Изучение молекулярных механизмов антимикробной защиты морской звезды Asterias Rubens

• Автор: Мальцева, Арина Леонидовна
• Шифр специальности: 03.00.04, 03.00.08
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 156 с. : ил.

оглавление
ВВЕДЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

. ОСОБЕННОСТИ ЗАЩИТНЫХ РЕАКЦИЙ ИГЛОКОЖИХ Л. Общие замечания Л. Фагоцитоз и фагоциты

Л. Инкапсуляция, гемостаз и моруляриые клетки Л. Другие типы целомоцитов и их участие в защите организма Л. Зона гемопоэза
Л. Рецепторы, вовлеченные в распознавание патогенов Л. Цитотокснческие гуморальные молекулярные факторы
Л2. АНТИМИКРОБНЫЕ ПЕПТИДЫ И ИХ РОЛЬ В ЗАЩИТЕ ОРГАНИЗМА Л. История вопроса Л. Определяющие свойства
Л. Разнообразие и классификация антимикробных пептидов Л. Цистеинбогатые пептиды Л. аСпиральные молекулы
Л. Пептиды с высокий содержанием определенных аминокислот Л. Протеолитические фрагменты с антимикробной активностью Л. Механизм противобактериального действия

МАТЕРИАЛЫ и МЕТОДЫ

. ИДЕНТИФИКАЦИЯ АНТИМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ МГ1. Животные 2. Экстракты М. Диаз из М4. Ультрафильтриция I5. Препаративный электрофорез
I6. Обратнофазовая высокоэффективная жидкостям хроматография I7. Аналитические эпсктрсхрорезы М I8. Массспектрометрия 9. Антимикробный тест
МП . Определение аминокислотной последовательности М2. ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ПЕПТИДА АгГ1п1 М. Животные
М. Определение нуклеотидной последовательности транскрипта М. Определение размера транскрипта М. Синтез пептидных аналогов
М. Определение минииазьпой ингибирующей концентрации
М2б. Тест на изменение проницаемости мембраны бактериальной клетки
М. Изучение скорости проявления антимикробной активности
М. Изучение ингибирующей активности в отношении раковых клеток
М3. Статистическая обработка данных
РЕЗУЛЬТАТЫ
Р1. ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСТРАКТОВ
Г2. ИДЕНТИФИКАЦИЯ АНТИМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ
Р. Идентифицированные пептиды, которые были секвенированы
Р. Идентифицированные пептиды, которые не были секвенированы
РЗ. СЕКВЕНИРОВАНИЕ ОЧИЩЕННЫХ ПЕПТИДОВ
РЗ1. Пептид АгАсЕ I
РЗ2. Пептид АгАс
РЗЗ. Пептиды АгНм1 и АгН
РЗ4. Пептид АгЕ1п1
Р4. СЕКВЕНИРОВАНИЕ УЧАСТКА ГЕНА. КОД 1РУЮЩЕГО ПЕПТИД АгЫп
РЗ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РАЗМЕРА ТРАНСКРИПТА ЫпА
Р6. ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ А КТИВНОСТИ АгЕЫ
Р6 . Оценка широты спектра антимикробной активности АгЕ1п
Р. Изучение механизма антибактериального действия АгЕ1п1
ОБСУЖДЕНИЕ
О. ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСТРАКТОВ
1. Антимикробная активность в целомической жидкости
2. Разнообразие пептидов
О3. Локализсщия пептидов и их появление в клетке
4. Участие в защите организма
5. Производные белков цитоскелета. Увеличение уровня зкспрессии гена филамина.
6. Антимикробные пептиды фрагменты других белков. I
. ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ АгПп1
1. Выбор АгЫп1
2. АгЕ1п1. Свойства
3. АгЕ1п1. Синтетические анашой
4. АгЕ1п1. Механизм действия
ВЫВОДЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Вовлечение в круг рассмотрения представителей неисследованных или малоисследованных таксонов, выделение и изучение новых антимикробных пептидов имеет не только упомянутое ранее теоретическое значение, но также и значительный практический интерес. Проблема появления среди патогенных микробов линий, устойчивых к действию так называемых классических антибиотиков . Ваксман, 2. С течением времени эта проблема становится все болсс острой. Антимикробные пептиды представляют собой возможную альтернативу классическим антибиотикам, т. Viii , . Иглокожие как относительно примитивные представители вторичноротых могут служить важным звеном для сравнительной морфофункционалыюй характеристики систем антимикробной зашиты в различных филогенетических ветвях многоклеточных животных. Изучение защитной системы иглокожих позволяет провести сравнительный анализ таких систем между первично и вторичноротыми беспозвоночными, а также между позвоночными и беспозвоночными вторичноротыми. Кроме того, иглокожие представляют собой сравнительно крупных полостных животных, удобных для экспериментальных исследований. Все это делает массовых беломорских морских звезд i i, i, i, ii в высшей степени привлекательным объектом для сравнительноиммунологических исследований. Реализация защитных реакций это функция тканей внутренней среды см. Горьшшна Чага, , каковые у иглокожих представлены, в первую очередь, целомической жидкостью, наполняющей обширную полость тела и населенной целомоцитами. Наличие антимикробной активности у иглокожих было показано в различных тканях и органах i, i . Из факторов этой активности были идентифицированы только лизоцим i i, и дсфенсинподобный антимикробный пептид Мирончик, . Однако для изученных видов обычным является присутствие в одном организме различных антимикробный пептидов см. Поэтому нами и было предпринято болсс подробное исследование целомической жидкости . Таким образом, целью нашей работы являлось охарактеризовать антимикробный защитный потенциал целомической жидкости морской звезды А. Ьепз. Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи. Ах1ег1а гиЬет, и выявление присутствия ан тимикробной активности в этих экстрактах иили в плазме целомической жидкости. Идентификация активных компонентов и выделение их в чистом виде. Изучение физикохимических свойств выделенных пептидов, их секвсыирование. Синтез искусственных аналогов для болсс детального изучения их биоактивности. Характеристика антимикробной активности выделенных пептидов широты спектра ингибирующего действия, а также механизма реализации этого действия. Характеристика связи структурных особенностей пептидов с механизмом антибактериального действия. Зо, З. Эг. V1 v i Ii i консервативный домен, входящий в состав фактора фон Виллебранда или интегринов V1подсемейства. Л1. I. Общие замечания. Тип i один из наиболее обширных типов беспозвоночных выделяется от до классов, первые представители которого описаны из Эдиакарской фауны докембрий, наибольшего расцвета разнообразие иглокожих достигает в ордовике, после чего большая часть классов вымирает см. Современные представители принадлежат шести классам ii морские лилии, ii морские маргаритки, i морские звезды, ii змеехвостки, i морские огурцы и ii морские ежи. О возможных филогенетических отношениях между классами иглокожих высказывались самые различные мнения, ни одно из них не является общепринятым выделение ключевых ароморфозов внутри группы весьма затруднительно, расстояние по вертикали от примитивных форм до продвинутых сравнительно мало, сами эти понятия в отношении группы в значительной степени условны см. Беклемишев, i, i, i, i, и др. У всех иглокожих имеется несколько полостей целомического происхождения гемальиая. Жидкости, наполняющие указанные полости, населены подвижными клетками целомоцитами. Считается, что состав форменных элементов сходен во всех полостях, хотя специальных исследований на эту тему не так много см. Предметом подробного изучения являлись клетки висцерального целома, причем подобного рода исследования проводились, главным образом, па представителях грех классов голотурии, морские звезды и морские ежи. Одной из функций целомоцитов иглокожих является обеспечение защитных реакций.