Внеклеточные низкомолекулярные гликопротеины из сыворотки крови быка и печени крыс

• Автор: Виноградов, Алексей Александрович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Адгезивные белковые фракции из сыворотки

крови крупного рогатого скота и внеклеточного пространства печени крыс.

1.1.1. Выделение

1.1.2. Биологическая активность

1.1.3. Возможные механизмы биологического

действия в сверхмалых дозах.

1.1.4. Медицинское применение

1.2. Первичная структура гликопротеинов
1.3. Ферментативные методы дегликозилирования
1.4. . Подходы к изучению первичной структуры
пептидной части гликопротеинов.
1.4.1. Химические методы дегликозилирования
1.4.2. Изучение первичной структуры с
использованием генноинженерных
методов.
1.4.3. Секвенирование и идентификация белков с
помощью массспектрометрии.
1.4.4. Идентификация и характеризация белков
по данным аминокислотного анализа.
1.5. Изучение структуры углеводной части
гликопротеинов
1.5.1. Обнаружение гликозилирования белков
1.5.2. Химические методы выделения олигосахаридов из гликопротеинов
1.5.3. Методы исследования структуры олигосахаридов.
И. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
И.1. Материалы
П. 2. Методы
III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
III. 1. Очистка и исследование адгезивных белковых фракций методами ВЭЖХ и ДДС электрофореза.
1.2. Установление наличия гликозилирования и углеводного состава.
1.3. Струюурнофункционалиный анализ по данным аминокислотного состава.
1.4. Исследование с помощью методов кругового дихроизма и дифференциальной сканирующей калориметрии.
1.5. Дегликозилирование и исследование первичной структуры гликопротсина из слабокилой фракции сыворотки крови.
1.6. Исследование сывороточного белка ингибитора гликопротеина из слабокилой фракции сыворотки крови.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Особым свойством является их способность оказывать фармакологическое действие в сверхмалых дозах 4. Для получения фракции адгезивных белков из внеклеточного пространства печени крыс проводили экстракцию в мягких условиях таким образом, чтобы нарушение нормальной структуры ткани было минимальным. Полученный экстракт содержал тканеспецифичную биологически активную белковую фракцию, остающуюся в растворе при 0 насыщении сульфатом аммония при нейтральных 5. Аналогичная фракция выделялась из сыворотки крови при высаливании 0 насыщенным раствором сульфата аммония 1. Супернатанты, полученные таким образом, диализовали и далее разделяли методом препаративного изоэлектрофокусирования Рис. АГП нейтральную р НГП слабокислую р СГП. В указанных областях регистрируется присущая данным фракциям биологическая активность 5. Рисунок 1. Изоэлектрофокусирование фракции сыворотки крови крупного рогатого скота, полученной после высаливания в 0 насыщенном растворе сульфата аммония. Показана фракция, содержащая СГП и области, в которых наблюдается биологическая активность заштриховано 5. Рисунок 2. Изоэлектрофокусирование фракции сыворотки крови крупного рогатого скота, полученной после высаливания в 0 насыщенном растворе сульфата аммония. Биологическая активность. В качестве основного теста на биологическую активность использовали метод, характеризующий вязкоупругие свойства ткани как правило, печени в условиях множественного кратковременного органного культивирования при дезинтеграции стандартным деформационным воздействием Рис. В данном методе для количественной оценки адгезионных взаимодействий клеток вводится показатель, названный коэффициентом разобщенности Кр. Мя количество клеточных ядер, выделившихся в тех же условиях. Рис. Кусочки ткани печени инкубируют 1,52 часа в физиологическом растворе с добавлением исследуемой фракции и без нее контроль затем подвергают стандартному деформационному воздействию, пропуская их через диспергатор с фиксированным зазором между ротором и стенками. После этого подсчитывают количество выделившихся клеток и клеточных ядер и вычисляют параметр Кр. Метод включает в себя следующую последовательность действий. Ткань печени крыс нарезают на небольшие кусочки около 1 мм и инкубируют 1,52 часа в физиологическом растворе с добавлением исследуемой фракции и без нее контроль. Величина этого зазора приблизительно равна размеру гепатоцита. После этого, с помощью камеры Горяева определяют количество выделившихся клеток и клеточных ядер, вычисляют параметр Кр и сравнивают с контролем. Биологическая активность СГП отличалась от АГП и НГП в первую очередь, отсутствием органной специфичности. Было показано, что СГП оказывает влияние на адгезионные свойства клеток печени и клеток альвеолярного эпителия легкого взрослый особей млекопитающих на модели органных культур 7, а также стимулирует рост монослойной культуры фибробластов млекопитающих и способствует увеличению эффективности их колон необразован ия 8. Также, в присутствии СГП было показано увеличение скорости миграции фибробластов в монослойной культуре при стандартном повреждении и влияние на систему перекисного окисления липидов. Напротив, АГП и НГП проявляют тканеспецифичную биологическую активность только на интактной ткани печени при органном культивировании. Было установлено, что биологический эффект СГП, АГП и НГП на ткани печени взрослых особей млекопитающих крыс проявляется только при сохранении тканевой структуры органа. Другими словами, исследованные вещества не оказывали влияния на значения определяемых параметров в условиях монослойной культуры гепатоцитов или клеточной суспензии, т. Из сыворотки крови была выделена фракция, инактивирующая биологическую активность СГП 1. Она получила наименование нСГП. II. Возможные механизмы биологического действия в сверхмалых дозах. Одна из наиболее интересных особенностей исследованных веществ заключается в том, что их биологическая активность может проявляться при чрезвычайно низких концентрациях М и ниже.