Онтогенетическая реализация биохимических механизмов в иммунитете насекомых

• Автор: Гайфуллина, Луиза Римовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 174 с. : ил.

1.1. Гу моральный иммунитет насекомых

1.1.1. Гемолимфатические агглютинины насекомых и их участие в защитных реакциях

1.1.2. Фенолоксидазная система и се место в иммунитете насекомых

1.1.3. Участие антиокислительных систем в защитных реакциях насекомых

1.2. Клеточные иммунные реакции фагоцитоз, грануло и кансулообразование

1.3. Онтогенетические особенности защитных систем насекомых

Глава 2. Объекты и методы исследований

2.1. Условия содержания объектов исследований

2.1.1. Колорадский жук , i i ii

2.1.2. Комнатная муха i, i i .

2.2. Постановка лабораторных экспериментов

2.2.1. Способы бактериального воздействия на . i .
2.2.2. Условия температурного стрессового воздействия на
М.i .
2.2.3. Постановка лабораторных экспериментов для установления онтогенетических особенностей биохимических и клеточных защитных реакций . i .
2.2.4. Постановка лабораторных экспериментов для определения длительности защитных реакций на действие экзогенных факторов в онтогенезе .i .
2.2.4.1. Определение наиболее эффективного углевода
2.2.4.2. Эксперимент по определению длительности заиштных
реакций на действие ацетил глюкозам н н а и высокой температуры в онтогенезе .i .
2.3. Методика биохимических экспериментов
2.3.1. Методика измерения активности катал азы
2.3.2. Методика измерения активности нерокендазы
2.3.3. Методика измерения фенолоксидазной активности
2.3.4. Методика электрофоретического изучения активности фенолоксидазы
2.3.5. Методика определения агглютинирующей активности гемолимфы
2.3.6. Методика определения углеводной специфичности гемагглютиниов
2.4. Методика приготовления препаратов гемолимфы
2.5. Математическая обработка результатов
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 3. Огтогенетические особенности защитных биохимических реакций i i .
3.1. Огтогенетические особенности агглютинирующей активности гемолимфы i i . на начальном этапе развития инфекции
3.2. Динамика ДОФАоксидазной и тирозиназной активности гемолимфы при воздействии БТБ на разных стадиях онтогенеза i i .
3.3. Динамика каталазной и пероксидазной активности гемолимфы при воздействии БТБ на разных стадиях онтогенеза i i .
Глава 4. Клеточные иммунные реакции в ответ на бакериальное заражение в онтогенезе i i .
4.1. Изменение соотношения различных типов гемоцнтов i i . в оггогенезс
4.2. Гемоцитарные реакции в онтогенезе i i
. при однократном действии БТБ
4.2.1. Гемограммы личинок i i . при однократном действии БТБ
4.2.2. Гемограммы куколок i i . при
однократном действии БТБ
4.2.3. Гемограммы имаго i i . при
однократном действии БТБ
4.3. Гемоцитарныс реакции в онтогенезе i i . при двукратном действии БТБ
4.3.1. Гемограммы личинок i i . при двукратном действии БТБ
4.3.2. Гемограммы куколок i i . при
двукратном действии БТБ
4.3.3. Гемограммы имаго i i . при
двукратном действии БТБ
Глава 5. Длительность защитных биохимических реакций i . при действии экзогенных факторов
5.1. Физиологические показатели в онтогенезе М. i . при действии сахаров
5.2. Влияние и высокой температуры на жизнеспособность и защитные ферментативные системы в онтогенезе i .
5.2.1. Показатели жизнеспособности i . при действии и высокой температуры
5.2.2. Активность кагалазы, иероксидазы и ДОФАоксидазы в онтогенезе i . при действии и высокой температуры
5.2.3. Электрофоретические спектры фенолоксидазы i . при действии и высокой темперагуры
Заключение
Список литературы
Введение


Прежде всего, необходимо отметить, что в своем большинстве внешние и внутренние защитные комплексы являются местами действия либо местами синтеза фенолоксидаз в организме насекомых, что определяет участие данных ферментов практически во всех клеточных и гуморальных иммунных реакциях i, , i . В организме насекомых фенолоксидазы синтезируются в виде неактивного предшественника профенолоксидазы, активация которого может осуществляться ламинарином, зимозаном, продуктами микробного происхождения, а именно компонентами грибных и бактериальных клеточных стенок р1,3глюканами, пептидогликанами и липополисахаридами ЛПС , . Эта активация называется фенолоксидазоактивирующей системой или профснолоксидазным каскадом и опосредуется белками распознавания, ссриновыми протеиназами и ингибиторами протсиназ рис. В году сделано предположение о тесной связи профенолоксидазного каскада с системой распознавания чужеродного материала у членистоногих , . Позднее у . В году у . Да, связывающий грамотринательные бактерии и структурно сходный с бактериальными Р1,3глюканазами, что не исключает возможности его активации при связывании Р1,3глюкана из клеточных стенок грибов . Также недавно охарактеризован распознающий фактор . Да, который конститутивно экспрессируется в жировом теле и секретируегся в гемолимфу. Его первичная структура содержит участки, сходные с аминокислотной последовательностью глюканаз. Белок может связываться с поверхностью клеток грибов, грамотрицательных и 1рамположительных бактерий. После связывания с р1,3глюканом фактор способен взаимодействовать с сериновой иротеиназой, стимулируя протеолиз плазменной профенолоксидазы Ма, , . Сериновые протеиназы, активирующие профенолоксидазы при раниченном протеолизе, с молекулярной массой около кДа выделены у i . В гемолимфе . НР1, НР2, НРЗ и НР4, экспрессируемые в гемоцнтах i . Кроме того, имеются данные, указывающие, что в определенных случаях для активации профенолоксидазы помимо сериновых иротсиназ необходима определенная комбинация активаторов. Так, профенолоксидаза i требует для активации в дополнении к ссриновым протсииазам I фактор , . Помимо активации регуляция фснолоксидазоактивирующсй системы членистоногих включает механизм ингибирования, так как токсичные интермедиаты реакций фенолоксидаз могут повредить тканям самого хозяина. Кроме того, регуляция фенолокендазной активности может осуществляться не только компонентами профенолоксидазного каскада, но и в процессе синтеза ферментов. У мух рода ii активация фснолоксидаз наблюдалась в первые часы инфицирования, вызванного , а через часа отмечалось достоверное повышение уровня содержания мРНК гена профенолоксидазы . Стабильное повышение уровня фенолокендазной активности в течение нескольких суток у i было вызвано инвазией i i. Но ни бактериальное, ни паразитарное воздействие не индуцировали экспрессии единственного клонированного у . О.В. Сухоруковой наряду с увеличением активности тирозиназы и дофаоксидазы при бактериальном воздействии установлено повышение уровня экспрессии гена профенолоксидазы на ранних стадиях развития инфекции у комнатной мухи, что свидетельствует о сопряженности процессов синтеза ферментов v с регуляцией фенолокендазной активности при инфицировании насекомых. На разных видах насекомых показано, что местом локализации фснолоксидаз в гемолимфе являются гемоцигы, а именно гранулоциты и эноцитоиды i . В то же время сообщается об обнаружении фенолокендазной активности в плазме гемолимфы , , ii . Последнее удалось осуществить добавлением в гемолимфу протеаз, активирующих плазменную профенолоксидазу , . Развитие инфекции в организме насекомого вызывает заметные изменения не только в уровнях, но в распределении фенолокендазной активности. Так, при вегетативном развитии vi i в личинках xi отмечается повышение активности плазменной фенолоксидазы с сопутствующим снижением титра фермента в гемоцигарном лизате , i, . Данное изменение авторы объясняют шгголитическим действием гриба на гемоциты и высвобождением активной фенолоксидазы в плазму.