Исследование модификации множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток

• Автор: Ермакова, Наталья Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 120 с. : ил.

1.1 Неклеточные механизмы устойчивости.

1. 2 Клеточные механизмы устойчивости

1.2.1 Лекарственная устойчивость, обусловленная инактивацией препарата в клетке.

1.2.2 Устойчивость, связанная с изменением мишеней лекарственных препаратов.

1.2.3 Роль ключевых генов, контролирующих апоптоз, в развитии лекарственной устойчивости.

1.2.3.1 Ген р

1.2.3.2 Антионкоген и лекарственная устойчивость опухолевых клеток

1.2.3.3 Влияние онкогена Вс и других генов семейства Вс на лекарственную устойчивость опухолевых клеток.

1.2.3.4 Система и лекарственная устойчивость.

1.2.4 Транспортные белки во множественной лекарственной устойчивости

1.2.4.1 Стуктура Пгликопротеина.

1.2.4.2.Конформационные изменения структуры Пгп ,
1.2.4.3. Ген 1, кодирующий Пгликопротеин, генетические механизмы ПгпМЛУ
ш 1.2.4.4. Субстратная специфичность Пгп.
1.2.4.5. Экспрессия Пгп в нормальных тканях и клетках
1.2.4.6. Роль МЛУ, опосредованной Пгп ПгпМЛУ, в злокачественных
новообразованиях.
1.2.4.7 , белок, ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью
1.3. Ингибиторы транспортных белков МЛУ
1.3.1 Ингибиторы Пгликопротеина.
1.3.1.1 Ингибиторы 1 поколения.
1.3.1.2 Ингибиторы 2 поколения.
1.3.1.3 Ингибиторы 3 поколения.
1.3. 2 Ингибиторы
Резюме
ГЛАВА II. Регуляция множественной лекарственной устойчивости.
2.1 Роль сигнальных систем клетки в МЛУ
2.1.1. Влияние цитокинов на МЛУ
2.1.2. Роль фосфолипазы С и иротеинкипазы С в регуляции МЛУ
2.1.3. Роль МАПК каскада в МЛУ.
2.1.4. Факторы транскрипции, регулирующие МЛУ
2.2 Активные формы кислорода и МЛУ.
Резюме
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
1. Объект исследования.
1.1 Культуры клеток
1.2 Получение резистентного штамма клеток Р8ВР .
1.2.1. Определение экспрессии Пгликопротеина
1.3 Получение резистентного штамма клеток Ер2.
2. Определение чувствительности опухолевых клеток к различным агентам по критериям выживаемости клеток и повреждению ядер в опытах i vi.
2.1. Используемые агенты.
2.2. Определение чувствительности клеток лимфолейкоза Р8 и Р8ВР
2.3. Определение чувствительности клеток рака гортани человека НЕр2 и Нер2ТР
3. Определение роста опухолей и эффекта про тивоопухолевых препаратов на их рост.
4. Определение МЛУ в клетках лимфолейкоза Р8 и Р8ВР
5. Определение МЛУ в клетках рака гортани человека НЕр2.
6. Определение активных форм кислорода в клетках лимфолейкоза Р8 и Р8ВР.
7. Введение перфторана и создание условий гипероксии.
8. Статистическая обработка результатов.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
Часть I. Авермектины новый класс ингибиторов множественной лекарственной
устойчивости
1 Л. Влияние авермектинов на МЛУ клетоклимфолейкоза Р
1.1.1. Оценка МЛУ штамма клеток лимфолейкоза Р8, устойчивого к
винкристину.
1 Л.2. Действие авермектинов на выживаемость клеток Р8 и Р8ВР.
1Л.З. Модификация противоопухолевого эффекта виикристина на клетках Р8 и
Р8ВР авермектинами
1 Л.4. Действие авермектинов на активность транспортных белков МЛУ
Резюме.
1.2. Влияние авермектинов на МЛУ клеток НЕр2.
1.2.1. Оценка МЛУ штамма клеток НЕр2ТР, устойчивого к таксолу
1.2.2. Действие авермектинов на выживаемость
клеток НЕр2 и НЕр2ТР
1.2.3. Модификация эффекта противоопухолевых препаратов на клетки НЕр2 и НЕр2ТР авермектинами .
1.2.4. Действие авермектинов на активность транспортных белков клеток НЕр2 Резюме.
1.3. Противоопухолевые эффекты авермектинов.
1.3.1. Действие аверсектина С на асцитную опухоль лимфолейкоз Р
1.3.2. Действие аверсектина С на солидную карциному Эрлиха
1.3.2.1 Влияние аверсектина С на рост солидной карциномы Эрлиха.
1.3.2.2. Влияние аверсектина С на большие опухоли карциномы Эрлиха
1.3.3. Влияние авермектина В1 на рост солидной карциномы Эрлиха.
Резюме.
1.4. Усиление противоопухолевых эффектов винкристина авермектинами
1.4.1. Действие винкристина в сочетании с авермектинами на солидную карциному Эрлиха
1.4.2. Противоопухолевое действие винкристина в сочетании с авермектинами на лимфолейкоз Р
1.4.3. Противоопухолевое действие винкристина в сочетании с авермектииами на
резистентный штамм Р8ВР.
Резюме.
Часть 2. Регуляция МЛУ опухолей уровнем их оксигснации
2.1. Зависимость МЛУ клеток Р8ВР от срока роста опухоли.
Резюме.
2.2. Изменение активных форм кислорода по мере роста опухолей Р8ВР
Резюме.
2.3. Влияние увеличения оксигенации опухолей РВР с помощью гипероксии и
перфторана на МЛУ опухолевых клеток.
Резюме.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Аверн авермектин
АФК активные формы кислорода
ГАМК гаммааминомасляная кислота
ДМСО диметилсульфоксид
ДИК дезоксирибонуклеиновая кислота
ИЛ интерлейкин
ЛС лекарственные средства
МАП К митогеиактивируемая киназа
МЛУ множественная лекарственная устойчивость
мРНК матричная рибонуклеиновая кислота
Пгп Пгликопротсин
СПЖ средняя продолжительность жизни
ТМ трансмембранный домен
ТРО торможение роста опухолей
диацилглицерол
эпидермальный фактор роста
глутатион
глутатион трансфераза
III1 гипоксия индуцируемый фактор
I,4,5РЗ инозитол 1,4,5 грифосфат
сЛтИШтерминальная киназа
МЕКК киназа митогенактивируемой киназы
белок, ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью
X белок устойчивости к митоксантрону
фактор роста тромбоцитов
i4, фосфатидилинозитол 4,5 бисфосфат
РКВ протсипкиназа В
РКС протеин киназа С
фосфолилаза С
3 родамин
ЮТ фактор некроза опухолей
ВВЕДЕНИЕ


Очевидно, что подавление множественной лекарственной устойчивости и предотвращение ее развития является задачей первоочередной важности для терапии опухолевых заболеваний. Одним из способов подавления МЛУ является применение ингибиторов транспортных белков, блокирующих транспорт веществ из клеток и повышающих их внутриклеточную концентрацию. Эффективные ингибиторы должны избирательно действовать на опухолевые клетки в малых концентрациях и не быть токсичными для нормальных клеток. Применяемые в настоящее время в клинике ингибиторы имеют существенные недостатки они малоэффективны, часто обладают побочными эффектами и не снимают МЛУ полностью при клинически достижимых концентрациях. Таким образом, задача подбора высокоспецифичиых ингибиторов множественной лекарственной устойчивости до сих пор не решена. В литературе есть данные об ингибиторной активности в отношении Пгликопротеина препарата ивермектина, синтетического аналога авермектина . Авермектины соединения макролидиой природы, продукты жизнедеятельности микроорганизмов viii, широко применяются в клинике благодаря своим антипаразитарным свойствам. Данные об ингибиторной активности природных авермектипов в отношении транспортных белков МЛУ отсутствуют. Другим способом борьбы с МЛУ опухолей могло бы быть подавление экспрессии генов, кодирующих транспортные белки, и снижение их активности воздействием на клеточные сигнальные системы. Однако в настоящее время еще имеется мало информации о реуляции генов МЛУ и роли сигнализации в регуляции активности этих белков. Исследования в этом направлении только начинаются. МЛУ от концентрации активных форм кислорода, однако, эти данные противоречивы. Целью настоящей работы явилось исследование подавления и регуляции множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток с помощью ингибиторов транспортных белков и путем изменения уровня активных форм кислорода в опухолевых клетках. Изучить влияние авсрмсктииов на множественную лекарственную устойчивость клеток лимфолейкоза Р8 и штамма Р8ВР, устойчивого к винкрисгииу. Изучить влияние авсрмскгинов на множественную лекарственную устойчивость клеток рака гортани человека НЕр2 и штамма НЕр2, устойчивого к таксолу. Оценить противоопухолевые эффекты авермектинов i viv. Исследовать возможность усиления противоопухолевых эффектов винкристина авермектинами i viv. Изучить зависимость множественной лекарственной устойчивости клеток Р8ВР от срока роста опухоли. Оценить изменение уровня активных форм кислорода по мере роста опухолей Р8ВР. Определить влияние увеличения оксигенации опухолей РВР с помощью гипероксии и перфтораиа на множественную лекарственную устойчивость опухолевых клеток. ГЛАВА I. Множественная лекарственная устойчивость. Неклеточные механизмы устойчивости. Неклеточная устойчивость может развиваться как следствие роста опухоли i viv. Обычно она встречается у солидных опухолей, проявляющих единые физиологические свойства в отличие от циркулирующих опухолей типа заболеваний крови. Солидные опухоли представляют собой плотные структуры, неоднородные по своему строению vi, i, . Внеклеточное пространство в солидной опухоли характеризуется повышенным давлением жидкости по сравнению с нормальными тканями. Это обуславливается двумя факторами высокой проницаемостью сосудов и отсутствием функционирующей лимфатической системы vi, i, . Следовательно, это приводит к недоступности внутренних районов опухоли для цитостатиков и обеспечивает защитный механизм. Физиологические особенности солидных опухолей также приводят к наличию областей с недостаточным поступлением кислорода и питательных веществ. Это может вызывать дополнительную устойчивость, вызванную неклеточными причинами. Примером такой устойчивости может служить наличие неделящихся опухолевых клеток внутри солидных опухолей с плохой васкуляризацией. Эти клетки живые, но нс делятся, и, следовательно, устойчивы к действию многих лекарственных препаратов. Кислая среда в опухолях, вызванная продукцией молочной кислоты при гипоксии, также придает резистентность к слабым основаниям, для которых вход в клетку зависит от градиента между мембранами Ставровская и др. Клеточные механизмы устойчивости.