Амилолитическая активность каталитических антител

• Автор: Бобрикова, Дина Робертовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 106 с. : ил.

НитрофенилаОглюкопиранозид. ИндолэтилРОглюкопиранозид. ЫрМеитЬ4. ИидолэтилР0галактопиранозилбиса0глкжопиранозила0глюкопиранозид. Индолэтил 6И2аминоэтиламино1нафталенсульфонат6дезоксиР0галактопиранозилбиса1 глюкопиранозила0глюкопиранозид. Доноры и пациенты. Выделение абзимов. Получение и очистка фрагментов иммуноглобулинов. Другие методы. Доказательство принадлежности амилолитической активности антителам. Проверка активности. Тип действия. Измерение флуоресценции. Анализ трапегликозилирующей активности. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Электрофоретическая гомогенность препаратов абзимов. Синтез субстратов. Амилолитичсская активность различных препаратов иммуноглобулинов. Гидролитические свойства амилолитических абзимов. Нзависимость гидролиза субстратов. Кинетические параметры гидролиза. Зависимость каталитической эффективности от длины субстрата. Тип действия. Глюкозидазная активность. Анализ конечных продуктов гидролиза субстратов. Различия в специфичности связывания субстратов препаратами антител из крови пациентов с СКВ. Другие гликозидгидролазные активности. Анализ констант ингибирования. Трансгликозилирующая активность абзимов. Субстратная специфичность абзимов в сравнении с а амилазами. ВВЕДЕНИЕ. Актуальность проблемы. Феномен наличия у иммуноглобулинов каталитических свойств активно исследуется в течение последних десятилетий. Это привело к возникновению нового направления в классической иммунологии и эизимологии, повой области биокатализа абзимологии. Антителаэнзимы были названы абзимами как аббревиатура от i и I. Впервые гипотеза, согласно которой антитела, комплементарные структуре переходного состояния химической реакции, должны кагализировать эту реакцию, ускоряя достижение переходного состояния и стабилизируя его, была высказана Б. Джейксом в г , . Он же предвидел возможность получения абзимов как антител к стабильным аналогам переходных состояний. Идеи Дженкса получили экспериментальное подтверждение в целом за последние лет с использованием рассмотренного подхода направленного синтеза абзимов были получены антитела, способные катализировать более 0 различных химических реакций. Открытие природных каталитических антител, явившееся реальным подтверждением теории, произошло лишь в г . Столь значительное отставание практики от теории связано с уровнем развития методов выделения и очистки антител, а именно, с возможностью доказать принадлежность каталитической активности непосредственно антителам, а не какимлибо примесям ферментов. До этого считалось, что основная функция антител заключается только в связывании и элиминировании антигенов, а обнаруженная каталитическая активность i, . Кульбсрг и др. Кульберг и др. Итак, в результате разработки методологии доказательства каталитической активности абзимов . I и I, гидролизующие пептиды . ДНК и РНК v . Vv . СКВ системная красная волчанка . Vv . Vv . Также абзимы с различными каталитическими активностями были найдены в крови и молоке здоровых матерей v . Препараты , выделенные из человеческого молока, обладают протеинкиназной vi . ДНКазной или I Казной активностями v . I и способны гидролизовть v . В то же время антитела из крови здоровых доноров, а также больных гриппом, пневмонией, туберкулезом, тонзиллитом, язвой перстной кишки и некоторыми онкологическими заболеваниями рак матки, молочной железы, кишечника не проявляли каталитических активностей vii . Давно известно, что аутоиммунные заболевания ассоциированы с циркуляцией аутоантител, связь которых с основным патологическим процессом установить удается не всегда. Так, ревматоидный фактор, который часто обнаруживают при ревматоидном артрите, представляет собой специфические антитела к сывороточному гаммаглобулину, но совершенно непонятно, почему они возникают и в чем заключается их действие. Аналогичным образом, при так называемых коллагенозах типа СКВ и дерматомиозита, часто находят циркулирующие антитела против ДНК или комплексов ДНК с гистонами, однако и в этом случае происхождение и функции аутоантител остаются неясными ivi .