Ключевая роль крингл-домена в хемотактическом действии урокиназы

• Автор: Мухина, Светлана Александровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений, встречающихся в тексте диссергации

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Структура и функции урокиназы

1.1. Структура урокиназы, регуляция ее экспрессии и активности

1.1.1. Регуляция синтеза урокиназы

1.1.2. Структура урокиназы И

1.1.3. Регуляция активности урокиназы

1.2. Мишени связывания урокиназы

1.2.1. Рецептор урокиназы иРАЯС7 и белок, связывающий урокиназу

1.2.2. Рецепторы клиренса урокиназы
1.3. Функции урокиназы
1.3.1. Протеолитические функции урокиназы
1.3.2. Влияние урокиназы на внутриклеточную сигнализацию
2. Молекулярные механизмы действия урокиназы на клетку
2.1. Влияние урокиназы на миграцию клеток
2.2. Механизмы митогенного действия урокиназы
3. Роль урокиназы в морфогенезе тканей
3.1. Роль урокиназы в физиологии и патологии сосудов
3.1.1. Рестеноз
3.1.2. Ангиогенез
3.2. Роль урокиназы в росте и метастазировании раковых опухолей
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.1. Выделение и очистка рекомбинантных форм урокиназы человека
1.2. Определение концентрации белков
1.3. Электрофорез белков и иммуноблоттинг
1.4. Определение каталитической активности рекомбинантных форм урокиназы человека
Иммуноферментный анализ
Восстановление и алкилирование рекомбинантного кринглдомена урокиназы
Культивирование клеток
Приготовление лизатов клеток для определения экспрессии иРАКС7 и ЬИРагШ.
Изучение миграции клеток
Иодирование рекомбинантных форм урокиназы человека
Изучение связывания иодированных рекомбинантных форм
урокиназы человека с клетками
Статистическая обработка результатов
Материалы
РЕЗУЛЬТА ТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Характеристика рекомбинантных форм урокиназы человека
Оценка содержания урокиназы в культивируемых клетках
Хемотактическое действие урокиназы
Роль доменов урокиназы в миграции клеток
Мишени связывания урокиназы на поверхности клеток
Роль рецепторов урокиназы в хемотактическом эффекте урокиназы
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Ключевая роль кринглдомена в миграции клеток, стимулированной урокиназой
Мишени связывания урокиназы
Мишени связывания и функции других белков, содержащих кринглдомены
Предполагаемый механизм хемотактического действия урокиназы ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Широкий набор экспериментальных и клинических данных свидетельствует о том, что вовлечен в основном в процессы фибринолиза, в то время как урокиназа принимает участие в таких физиологических и патологических процессах, как ангиогенез i . i , , ремоделирование сосудов . i . . v . . . . Урокиназа синтезируется и секретируется разными типами клеток в виде одноцепочечного полипептида, обладающего низкой каталитической активностью и состоящего из трех доменов кагалитического, крингл и ростового доменов. После протеолитического расщепления образуется двухцепочечная форма урокиназы, осуществляющая катализ по механизму сериновых протеаз. На поверхности клетки урокиназа через ростовой домен связывается со специфическим рецептором при этом происходит фокусирование протеолитической активности на лидирующем крае мигрирующих клеток i, . . Появившиеся в последнее время данные позволяют предположить, что помимо протеазной активности урокиназа обладает также гормоноподобными свойствами и при взаимодействии с активирует процессы внутриклеточной сигнатизации v . i . . . . iii . , . . . i . v , i . , . Рецептор урокиназы является гликозил фосфат идилинозитол ГФИзаякоренным белком . Таким образом, для передачи сигнала внутрь клетки необходимо взаимодействие с трансмембранным партнером i . . К настоящему времени уже было найдено несколько партнеров , принимающих участие в передаче сигнала от урокиназы внутрь клетки i . . iii . X . . . i . I6. Однако, точный механизм передачи сигнала, партнеры и их взаимодействие с нуждаются в дальнейшем изучении. Имеющиеся в настоящее время данные о роли различных доменов урокиназы протеазного и ростового в миграции и пролиферации клеток также противоречивы. Кроме того, имеются данные о существовании дополнительных механизмов хемотактического и митогенного эффектов урокиназы, не связанных с каталитической активностью урокиназы или ее взаимодействием с i . i . . Поскольку урокиназа представляет собой мультидоменный белок, обладающий способностью связываться с разными мишенями, физиологические ответы различных типов клеток под действием урокиназы могут отражать интегративные эффекты ее доменов. Целью данной работы являлось выяснение механизма хемотактического действия урокиназы, а также характеристика участков связывания урокиназы на поверхности клеток, опосредующих ее действие. Выяснить роль ростового, криигл и каталитического доменов урокиназы в стимуляции миграции клеток. Охарактеризовать участки связывания урокиназы на поверхности клеток. Найти мишень, при взаимодействии с которой урокиназа стимулирует миграцию клеток. Урокиназа синтезируется и секретируется различными типами клеток гладкомышечными слетками . i . . i . Vi . i . Экспрессию урокиназы активируют различные факторы воспаления цитокины . i . i . . i . РМА i . . i . . Экспрессия урокиназы может регулироваться на уровне транскрипции . i . i . . i . . i . РНК i . . . i . Ген урокиназы расположен в десятой хромосоме . ii . Промотор гена урокиназы содержит многочисленные элементы, участвующие в регуляции транскрипции урокиназы Обзоры . . В настоящее время изучены некоторые из этих регуляторных элементов 2 Э1гхансера, расположенные с 5конца на участках и нуклеотидов выше от сайта инициации транскрипции 2 кб и 3. I i . Рис. ЕДШШК1. Реу. АМР.