Гистоны и другие кислоторастворимые белки в онтогенезе тутового шелкопряда

• Автор: Андрианова, Елена Павловна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 154 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ГИСТОНЫ И ДРУГИЕ КИСЛОТОРАСТВОРИМЫЕ БЕЛКИ

НАСЕКОМЫХ . ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Специфичность и гетерогенность гистонов

насекомых.

2. Структура и функция гистонов насекомых

3. Гистоны в эмбриональных клетках насекомых .

4. Гистоны в сперматогенезе насекомых .

5. Другие кислоторастворимые белки насекомых . ГЛАВА П. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

I. Материал.

П. Методы.
1. Выделение ядер и хроматина из грены
2. Выделение суммарного препарата кислоторастворимых белков из ядер и хроматина .
3. Выделение суммарного препарата кислоторастворимых белков из гомогената грены, личинок,куколок,имаго и семенников .
4. Отделение гистонов от кислоторастворимых белков с низкой катодной подвижностью .
5. Получение гистона Н1
6. Электрофоретическое исследование кислоторастворимых белков в полиакриламидном геле
6.1. Фракционирование белков в системе уксусная кислотамочевина
6.1.1.Окрашивание гелевых колонок раствором прочного зелного
6.1.2. Дифференциальное окрашивание белковых
зон раствором кислого алого прочного.
6.1.3.Дифференциальное окрашивание аргининбогатых гистонов .
6.1.4.Идентификация гистоновых
фракций Н и Н2В
6.2. Фракционирование кислоторастворимых белков в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия
7. Диссоциация гистонов из хроматина .
8. Аналитические методы
ГЛАВА Ш. ГИСТОНЫ И ДРУГИЕ КИСЛОТОРАСТВОРИМЫЕ БЕЛКИ
В ЭМБРИОГЕНЕЗЕ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА
1. Выделение и характеристика гистонов и некоторых кислототорастворимых белков грены
2. Динамика фракционного состава гистонов и других кислоторастворимых белков в процессе пред постдиапаузного развития грены
ГЛАВА У.ИЗМЕНЕНИЕ СТЕПЕНИ ФОСФОРИЛИРОВАШЮСТИ ГИСТОНА
Н В ЭМБРИОГЕНЕЗЕ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА
ГЛАВА У. ГИСТОНЫ И ДРУГИЕ КИСЛОТОРАСТВОРИМЫЕ БЕЛКИ В ПРОЦЕССЕ ПОСТЭМБРИОНАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ
ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА
ГЛАВА УI.ИЗМЕНЕНИЕ ФРАКЦИОННОГО СОСТАВА ГИСТОНОВ И ДРУГИХ КИСЛОТОРАСТВОРИМЫХ БЕЛКОВ
В СПЕРМАТОГЕНЕЗЕ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА
ГЛАВА УП.НЕКОТОРЫЕ СВОЙСТВА КОМПЛЕКСА
ГИСТОНЫДНК ХРОМАТИНА ГРЕНЫ . НО
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ.Г
ЛИТЕРАТУРА


Высокоразрешающим методом электрофореза в длинных столбиках полиакриламидного геля у насекомых выявлена гетерогенность основных гистоновых фракций. Гистон Н2А у еловой листовертки содержал две субфракции i, , , три субфракции ГИСТОна Н2А Обнаружено у i iv , , И домашнего сверчка , , . Наличие субфракционного состава было отнесено на счет ацетилирования белков ii , . Гистон НЗ еловой листовертки содержал две субфракции, дрозофилы три субфракщш и домашнего сверчка четыре субфракции. Микрогетерогенность гистона НЗ является результатом вторичной модификации ацетилирования, метилирования, фосфорилирования ii, . У большинства изученных организмов гистон Н2В не модифицирован и представлен одной фракцией в полиакриламидном геле ii, . Однако у сверчка , , обнаружено две субфракции этого гистона, что авторы объясняют ацетилированием остатков лизина в его составе. Личинки еловой листовертки содержали только одну фракцию ГИСТОНОВ Н2В и Н4 i, , . У сверчка , , К плодовой мушки iv, , найдены две субфр акции гистона Н4. Из приведенных выше исследований очевидно, что гетерогенность гисгонов в основном связана с их химической модификацией. Определенное место в изучении гисгонов занимают работы по исследованию этих белков в процессе развития личинки тутового шелкопряда, ВогаЪух i . i,i , i, , i i , ii, . Для выяснения биологической функции гистонов хроматика заднего и среднего отдела шелкоотделигельной железы тутового шелкопряда, предпринято специальное исследование i , i , . Как известно, фиброин синтезируется в заднем отделе шелкоотделительной железы, а серицин в ее среднем отделе. Если бы гистоны в этих функционально резко отличных отделах железы выступали как регуляторы транскрипции, то следовало ожидать, что между ними будут найдены определенные различия. Оказалось, что хотя аминокислотный состав суммарных гистонов из разных отделов железы отличался незначительно но вместе они контрастировали с таковым из тимуса теленка табл. ДНК гистонами в хроматине, изолированном из фиброинового и серицинового отделов шелкоотделительной железы, являлось высоко специфичным. Такая специфическая репрессия, наблюдаемая в системе с хроматином, не была обнаружена в системе с нуклеогистоном, состоящим только из ДНК и гистонов. Авторы заключили, что каждый отдел шелкоотделительной железы включает в себя специфические гистоны возможно модифицированные и они взаимодействуют специфично с разными участками хроматина, а другие участки его остаются активными в качестве матрицы для синтеза РНК. v i, . Позже Шридхара И ДайЛИ i , ii,I7 при изучении хроматина из шелкоотделительных желез личинок тутового шелкопряда 5го и 8го дней У возраста обнаружили, что соотношение гистоновых компонентов на единицу ДНК в хроматине было нормальным 1, и 1,, однако количество гистона I возрастало при переходе железы от фазы роста к фазе секреции. РНКполимеразы. Методом электрофореза в полиакриламидном геле с применением изотопной метки изучены гисгоны в хроматине средней кишки шелкопряда x i . i , , . Хроматин личинок 3го дня У возраста имел соотношение гистоныДИК1,, в то время как в процессе развития это соотношение увеличилось до 1, в хроматине зрелых личинок. Оливер и Чалкли, исследуя фракционный состав гистонов дрозофилы на личиночной стадии и у имаго, обнаружили различия только в минорных фракциях ЭТИХ соединений iv, , . Хольмгрин с сотрудниками . Методом электрофореза в полиакриламидном геле с количественной денситомегрией электрофореграмм они исследовали состав гистонов хроматина, выделенного из личинки Ш возраста и имаго у трех ВИДОВ i ,i i,i viii и показали, что личинки характеризуются более высоким содержанием гистона Н4, а взрослые формы НЗ. Степень модификации гистонов у личинок была выше, чем у взрослых мушек.