Исследование экспрессии апоптоз-специфических генов семейства BCL-2 и системы FAS/FASL при новообразованиях желудка и толстой кишки человека

• Автор: Обухова, Варвара Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 137 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Апоптоз как общсбиологический процесс

1.2. Белки семейства Вс

. Новообразования желудка и толстой кишки

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Исследование нарушений регуляции внешнего пути апоптоза при новообразованиях желудка и толстой кишки

3.1.1. Экспрессия при новообразованиях желудка и толстой кишки

3.1.1.1. Экспрессия нстрансформнровзнными и атипическими клетками желудка и толстой кишки
3.1.1.2. Уровень в сыворотке периферической крови больных с новообразованиями желудка и толстой кишки
3.1.1.3. Экспрессия мононуклеарными и полнморфноядерными лейкоцитами 5 периферической крови
3.1.2. Экспрессия при новообразованиях желудка и толстой кишки
3.1.2.1. Экспрессия нетрансформированными и атипическими клетками желудка и толстой кишки
3.1.2.2. Экспрессия при опухолях желудка
3.1.2.3. Экспрессия мононуклеарными лейкоцитами периферической крови больных с новообразованиями желудка и толстой кишки
3.2. Исследование нарушений регуляции внутреннего пути аиоитоза при новообразованиях желудка и толстой кишки
3.2.1. Исследование уровня белков Вс и Вах с помощью иммуноблоттинга
3.2.2. Иммуногистохнмнческос исследование уровня белков семейства 2 Вс, Вах и Вс1Х
3.2.3. Выявление мутаций в октадезоксигуанозиновой последовательности 3 экзона гена Вах
3.2.4. Локализация белков Вс и Вах до и после индукции апоптоза
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Нарушения регуляции внешнего пути апоптоза при новообразованях желудка и толстой кишки
4.1.1. Изменения системы со стороны опухолевой ткани желудка и толстой кишки
4.1.1.1. Снижение экспрессии атипическими клетками желудка и толстой кишки
4.1.1.2. Снижение уровня в сыворотке периферической крови у больных с новообразованиями желудка и толстой кишки
4.1.1.3. Увеличение экспрессии атипическими клетками желудка и толстой кишки
4.1.1.4. Увеличение уровня в опухолевой ткани желудка
4.1.2. Изменения системы со стороны лейкоцитов периферической крови 0 больных с новообразованямн желудка и толстой кишки
4.1.2.1. Увеличение экспрессии мононуклсарнымн лейкоцитами 0 периферической крови больных с новообразованямн желудка и толстой кишки
4.1.2.2. Уменьшение экспрессии мононуклсарнымн и полнмофрноядерными 0 лейкоцитами периферической крови больных с новообразованямн желудка и толстой кишки
4.2. Нарушения регуляции внутреннего пути апоптоза при новообразованях 3 желудка и толстой кишки
4.2.1. Увеличение экспрессии Вс алшнчсскнми клетками желудка и толстой 3 кишки
4.2.2. Увеличение экспрессии Х атипическими клетками желудка и толстой 4 кишки
4.2.3. Увеличение экспрессии Вах атипическими клетками желудка и толстой 5 кишки
4.2.4. Мутации гена Вах одна из возможных причин утраты проапоптотичсской 6 активности Вах
4.2.5. Общие тенденции изменения экспрессии апоптозспсцифических генов 8 системы и семейства Вс при новообразованиях желудка и толстой кишки
4.3. Применение сканирующей зондовой микроскопии в молекулярной 4 биологии
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


При ПКГ активируются специфические цистенновые протеазы каспазы, что ведет к деградации многочисленных белковмишеней в клетке 3. Характерным признаком апоптоза является мсжнуклсосомнос расщепление ядерной ДНК и формирование фрагментов кратных 0 п. ДНК на электрофорезе результат каспаза3опосредованнон активации 9, , 9. Однако следует отмстить, апоптоз возможен и без фрагментации ДНК. Обнаружен ядерный белок i i i i i i индуктор апоптотической конденсации хроматина в ядре, из которого при комбинированном действии каспазы3 протеолиз по Асп и нендентифицнрованиой протеазы протсолиз по Сер7 образуется фрагмент Сер7АспЮ, который в присутствии дополнительных неядерных факторов вызывает апоптотичсскую конденсацию хроматина и фрагментацию ядра без гидролитического расщепления ДНК 0. Кроме того, в цитоплазматической мембране при апоптозе, несмотря на ее морфологическую целостность, наблюдается исчезновение асимметрии слоев, характерной для иитактлых клеток, и экспозиция фосфатндилсерина на наружном слое мембраны. Именно появление фосфатндилсернна на поверхности клетки и апоптотических телец, образующихся из нес, способствует их узнаванию макрофагами и последующему фагоцитозу 0. Существует несколько путей реализации программы ПКГ. На настоящий момент охарактеризованы два пути апоптоза один запускается через активацию рецепторов клеточной поверхности, другой при попадании клетки в неблагоприятные условия истощение факторов роста или ионизирующая радиация оба пути достигают наивысшей точки развития при активации каспаз ,5,3. Внешний путь апоптоза опосредуется физиологическими индукторами, действие которых реализуется через специально предназначенные рецепторы клеточной поверхности. При передаче сигнала используются модули белокбелковых взаимодействий, известные как и , для сборки сигнального комплекса, который присоединяет и активирует молекулы инициирующих каспаз прокасиазы8. Данный путь передачи апоптотичсского сигнала схематически можно представить следующим образом индукторы ПКГ взаимодействуют с рецептором клеточной поверхности, после чего апоптотичсский сигнал через адаптерные молекулы передастся на инициирующие каспазы, которые, в свою очередь, активируют эффскторпыс каспазы , 4. При взаимодсйстии рецептора клеткимишени с физиологическим лигандом, , который представляет собой трансмембранный белок цитотокснческих Тлнмфоцитов ЦТЛ, рецептор активируется и запускает ПКГ 7. I типа. Представители данного семейства характеризуются наличием последовательностей, обогащенных от двух до пяти остатками цистсина во внеклеточной области, которые взаимодействуют с тримерными лигандамииндукторами. В норме экспрессируется клетками нелимфоидного происхождения, такими как сердце, легкие, почки, кожа, яичники, печень, желудок, кишка и др. Также описаны функциональные растворимые формы рсцсптора , которые образуются при альтернативном сплайсинге. Подобно большинству членов семейства, синтезируется в виде трансмембранной молекулы растворимый тример образуется при расщеплении мсталлонротеиназой. Поспрансляционные модификации частичный протеолнз оказывают сильное влияние на его активность, потому что только мембранносвязанный или мультимернзованный стимулирует ПКГ, ингибирует апоптоз, конкурируя с за взаимодействие с рецептором 3, . Т и Влимфоцитамн, клстками, нейтрофиламн. Кроме того, значительные уровни мРНК обнаружены в нелимфондных тканях нммуннопривелигерованных яички, матка и яичники и тканях, которые приспособлены к частому проникновению лимфоцитов топкая и толстая кишка, легкое и печень 3, 8. Взаимодействие с приводит к образованию кластеров рецепторных молекул и связыванию их внутриклеточных участков с адаптерными молекулами, . Через адаптер к комплексу лигандрецептор присоединяются эффекторы молекулы неактивных предшественников инициирующих каспаз прокаспазы8, что опосредуется при взаимодействии доменов и прокаспазы8 , , 4, 5, 1. В результате формируется молекулярный комплекс, I, в котором происходит активация каспаз. Стехиометрия компонентов I на настоящий момент не яссна 8.