Исследование механизма транспорта олигонуклеотидов в эукариотические клетки

• Автор: Шестова, Ольга Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 90 с.

1 ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ.

Основные механизмы транспорта макромолекул в эукариотические клетки

1.1.Введени е.

1.2. Основные механизмы транспорта макромолекул.

1.3. Клатринзависимый транспорт.

. Клатрин структурная единица оболочки окаймленных везикул

1.3.2. Динамический цикл сборкидиссоциации клатриновых оболочек

1.3.3. Образование окаймленной везикулы.г,ьг.

1 .V. Альтернативные механизмы клеточного транспорта.

1.5.Кавеолинзависимый транспорт.

1.6. Транспорт через неокаймленныс ямки

1.7. Макропипоцитоз
.8. Взаимосвязь между различными механизмами эндоцитоза
1.9. Клеточные компартией ты, участвующие в эндоцитозе.
1 Ранние эндосомы сортировка и рециклизация
. . Транспорт гормонов в ядро.
2МА ТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
З.РЕЗУЛЬТА ТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Общая характеристика олигонуклеотидсвязывающих белков
клеточной поверхности.
3.2.0лигонукпеотидсвязывающие белки клеточной поверхности.
участвуют в транспорте олигонуклеотидов в клетку.
3.3.Олигонуклеотидсвязывающие белки клеточной поверхности
транспортируют олигонуклеотиды в закисляемые клеточные компартменты.
1.4.Применение фоточувствительных реагентов в исследовании
олигоиуклеотидсвязывающих белков
3.5.Конъюгаты олигонукиеотидсвязывающий белок олигонуклеотид транспортируются в клеточное ядро.
Ъ.б.Вклад различных механизмов в транспорт олигонуклеотидов в клетку
3.7. Транспорт полимерных нуклеиновых кислот
4 ВЫВОДЫ
5СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
Список сокращений
С1Я. 4Ы2хлорэтилЫметиламино бензиламидная группа рТ,о с1рТю
8 додецилсульфат натрия ПААГ полиакриламидный гель БСА бычий сывороточный альбумин
иазидотетрафторбензальгидразонЫпропиониламидная группа В7.1МН бензиламидная группа ТЬМБО Ы,К, Ы М, тетраметилэтилендиамин трис трисгидрокси метил ам и помогай бисакриламид Ы,Ы бисметилснакриламид ЭДТА этилендиаминтетраацетат ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота РНК рибонуклеиновая кислота гРНК фанепортная РНК ДНК КРС ДНК крупного рогатого скота 1ММ среда для культивирования клеток ЭТС эмбриональная телячья сыворотка АР адапторные белки
ВВЕДЕНИЕ


СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ. ВВЕДЕНИЕ. ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ. Введени е. Основные механизмы транспорта макромолекул. Клатринзависимый транспорт. Динамический цикл сборкидиссоциации клатриновых оболочек
1. Образование окаймленной везикулы. V. Альтернативные механизмы клеточного транспорта. Кавеолинзависимый транспорт. Клеточные компартией ты, участвующие в эндоцитозе. Транспорт гормонов в ядро. МА ТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Конъюгаты олигонукиеотидсвязывающий белок олигонуклеотид транспортируются в клеточное ядро. Ъ.б. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. С1Я. Ыпропиониламидная группа В7. Применение олигонуклеотидов, комплементарных последовательностям нуклеиновых кислот определенных клеточных генов, открывает новые возможности в плане регуляции активности генома. Реакционноспособные производные антисмысловых олигонуклеотидов рассматриваются как потенциальные химиотерапевтические препараты в лечении вирусных и онкологических заболеваний 1. Экспериментально показана способность олигонуклеотидов ингибировать экспрессию генов в клетках за счет комплементарных взаимодействий 2, 3. Существенным препятствием для развития антисмысловых технологий и практической гснотсрании является низкая проницаемость клеточных мембран для олигонуклеотидов и полимерных нуклеиновых кислот. Разработано множество различных подходов к решению этой проблемы. Синтезированы неионные аналоги олигонуклеотидов, обладающие повышенной способностью проникать через клеточные мембраны . Для повышения эффективности доставки в клетки олигонуклеотидов и генетических конструкций применяются разнообразные носители липосомы 7, реконструированные оболочки вирусов Сендая и гриппа 8, катионные липиды 8. В результате исследований, проводимых в НИВХ СО РАН и параллельно ведущихся зарубежными исследователями, в эукариотических клетках были обнаружены белки, связывающие экзогенные олиго и полинуклеотиды . В то же время имеются многочисленные экспериментальные данные, свидетельствующие в пользу эндоцитоза как наиболее вероятного механизма транспорта олигонуклеотидов в клетки , , . Однако участие выявленных олигонуклеотидсвязывающих белков в транспорте нуклеиновых кислот в клетки обсуждалось лишь предположительно. Целью настоящей работы было исследование механизмов транспорта олигонуклеотидов в культивируемые эукариотические клетки, определение роли олигонуклеотидсвязывающих белков клеточной поверхности в этом транспорте и выявление промежуточных и целевых клеточных компартментов, участвующих в транспорте олигонуклеотидов. Основные механизмы т ранспорта макромолекул в эукариотические клетки. Эндоцитоз как постоянное перемещение в клетку фрагментов плазматической мембраны и молекул из внеклеточного пространства является процессом, связывающим внутренний мир клетки с экстраклеточным пространством. Во всех эукариотических клетках обнаружены транспортные везикулы, образованные из плазматической мембраны. Эндоцитоз необходим дня поддержания клеточного гомеостаза и постоянною состава плазматической мембраны. Эндоцитоз является важным механизмом, поддерживающим физиологическое равновесие и на уровне многоклеточного организма, посредством контроля большого числа функций, которые клетка выполняет как элемент клеточного сообщества. Эти функции включают в себя передачу нервных, метаболических и пролиферативных сигналов, транспорт необходимых дзя жизнедеятельности клеток макромолекул, защиту от инфекционных агентов. В последние годы появилось много новых данных о функционировании клеточных структур, участвующих в эндоцитозе и механизмах, ответственных за молекулярную сортировку белков и липидов. Опубликованы обзорные работы по различным механизмам эндоцигоза, по конкретным этапам процесса транспорта и связанными с ними клеточными компарз ментами . Целью настоящего обзора является обобщение существующей информации но компартментам и структурам, участвующим в разных путях транспорта экс факлеточных макромолекул и жидкости в клетку.