Исследование сывороточных аутоантител к некоторым гепарин-связывающим белкам головного мозга в норме и при патологии

• Автор: Корженевский, Дмитрий Андреевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 118 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ Список используемых сокращений Введение

1. Обзор литературы

1.1 Роль факторов роста в регуляции физиологических процессов

1.2 Важнейшие представители факторов роста

1.1.1 Фактор роста фибробластов

1.1.2 Плейотрофин

1.1.3 Амфотерин

1.1.4 Семейство сосудистоэндотелиальных факторов роста 1.1.4.1 Плацентарный фактор роста

1.1.5 Семейство нейротрофических ростовых факторов

1.1.6 Инсулиноподобные факторы роста

1.1.7 Эпидермальный фактор роста

1.1.8 Ангиогенин
1.3 Роль аутоиммунитета в норме и патологии
2. Материалы и методы исследования
2.1 Экспериментальный материал
2.2 Применяемые реактивы и буферные растворы
2.3 Получение ОБ АР
2.4 Получение плейотрофина и амфотерина
2.5 Получение белка НВР
2.6 Определение АТ к изучаемым белковым антигенам в биологических жидкостях методом твердофазного ИФА
2.7 Стандартизация систем иммуноферментного анализа
2.8 Получение иммуноаффинного сорбента
2.9 ДСНэлектрофорез в ПААГ
2. Иммуноблоттинг
2. Определение количества белка
3. Результаты исследования
3.1 Исследование аутоиммунной реактивности к гепаринсвязывающим ростовым факторам амфотерину и плейотрофину в здоровом организме и при некоторых патологических состояниях
3.2 Получение белка НВР. Исследование сывороточной иммунорсактивности к НВР в норме и при различной патологии
4. Обсуждение полученных результатов
5. Выводы
6. Список литературы
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АТ антитела
аАТ аутоантитела
АГ антиген, антигены
ПААГ полиакриламидный гель
ФСБ фосфатносолевой буфер
ДСН до деци л сульфат натрия
ЭДТА этилендиаминтетраацетат
ИФА иммуноферментный анализ
ФРП фактор роста плаценты
ФРН фактор роста нервов
ЭФР эпидермальный фактор роста
ФРФ фактор роста фибробластов
СЭРФ фактор роста сосудистого эндотелия
ФМСФ фенилметилсульфонилфторид
ФР фактор роста
МНТФ мозговой нейротрофический фактор иммуноглобулины класса в вРАР кислый глиофибриллярный белок ЫТЗ нейротрофин
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Белки, принадлежащие к этой разнородной группе, играют важную роль в формировании органов и тканей у эмбриона, а также поддержании их функционирования во взрослом организме. Не составляет исключения и нервная система. Ее развитие сопряжено с прорастанием нервных волокон и образованием синаптических контактов. Видимо поэтому регулирующие их белковые факторы обладают способностью связывать гепарансульфат и его менее распространенный аналог гепарин. В число этих факторов входят и некоторые растворимые белки, например фактор роста фибробластов ФРФ, а также компоненты внеклеточного матрикса, как ламинин и фибронектин. Сравнительно недавно были обнаружены два иизкомолекулярных гепаринсвязывающих белка амфотерин кДа и илейотрофин, именуемый также НВвАМ кДа и показано их участие в формировании нервной системы эмбриона. Будучи ассоциированы с матриксом, они направляют и стимулируют прорастание нейритов. Амфотерин, обнаруживаемый в больших количествах на филоподиях нервных клеток, служит повидимому заменой ламинина, присутствие которого в центральной нервной системе невелико, и стимулирует адгезию а также, через активацию плазминогена инвазивный рост. Плейотрофин же, связываясь с мембранным белком Мсиндеканом, повышает подвижность клетки, активизирует прорастание нейритов, а по некоторым данным проявляет и митогенную активность. Известно, что аналогичное воздействие плейотрофин оказывает также на клетки сосудистого эндотелия, усиливая васкуляризацию, и на остеобласты в процессе роста или регенерации сосудистой и костной тканей соответственно. Учитывая столь существенное значение этих белков, можно предположить, что возможные нарушения аутоиммунитета к ним будут сопровождать разнообразные патологии нервной системы, особенно те, что формируются на стадии ее развития, или даже являться причиной некоторых из них. Способностью связывать гепарин обладают не только нейроростовые факторы, но и другие факторы роста. ФРП. Цели и задачи исследования. Цель настоящей работы состояла в изучении содержания аАТ к ряду гепаринсвязывающих белков головного мозга человека в норме и при различных патологических состояниях. ОРАР в биологических жидкостях. Изучить уровни сывороточных аАТ к нейроростовым факторам амфотерину и плейотрофину в комплексе с уровнем аАТ к ОРАР в норме и при различных заболеваниях нервной системы. Исследовать уровни аАТ к данным белкам у новорожденных и их родителей с целью определения группы риска по развитию патологии нервной системы. Провести частичную характеристику обнаруженного в процессе работы гепаринсвязывающего белка головного мозга НВР. Разработать эффективную схему его очистки. Разработать иммуноферментную тестсистему для определения уровня антител к НВР в биологических жидкостях. АТ к нему в сыворотке крови при различной нервнопсихической и акушерской патологии. Научная новизна и практическая ценность работы. Разработаны иммуноферментные тестсистемы для определения в биологических жидкостях АТ к нейроростовым факторам амфотерину и плейотрофину, а также к ОРАР. С помощью созданных тестсистем показано присутствие в крови здоровых людей аАТ к указанным белкам. Исследован характер изменений уровней сывороточных аАТ к амфотерину, плейотрофину и ОРАР при различных нервных и психических заболеваниях. Полученные данные могут быть взяты за основу при разработке подходов к оценке эффективности проводимой терапии. Выявлена корреляционная связь между высокими уровнями аАТ к рассматриваемым белкам в крови новорожденных и их матерей. Показано, что дети, у которых уровни данных аАТ не нормализуются в течение 3 мес. В ткани мозга человека идентифицирован ранее не описанный гепаринсвязывающий белок, обозначенный как НВР. Продемонстрировано частичное подобие химических структур НВР и фактора роста плаценты. Создана иммуноферментная тестсистема для определения аАТ к НВР в биологических жидкостях. Показано, что сыворотка здоровых доноров содержит определенный уровень аАТ к данному белку. Показано аномальное снижение уровня сывороточных аАТ к НВР у женщин, составляющих группы риска акушерской и перинатальной патологии.