Изучение гликопротеидов при старении эритроцитов, продуцированных в условиях нормального и напряженного эритропоэза

• Автор: Романова, Елена Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Красноярск
• Количество страниц: 144 c. : ил

1.1. Современные представления о структуре эритроцитарной мембраны .

1.2. Организация белков в мембране эритроцитов .

1.2.1. Белки цитоскелетного комплекса

1.2.2. Интегральные белки .

1.2.3. Гликопротеиды

1.3. Дифференциацияи старение эритроцитов

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ .

2.1. Фракционирование эритроцитов .

2.2. Получение мембранных препаратов, определение белка

2.3. Бутанольный метод экстракции мембранных белков эритроцитов

2.4. Электрофорез мембранных белков

2.4.1. Приготовление образца
2.4.2. Приготовление геля .
2.4.3. Проведение электрофореза .
2.5. Окраска белков
2.6. Окраска гликопротеидов
2.7. Сканирование гелей
2.8. Определение активности МАТФазы
2.9. Определение активности ИаКАТФазы
2 Определение активности НСОдАТФазы .
2 Метод иммунных эритрограмм
стр.
2 Получение антиэритроцитарной сыворотки крови морских свинок против кроличьих эритроцитов
2 Титрование антиэритроцитарной сыворотки крови морских свинок против кроличьих эритроцитов
2 Титрование комплемента .
2 Обработка данных полученных в результате исследования гемолиза эритроцитов кролика в различных сериях опытов фон, 7, , сутки .
2 Обработка данных полученных в результате исследования активности МАТФазы, аКАТФазы, НСОдАТФазы в различных сериях опытов фон, 7, ,
сутки .
2 Обработка данных полученных в результате исследования белковых фракций
ГЛАВА Ш. ИЗУЧЕНИЕ ГЛИКОПРОТЕИДОВ ПРИ СТАРЕНИИ ЭРИТРОЦИТОВ, ПГОДЩИРОВАННЫХ В УСЛОВИЯХ НОРМАЛЬНОГО ЭРИТРОПОЭЗА
3.1. Гликопрстеидный спектр.
3.2. Исследование иммунной стойкости при старении эритроцитов .
3.3. Характеристика белкового спектра .
3.4. Изучение активности НСОдАТФазы
3.5. Изучение активности МАТФазы.
стр.
3.6. Изучение активности ЫаКАТФазы
ГЛАВА 1У. ИССЛЕДОВАНИЕ ГЛИКОПГОТЕЩЮВ ОБЩЕЙ ЭРЙТГС
ЦИТАРНОЙ МАССЫ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ НАПРЯЖЕННОГО ЭРИТРОПСЭЗА
4.1. Гликопротеидный спектр
4.2. Исследование иммунной стойкости .
4.3. Белковый спектр .
4.4. Активность НСОдАТФазы и МдАТФазы
ГЛАВА У. ИССЛЕДОВАНИЕ ГЛИКОПРОТЕИДОВ ВС ФРАКЦИИ
СТАРЫХ КЛЕТОК В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ НАПРЯЖЕННОГО ЭРИТРОПОЭЗА
5.1. Гликопротеидный спектр
5.2. Исследование иммунной стойкости .
5.3. Белковый спектр .
5.4. Активность НСОдАТФазы и МдАТФазы
ГЛАВА У1. ИССЛЕДОВАНИЕ ГЛИКОПРОТЕИДОВ ВО ФРАКЦИИ
МОЛОДЫХ КЛЕТОК В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ НАПРЯЖЕННОГО ЭРИТРОПОЭЗА
6.1. Гликопротеидный спектр
6.2. Исследование иммунной стойкости .
6.3. Белковый спектр
6.4. Активность НСОдАТФазы и МдАТФазы
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ . Иб
ЛИТЕРАТУРА


Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных работ кафедры биохимии Красноярского университета и является разделом темы, Отражение эволюционных закономерностей эритропоэза в онто и филогенезе, Р 1. Тема входит в Координационный план научноисследовагельских работ АН СССР на г. Физиология человека и животных 2. Программу фундаментальных исследований АН СССР по проблеме Гомеостаз. I. Нарушения гликопротеидных компонентов являются решающими
в ограничении сроков жизни и ускоренной элиминации из кровяного русла эритроцитов, продуцированных в условиях нормального и напряженного эритропоэза, вызванного острой кровопотерей. Молодые эритроциты, продуцированные при напряженном эритропоэзе являются качественно иными по гликопротеидному спектру, антигенным детерминантам, активности ферментов гликопротеидной природы. Степень напряженности эритропоэза определяет структурное и функциональное состояние гликопротеидов в эритроцитах, образованных после кровопотери. Молодые эритроциты, образованные в условиях нормального эритропоэза характеризуются продукционной однородностью антигенных детерминант, старые однородностью изменений исходных ан тигенных детерминант. ГЛАВА I. Согласно современным представлениям мембрана эритроцитов имеет четырехслойную структуру рис. Гликокаликс является внешним экзоплазматическим слоем, образующиеся в результате взаимодействий разветвленных углеводных фрагментов гликопротеидов и гликолипидов ,,7,1. Углеводные цепи гликопротеидов подвижны, поэтому гликокаликс является динамичной конструкцией динамика углеводных фрагментов не зависит от колебаний в физиологических пределах, однако, при подкислении среды резко снижается 1. Существенное влияние на подвижность углеводных фрагментов гликокаликса оказывает рецепция гаптенов, которая снижает подвижность, но не способна устранить ее в полной мере 1. Гликокаликс является слоем повышенной вязкости, это обусловлено гидратацией и увеличением молекулярных размеров за счет отрицательно заряженных остатков сиачовых кислот и их асимметричного расположения . Степень вязкости определяется содержанием концевых остатков фукозы и сиачовых кислот. Гликокаликс обладает значительной экранирующей способностью. Механизм процесса экранирования заключается в электростатических взаимодействиях между заряженными группами углеводов и белков . Углеводные фрагменты гликокаликса играют важную роль в определении эластических свойств мембраны эритроцитов 7,5. Компоненты гликокаликса углеводные фрагменты гликопротеи
Рис. Схема организации белков в мембране эритроцитов. I и 2 спектрин 2. Приводится по Черницкому, Воробью, , с некоторыми дополнениями. Эти функции связаны с феноменом межклеточного узнавания, контактного ингибирования, антигенной предопределенности углеводные Фрагменты экзоплазматической поверхности эритроцитов служат в качестве рецепторов вирусов, участвуют в рецепции ряда токсинов, растительных лектинов. Сиалсодержащие гликопротеиды обеспечивают наличие отрицательного заряда на мембране. Несмотря на значительные успехи, достигнутые при изучении мембранных гликопротеидов, роль гликокаликса исследована недостаточно ,,9,5. Липидный бислой состоит из двух слоев фосфолипидов, стабилизированных холестерином он составляет поверхности эритроцитарной мембраны, поверхности занимают включенные в липидный бислой белки ,. Принимая за основу мозаичную модель, мембранные белки принято подразделять на два типа, основываясь на их отношении к липидному бислою. Белки первого типа периферические, прикрепляются к поверхности мембраны с помощью электростатических сил и могут адсорбироваться из плазмы. Белки второго типа интегральные, им свойственна различная степень погруженности в толщу липидного бислоя. Трансмембранные белки принято рассматривать как частный случай интегральных. Интегральные белки могут быть свободно погружены в липидный бислой или закреплены вкутриструктурными элементами клетки ,,9,5. Двумерная белковая сеть, представленная спектринактиновым комплексом формирует эндоплазматический слой эритроцитарной мембраны. Слектринактиновый слой обладает актомиозинподобными свойствами и является уникальным образованием, присущим только эритроцитарным мембранам 1,7,8,6.