г. Москва. Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.