Создание стерически стабилизированной иммунолипосомальной системы на основе моноклональных антител с целью специфической доставки биологически активных веществ к клеткам-мишеням

• Автор: Яглова, Наталья Валентиновна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 150 с. : 12 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Обзор литературы.

1.1. Направленный транспорт лекарственных средств с помощью липосом

1.2. Глиофибриллярный кислый белок.

ГЛАВА 2. Материалы и методы.

ГЛАВА 3. Получение стернчески стабилизированных липосом

и их физикохимические характеристики.

3.1. Получение ПЭГилированных липосом

3.2. Конъюгирование моноклональных антител с ПЭГилирован ными липосомами

3.3. Физикохимические характеристики иммунолипосом

ГЛАВА 4. Иммуноморфологнческий анализ ПЭГилированных липосом, конъюгированных с моноклональными антителами к СГАР в культуре эмбриональных асгроцитов крысы и клеток глиомы Сб.
4.1. Иммуноморфологический анализ моноклональных антител к СРАР в культуре эмбриональных асгроцитов крысы и клеток глиомы С6
4.2. Анализ специфичности связывания ПЭГилированных липосом, конъюгированных с моноклональными антиСРЛР антителами, с клетками глиомы С6 и эмбриональными астроцитами мозга 4 крысы
ГЛАВА 5. Количественное определение содержания СГАР в сыворотке крови больных глиальными опухолями мозга.
5.1. Определение СРАР в сыворотке крови пациентов со злокачественными глиомами
5.2. Определение в сыворотке крови пациентов с глиомами низкой степени злокачественности
Г ЛАВА 6. Обсуждение полученных результатов.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


При перемешивании таких двухфазных систем сначала последовательно отделяются гидратированные липидные полотна, которые сворачиваются в большие многослойные мультиламеллярные пузырьки. Такое самопроизвольное замыкание пузырьков происходит для минимизации краевых контактов гидрофобной внутренней части липидных бислоев с водой поскольку эти контакты невыгодны энергетически. Дальнейшее уменьшение размеров таких пузырьков требует дополнительных затрат внешней энергии звуковой обработка ультразвуком или механической экструзия через микропористые мембранные фильтры. В результате этого сначала получаются большие униламеллярные пузырьки, которые при дальнейшей обработке превращаются в значительно более мелкие униламеллярные пузырьки. Обычно после многократной повторенной процедуры экструзии липосомной эмульсии через мембранный фильтр с определенным диаметром пор получается препарат липосом с несколько большими диаметрами пузырьков например, при использовании мембраны с порами нм обычно получаются пузырьки со средним диаметром около нм 6. На практике, при получении эмульсий небольших объемов до 1 мл используются миииэкструдеры, собираемые из двух одинаковых шприцев, баллоны которых соединяются торцами, между которыми, в специальной обойме, помещаются фильтрующие мембраны одна или несколько. Возвратнопоступательными движениями поршней обрабатываемая эмульсия пропускается через эти фильтры. Довольно часто, для облегчения последующей процедуры ручной экструзии особенно при приготовлении концентрированных липосомальных препаратов, первичную эмульсию сначала подвергают обработке ультразвуком, при которой происходит предварительная дезинтеграция больших мультиламеллярных пузырьков. Для экструзионной обработки больших объемов применяются экструдеры, в которых эмульсии продавливаются через фильтры под действием инертного газа, нагнетаемого при повышенном давлении. Следует упомянуть, что на более ранних стадиях развития липосомальной технологии применялись и другие способы получения липосом френчпрессинг, солюбилизация липидов в присутствии диализуемых детергентов, летучих органических растворителей и т. Однако в настоящее время, после появления прецизионных мембранных фильтров, прежние методы практически совсем оставлены, и в подавляющем большинстве современных публикаций описываются только различные варианты экструзионных методик. Физические свойства липосом определяются, прежде всего, их химическим составом свойствами индивидуальных липидов, используемых для приготовления липосом. Реальное физическое состояние бислойных мембран липосом также очень сильно зависит от температуры, , ионной силы и присутствия некоторых двухвалентных катионов. При изменении температуры или других факторов внешней среды мембраны претерпевают фазовые превращения, переходя с ростом температуры из гелеобразного состояния, в котором все жирнокислотные остатки сравнительно плотно и упорядоченно упакованы, к жидкому состоянию, в котором эти остатки имеют возможность совершать колебательные и вращательные движения. Эти термотропные фазовые переходы являются определяющими для стабильности и проницаемости липидных пузырьков. Для фосфолипидов, содержащих только полностью насыщенные ацильные остатки, температуры перехода лежат в интервале С липиды с ненасыщенными жирными кислотами совершают фазовые переходы при температурах ниже комнатной. Следует отметить, что четко выраженные дискретные фазовые переходы наблюдаются только в липосомах, состоящих из одного фосфолипида или из смесей немногих видов однотипных фосфолипидов. Для природных липидов, которые являются смесями различных видов, содержащих различные ацильные остатки, характерны области широких и нечетких фазовых переходов. Очень существенный модулирующий эффект на фазовые переходы бислоев, состоящих из гомогенных фосфолипидов, оказывает холестерин , 3. Его молекула служит как бы буфером текучести, поскольку ниже температуры фазового перехода холестерин способствует меньшей упорядоченности бислоя, а выше этой температуры он словно бы стремится сделать слой более упорядоченным.