Индукция тирозинаминотрансферазы печени при гипертермии

• Автор: Чарыева, Гульнара Ходжамкулиевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Ашхабад
• Количество страниц: 160 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 4.
Глава I. ТИРОЗИНАШНОТРАНСФЕРАЗА, ЕЕ РОЛЬ В ГОМЕОСТАЗЕ КЛЕТОК И МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ СДВИГИ В ОРГАНИЗМЕ ПРИ ГИПЕРТЕРМИИ обзор литературы

1. Множественные формы тирозинаминотрансферазы. 8.

2. Индукция тирозинаминотрансферазы .

5. Структурнометаболические изменения в организме при гипертермии .

Глава П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Выделение яДерной и митохондриальной фракции печени

2. Гельфильтрация белков постмитохондриальной фракции печени на колонке с сефадексом

0 .

3. Электрофорез белков постмитохондриальной

фракции печени в полиакриламидном геле . .
4. Определение включения метионина в белки постмитохондриальной фракции печени .
5. Определение активности тирозинаминотрансферазы .
6. Определение активности фенилаланингидрокси
7. Определение количества белка,
Глава Ш. ИССЛЕДОВАНИЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТИРОЗИНАМИНОТРАНСФЕРАЗЫ ПЕЧЕНИ ПО СУБКЛЕТОЧНЫМ ФРАКЦИЯМ ПРИ ГИПЕРТЕРМИИ.
I. Влияние температуры на активность тирозин
аминотрансферазы печени .
2. Характер распределения активности тирозинаминотрансферазы печени по субклеточным фракциям при различных условиях, .
Глава 1У. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ГИПЕРТЕРМИИ НА РАЗЛИЧНЫЕ
ИЗОФОРМЫ ТИРОЗИНАМИНОТРАНСФЕРАЗЫ В ПОСТМИТОХОНДРИАЛЬНОЙ ФРАКЦИИ ПЕЧЕНИ.
I. Исследование методом солевого фракционирования распределения активности тирозинаминотрансферазы по различным изоформам фермента
в постмитохондриальной фракции печени
2. Исследование распределения активности тирозинаминотрансферазы по различным изоформам фермента в постмитохондриальной фракции печени методом гельхроматографии
3. Исследование распределения активности тирозинаминотрансферазы по различным изоформам фермента в постмитохондриальной фракции печени методом электрофореза в полиакриламидном геле .
Глава У. ИССЛЕДОВАНИЕ СКОРОСТИ ВКЛЮЧЕНИЯ 5МЕТИ0НИНА В РАЗЛИЧНЫЕ ИЗОФОРМЫ ПОСТМИТОХОНДРИАЛЬНОЙ ФРАКЦИИ
ТИРОЗИНАМИНОТРАНСФЕРАЗЫ ПЕЧЕНИ КРЫС.2.
Глава У1. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. 7.
ВЫВОДЫ 7.
ЛИТЕРАТУРА


I0 дальтон по данным гельфильтрации i 0 дальтон. Молекулярная масса у i vii по данным гельфильтрации составляет дальтон , . , i , . Столь высокий молекулярный вес указывает на возможность существования субъединичного строения фермента. А тот факт, что фермент связывает 4 моля пиридоксаль5фосфата на II грамм фермента I моль наводит на мысль, что молекула ТАТ состоит из 4х субъединиц Vi i. Это предположение поддерживается исследованиями седиментационного равновесия ТАТ в гуанидинхлорире, показывающими, что нативный фермент частично расщепляется на компоненты с молекулярным весом 0. Этот результат хорошо согласуется с молекулярным весом 0, ожидаемым для четырех идентичных субъединиц ii . Количество пептидов в триптическом гидролизате ТАТ и количество цианогенбромидных фрагментов, а также данные по аминокислотному составу фермента позволили сделать вывод о том, что ТАТ состоит из четырех идентичных ИЛИ СХОДНЫХ субъединиц ii . найдено, что каждая из 4х субъединиц молекулы фермента имеет молекулярный вес 0 дальтон. Адлером с сотрудниками аналитическим электрофорезом очищенного препарата ТАТ в полиакриламидном геле получены аналогичные данные. Молекулярные веса двух субъединиц молекулы ТАТ, найденных и Ыекег1в равны 0 И 0 дальтон , , . v , считают, ЧТО ТАТ представляет димер двух идентичных субъединиц с молекулярной массой 0 дальтон. i i . М фермент также строго специфичен по отношению к донору аминогрупп ь тирозину. Субстратом для в небольшом количестве могут быть ДИОКСИфенилаланин, треонин i , Ьа . Молукулярная гетерогенность установлена в ряде работ, хотя долгое время в литературе сохранялось представление об этом ферменте как об однородном белке. Ф.Б. Левину впервые удалось продемонстрировать, что введение кортизола крысам увеличивает ферментативную активность только одной из двух фракций , которые обнаруживаются после электрофореза экстракта печени крыс в агаровом геле, а именно анодной фракции. В дальнейшем с помощью осадочной гистохимической реакции было показано, что в пределах каждой такой фракции выявляется еще по две полосы анодные и катодные изоферменты Мертвецов, Сапрыкин, . Наличке гетерогенности фермента, обнаруживаемой различными методами, отмечали и другие исследователи i . Чарыева, Курбанов, Чарыева, . Согласно данным Vi i. Однако при электрофорезе препаратов фермента в 7 и ном полиакриламидном геле обнаруживаются три полосы с ферментативной активностью тирозинаминотрансферазы. При электрофорезе экстрактов печени крыс в пластинках полиакриламидного геля удалось обнаружить три фракции с ферментативной активностью , iv , i . А, В, С в порядке возрастания электрофоретической подвижности. С увеличивается, а содержание форм А и В уменьшается после заключительной стадии очистки форму А обнаружить совсем не удается ii i. ii , не является артефактом электрофореза, а отражает существование трех активных форм фермента i viv. Три пика ферментативной активности наблюдались при хроматографии очищенных препаратов фермента на КМсефадексе , все 3 пика имели одинаковую иммунохимическую специфичность i . . , , . i , Ii . i , i, , которые обозначаются как I, П, Ш, 1У формы в соответствии с порядком элюции с колонки с гидроксилапатитом. Форма I присутствует, кроме печени, в тканях печени,в тканях почки и сердца, в то время как формы П, Ш, 1У обнаруживаются только в печени Ii , i, . Форма I была выделена из почки и сердца и очищена в раз ii . Авторы. по кинетическим и физикохимическим свойствам. Установлено, что форма I существенно отличается от остальных форм по величине константы Ыихаэлиса Км для тирозина. I и тремя другими формами .