+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Исследование активности рекомбинантного белка LIF про- и эукариотического происхождения на культуре эмбриональных стволовых клеток мыши

Исследование активности рекомбинантного белка LIF про- и эукариотического происхождения на культуре эмбриональных стволовых клеток мыши
  • Автор:

    Петрова, Раушания Рашитовна

  • Шифр специальности:

    03.00.04

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2006

  • Место защиты:

    Пущино

  • Количество страниц:

    135 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    250 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы
"1.2. ХАРАКТЕРИСТИКИ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК 1.4. МОЛЕКУЛЯРНАЯ СТРУКТУРА БЕЛКА I.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. ЦИТОКИНЫ СЕМЕЙСТВА I.

1.2. ХАРАКТЕРИСТИКИ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

ЭСК МЛЕКОПИТАЮЩИХ

1.3. ОРГАНИЗАЦИЯ ГЕНА

1.4. МОЛЕКУЛЯРНАЯ СТРУКТУРА БЕЛКА I.

1.5. ЗНАЧЕНИЕ ИЗОФОРМ ЦИТОКИНА I

1.6. МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ I НА ЭСК МЛЕКОПИТАЮЩИХ.

1.7. ПУТИ IСИГНАЛИЗАЦИИ В ЭСК

1.8. ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ЭСК МЛЕКОПИТАЮЩИХ i vi

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ


2.1. ПЛАЗМИДНЫЕ ВЕКТОРЫ.
2.2. КЛОНИРОВАНИЕ КДНК ГЕНА .
2.3. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ ДНК В АГАРОЗНОМ ГЕЛЕ
2.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ГЕНА i
2.5. ПОЛУЧЕНИЕ ПРОКАРИОТИЧЕСКОГО БЕЛКА I
2.6. БЕЛКОВЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПААГ.
2.7. ДИАЛИЗ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА I.
2.8. БЛОТ АНАЛИЗ ИММУНОБЛОТТИНГ.
2.9. ПОЛУЧЕНИЕ I В КЛЕТКАХ ЛИНИИ
2 ОЦЕНКА ЭКСПРЕССИИ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА I.
. ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ ИФА.
. ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ I.
2 ТЕСТИРОВАНИЕ АКТИВНОСТИ I НА ЭСК МЫШИ.
2 МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ЭСК i vi
. МОРФОЛОГИЧЕСКИЙ КРИТЕРИЙ ЭСК
. ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ И ВРЕМЯ УДВОЕНИЯ.
. ЦИТОХИМИЧЕСКИЙ ТЕСТ НА ВЫЯВЛЕНИЕ ЭЩФ
2 ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ЭСК МЫШИ ЛИНИИ 1 i vi
2 СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА В РАЗНЫХ ТИПАХ КЛЕТОК.
3.2. БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ РЕКОМБИНАНТНЫХ 1
3.3. ИНДУКЦИЯ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ЭСК МЫШИ В УСЛОВИЯХ ПРОЛОНГИРОВАННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ С I.
4. ВЫВОДЫ
5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ВВЕДЕНИЕ


Широкий спектр действия I на ЭСК связан с тем, что этот регуляторный белок способен активировать разные каскады цитоплазматических реакций и, соответственно, разные генымишени, ответственные за плюрипотентность, пролиферативную активность и дифференцировку. Аналогичная картина выявляется при действии на ЭСК рекомбинантных цитокинов I, полученных на основе микроорганизмов или же клеток млекопитающих i . Несмотря на огромный фактический материал, в вопросах I регуляции ЭСК млекопитающих остается много неизвестного. Этот цитокин необходим разным видам для поддержания i vi генетически стабильных линий плюрипотентных клеток из ранних зародышей на стадии бластоцисты . Vii, , iiii, . Связано ли это с видовыми особенностями ЭСК или же с различиями в свойствах рекомбинантного I, остается не ясным. Для ответа на эти вопросы необходимы сравнительные исследования. Данные литературы, полученные на разных линиях ЭСК, в разных системах культивирования с коммерческими препаратами рекомбинантного I, полученными разными способами, сравнивать трудно. Они обнаруживают биохимическую и видовую гетерогенность i . Возможно, что на биологическую активность рекомбинантного I влияет не только первичная структура этого белка, но и его постгрансляционные модификации, что весьма вероятно при использовании разных систем экспрессии. Для получения ответов на эти вопросы необходимы сравнительные исследования функциональной активности продуктов экспрессии одного гена i при действии на стабильную Iзависимую культуру клеток. В связи с этим целью наших исследований было определение активности рекомбинантного белка I мыши, полученного в результате экспрессии одного гена i в про и эукариотических клеткахпродуцентах, и исследование характера действия на гшорипотентность и дифференцировку Iзависимой линии ЭСК мыши для того, чтобы проверить, влияет ли система экспрессии на функциональные свойства рекомбинантного белка I. Конструирование экспрессионных векторных систем со встроенным геном i мыши для про и эукариотических клетокпродуцентов, выделение и хроматографическая очистка рекомбинантных белков I. Оптимизация условий для введения плазмидных конструкций и отбор клетокпродуцентов со стабильной экспрессией гена i мыши. Сравнение биологической активности рекомбинантного белка I про и эукариотического происхождения при действии на плюрипотентные ЭСК мыши в культуре i vi. Оценка скорости и характера роста, а также способности рекомбинантного I поддерживать ЭСК мыши в плюрипотентном состоянии в зависимости от способов очистки, концентрации I в среде и длительности культивирования. Анализ способности рекомбинантного белка I мыши влиять на процессы цитодифференцировки ЭСК в условиях пролонгированного культивирования. ЦИТОКИНЫ СЕМЕЙСТВА 1. Цитокин принадлежит к семейству интерлейкина6 I6, куда входят также I6, I, кардиотропин1 СТ1, онкостатин М , целюлярный нейрональный трофический фактор и недавно открытый кардиотропин подобный цитокинцитокинподобный фактор iii iii 1, i, . Некоторые из перечисленных цитокинов I, , СТ1 и связываются с ацепью Iрецептора. Связывание каждого цитокина с его рецептором приводит к димеризации с трансмембранным гликопротеином и, в результате, образованию высокоаффинного рецептора с последующей активацией сигнального трансдуктора i, пути передачи сигнала и фактора транскрипции i, . ЭСК i, ii . I6, I1 и . I4,1 . Показано, что продукция I взаимосвязана с процессами инфекции и воспаления i . При исследовании сывороток здоровых и больных пациентов была найдена корреляция между количеством циркулирующего в крови I и степенью воспаления. В сыворотке здоровых людей цитокин I в основном не диагностируется. Сыворотка пациентов с мягкой инфекцией или воспалением содержит низкий уровень I, в то время как пациенты с септическим шоком обнаруживают достаточно высокий уровень I в крови i . Физиологически наиболее важное и интересное место продукции I это эндометрий . Максимального значения концентрация I в эндометрии достигает в период имплантации бластоцисты в матку . Это показано не только на мышах, но и на других млекопитающих i . Цитокин I сильный иммунноэндокринный модулятор, играющий ключевую роль в процессах подержания беременности у животных и человека i , Vii, .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 1.313, запросов: 966