Изучение чувствительности опухолевых клеток человека к действию цитотоксических лимфоцитов, индуцированных дендритными клетками

• Автор: Родина, Алла Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 129 с. : ил.

Содержание.

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток.

1.1.1. Множественная лекарственная устойчивость, определяемая функцией белка .

1.1.2. Экспрессия в нормальных тканях и клетках

1.1.3. Экспериментальные подходы к обращению МЛУ.

1.1.4. Роль ключевых генов, контролирующих апоптоз, в лекарственной устойчивости опухолевых клеток.

1.2. Дендритные клетки и их роль в индукции клеточного противоопухолевого ответа.

1.2.1. Дендритные клетки человека и их свойства.

1.2.2. Методы получения дендритных клеток i vi.
1.2.3. Методы количественного определения антигенспецифических Тлимфоцитов.
1.2.4. Опухолеспецифические антигены человека, распознаваемые Тлимфоцитами.
1.3 Заключение.
Глава 2. Материалы и методы.
Глава 3. Результаты и обсуждение.
3.1. Характеристика исследуемых линий опухолевых клетокмишеней.
3.1.1. Характеристика чувствительных и резистентных линий клетокмишеней по уровню экспрессии I.
3.1.2. Исследование чувствительности клеток аденокарциномы молочной железы человека линий 7 и 7 и аденокарциномы яичнника линий V3 и V к доксорубицину.
3.1.3. Исследование возможности преодоления МЛУ с помощью верапамила и направленного транспорта ДР с использованием конъюгата ЛФПДР.
3.1.4. Характеристика чувствительных и резистентных линий клетокмишеней по уровню экспрессии белков Вс и Вах.
3.2 Получение и характеристика зрелых дендритных клеток человека.
3.2.1. Оптимизация условий получения зрелых ДК с помощью препарата Лейкинферон.
3.2.2. Характеристика зрелых ДК.
. Индукция специфических цнтотоксическнх Тлимфоцитов с помощью аутологических ДК и анализ их цитотоксической активности в отношении чувствительных и резистентных опухолевых клеток.
.1. Индукция специфических цнтотоксическнх Тлимфоцитов с использованием опухолеспецифических пептидов и анализ их цитотоксической активности в отношении чувствительных и резистентных опухолевых клеток.
3.3.2 Индукция специфических цитотоксических Тлимфоцитов с использованием лизатов опухолевых клеток и анализ их цитотоксической активности в отношении чувствительных и резистентных опухолевых клеток.
3.3.3. Индукция специфических цитотоксических Тлимфоцитов с использованием суммарной опухолевой РНК и анализ их цитотоксической активности в отношении чувствительных и резистентных опухолевых клеток.
3.3.4. Анализ количества антигснспсцифических лимфоцитов, индуцируемых с помощью ДК, нагруженных лизатом опухолевых клеток или их РНК.
3.4. Заключение.
Выводы.
Список литературы


Одним из перспективных направлений в индукции специфического клеточного противоопухолевого иммунитета является разработка методологии, основанной на использовании дендритных клеток ДК эффективных антигенпредставляющих клеток АПК, обладающих уникальной способностью представлять антигены наивным Тклеткам и вызывать их дифференцировку в аитигенспецифические цитотоксические Тлимфоциты ЦТЛ ,7,6. Панель опухолсспсцифичсских антигенов ОСА, распознаваемых ЦТЛ, уже идентифицирована ,,3 и их список продолжает пополняться и известны требования, предъявляемые к ДК для эффективной индукции опухолеспецифических ЦТЛ ,0,8,2. В связи с этим, целью данного исследования явилось изучение чувствительности исходных и резистентных опухолевых клеток человека к действию опухолеспецифических ЦТЛ, индуцированных с помощью ДК в экспериментах i vi. Научная новизна работы. Впервые показано, что количество белка Вс в клетках высокорезистентных линий V и 7, экспрессирующих ген 1, ниже, чем в исходных чувствительных клетках V3 и 7. Впервые показано, что мутация, обнаруженная в гене Вах в клетках линии БКОУЗ, приводит к инактивации проапоптотической активности белка Вах и вносит вклад в устойчивость этих клеток к действию ДР. Впервые показано что ЦТЛ, индуцированные с помощью ДК, нагруженных опухолевоспецифическим пептидом, лизатом или РНК чувствительных клеток высоко активны как в отношении чувствительных к ДР клеток, так и в отношении высоко резистентных опухолевых клеток, экспрессирующих ген МЛ У 1I и ген в сочетании с инактивированным в результате мутации геном Вах. Практическая значимость исследования. Оптимизирован метод приготовления зрелых иммуногенных ДК благодаря использованию препарата Лейкинферон в качестве источника цитокинов для индукции созревания ДК. Выявлен нетоксичный диапазон концентраций лизатов опухолевых клеток для приготовления иммуногенных ДК. Обнаруженная чувствительность высокорезистентных опухолевых клеток к действию ЦТЛ, индуцированных с помощью ДК, нагруженных опухолеспецифическими антигенами, позволяет рекомендовать использование данного метода иммунотерапии при высокорезистентных опухолях. Апробация работы. Результаты исследований были доложены на XXV Съезде международного общества по изучению онкофетальной биологии и медицины г. Монтр, на Международном симпозиуме Биология клетки в культуре г. СанктПетербург, на XIV Всероссийском симпозиуме Структура и функции клеточного ядра. СанктПетербург, на I Всероссийской научнопрактической конференции Биотерапия рака г. Москва, на VII Международном симпозиуме по дендритным клеткам г. Бамберг, на III Международном симпозиуме по генетическим противоопухолевым препаратам г. Амстердам, на Седьмом и Восьмом Всероссийском форуме с международным участием Дни иммунологии в СанктПетербурге г. СанктПетербург. Апробация работы состоялась на научном семинаре МНИИМЭ октября г. Публикации. По теме диссертации опубликовано печатных работ. Структура диссертации. Работа иллюстрирована рисунками и таблицами. Глава 1. Обзор литературы. МЛУ это невосприимчивость популяции клеток опухоли одновременно к целому ряду химиотерапевтических препаратов разного химического строения и с разным механизмом действия на клетку ,,. Формирование МЛУ опухолевых клеток к химиопрепаратам может быть обусловлено изменениями на нескольких этапах реализации повреждающего действия химиопрепарата от проникновения вещества в клетку до ее программируемой гибели апоптоза. Апоптоз клеток вызывает большая часть токсических воздействий цитостатики 9, ионизирующее излучение , некоторые токсические вещества ,,2, действие цитотоксических Тлимфоцитов 4,3, а также лишение клеток ростовых факторов 2,5 и некоторые патологические процессы 2. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток. Современная химиотерапия обычно использует комбинацию лекарственных средств, принадлежащих к разным классам и действующих на разные клеточные мишени 3,,8. Примеры некоторых химиотерапевтических препаратов и их мишеней в клетке приведены в Табл. Таблица 1. Основные классы химиотерапевтических препаратов и их мишени.