Влияние неферментативного дезамидирования на некоторые биохимические и физико-химические свойства препарата лактоглобулина

• Автор: Бибов, Михаил Юрьевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 172 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Бактерицидные факторы белковой и пептидной

природы молока и молозива

2.1.1 Иммунные факторы молока и молозива.

2.1.2 Факторы неспецифической противомикробной резистентности молока и молозива.

2.1.2 Л Лактоферрин

2.1.2.2 Лактопероксидаза.

2.1.2.3 Клеточные и гуморальные факторы, обусловливающие антисептические свойства

молока и молозива.

2.2 Роль амидных групп в структурнофункциональных
свойствах белков.
2.2.1 Механизмы отщепления амидных групп аспарагина
и глутамина в молекулах белков.
2.2.2 Роль процессов дезамидирования в изменении конформационной организации белковых молекул.
2.2.3 Дезамидирование и аспарагинзависимая
автофрагментация белковых молекул
2.2.4 Физиологическое значение процессов
неферментативного дезамидирования и автофрагментации.
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
3.1 Материалы исследования и постановка эксперимента.
3.2 Методы исследования
3.2.1 Определение содержания белка в препаратах лактоглобулина
3.2.2 Изучение специфической и неспецифической
биологической активности препаратов лактоглобулина.
3.2.2.1 Определение активности лакгопероксидазы в
препаратах лактоглобулина
3.2.2.2 Определение антиоксидантной активности
препарата лактоглобулина.
3.2.2.3 Определение титров специфических антител в
препарате лактоглобулина.
3.2.3 Исследование интенсивности дезамидирования и
деструкции препаратов лактоглобулина.
3.2.3.1 Определение содержания фракций амидных групп в
белках препаратов лактоглобулина
3.2.3.2 Определение уровня молекул средней массы в
препаратах лактоглобулина
3.2.3.3 Исследование собственной флуоресценции белков
препарата лактоглобулина.
3.2.3.4 Электрофорез препаратов лактоглобулина.
3.2.4 Статистическая обработка результатов.
4 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
4.1 Изучение специфической и неспсцифической биологической активности препаратов лактоглобулина в процессе хранения.
4.1.1 Исследование лактопероксидазной активности
препаратов лактоглобулина при хранении
4.1.2 Изучение антиоксидантних свойств препаратов лактоглобулина при хранении.
4.1.3 Исследование содержания титров специфических антител против сальмонелл в препаратах лактоглобулина
при хранении
4.2 Изучение характера протекания процессов
неферментативного дезамидирования, деструкции и конформационных преобразований в белках
препарата лактоглобулина при его хранении
4.2.1 Исследование неферментативного дезамидирования белков препарата лактоглобулина при его хранении
4.2.2 Исследование процессов деструкции и изменения электрофоретической гетерогенности белков препарата лактоглобулина при его хранении.
4.2.3 Исследование собственной флуоресценции препаратов лактоглобулина на различных этапах
их хранения.
4.3 Исследование специфической и неспецифической активности препаратов лактоглобулина на различных
этапах их хранения в присутствии углеводов и полиолов.
4.3.1 Исследование активности лакгопероксидазы в
препарате лактоглобулина на различных этапах его хранения в присутствии глюкозы, фруктозы и сорбитола.
4.3.2 Исследование антиоксидантной активности препаратов лактоглобулина на различных этапах их
хранения в присутствии глюкозы, фруктозы и сорбитола
4.3.3 Исследование специфической активности препаратов лактоглобулина на различных этапах их хранения в присутствии глюкозы, фруктозы и сорбитола
4.4 Изучение характера протекания процессов
неферментативного дезамидирования, деструкции и конформационных преобразований в белках препарата лактоглобулина при его хранении в присутствии
углеводов
4.4.1 Динамика дезамидирования, конформационных перестроек и деструкции белков препарата лактоглобулина
при хранении в присутствии глюкозы
4.4.2 Динамика дезамидирования, конформационных перестроек и деструкции белков препарата лактоглобулина
при хранении в присутствии фруктозы.
4.4.3 Динамика дезамидирования, конформационных
перестроек и деструкции белков препарата лактоглобулииа
при хранении в присутствии сорбитола
5 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
6 ВЫВОДЫ.
7 ЛИТЕРАТУРА.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1. иммуноглобулины
2. Бт светосумма
3. АФК активные формы кислорода
4. ЖКТ желудочнокишечный тракт
5. ИР индекс распределения
6. КМП казеиномакропептид
7. ЛАГ легкогидролизуемые амидные группы
8. ЛП липопротеины
9. ЛПО лактопероксидаза
.МСМ молекулы средней массы
.ИАФМ неспецифические антимикробные факторы молока .0КЗ острые кишечные заболевания
.ПААГ полакриламидный гель
.ПТМ посттрансляционные модификации
.РИГА реакция непрямой гемагглютинации
.САГ суммарные амидные группы
.ТАГ трудногидролизуемые амидные группы
.ТХУ трихлоруксусная кислота
.ХЛ хемилюминесценция .ЭФР эпителиальные факторы роста
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Неспецифические защитные компоненты молока представлены фагоцитирующими и некоторыми киллерными клетками, ферментными системами ксантиноксидаза, лактопероксид аза, лизоцим, РНКазы, ДНКазы, другими белками неферментной природы лактоферрин, интерферон, пропердин, фибронектин, ряд компонентов системы комплемента, белки связывающие витамин В СВР i ii i, и фолаты и факторами небелковой природы липиды, углеводы Отт В. Д. и соавт. Адигамов Л. Ф., , Е. М., . Существуют немногочисленные и противоречивые сведения о присутствии ферментов супероксиддисмугазы и каталазы в коровьем молоке i , . Их наличие может объясняться бактериальными загрязнениями, так как определение активности каталазы используют в качестве теста при определении количественного и качественного состава микрофлоры в молоке и для контроля молока, полученного от больных маститом животных Горбатова К. К., Алексеева Н. Ю. и соавт. Наиболее высокий уровень защитных факторов отмечается в молозивный период лактации. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке молозива коров достигает от общего белка, тогда как в сыворотке зрелого молока оно достигает лишь 1,9 3,3 Горбатова К. К., . Пик активности и количества лактопероксидазы приходится на 5й день лактации коров Денисова И. И., . Отт В. Д. и соавт. Вельтищев Ю. Е. и соавт. В. . Отт В. Д. и соавт. Адигамов Л. Ф., . В изучении защитных свойств молока основное внимание исследователей привлекают специфические, иммунные факторы, главным образом иммуноглобулины Отт В. Д. и соавт. Они обеспечивают передачу пассивного иммунитета от матери к плоду, защиту от патогенной микрофлоры, участвуют в предотвращении сенсибилизации организма новорожденного пищевыми агентами. Как показали исследования новорожденных животных, I молока могут проникать в кровоток , . Кроме того, младенец еще до рождения частично снабжается антителами матери, благодаря селективному межплацентарному переносу последних в кровь плода , i С. В. а. Некоторые данные свидетельствуют, что антитела матери необходимы не только для эффективной защиты организма ребенка, но и для формирования его собственной иммунной системы . В секрете молочной железы человека обнаружены антитела всех известных классов. Однако распределение иммуноглобулинов по классам существенно отличается от спектра антител крови Канышкова Т. Г. и соавт. Основную часть антител молока более составляют I, представленные у человека, в основном, в виде их секреторной формы I. I продуцируются Влимфоцитами локальной иммунной системы молочной железы, поступающими из специализированных образований в двенадцатиперстной кишке Пейровых бляшек . В ходе созревания Вклетки покидают i i кишечника и мигрируют к местам локальной секреции. Происхождение секреторного компонента обусловлено комплексным механизмом межэпителиального транспорта антител в секреты , , цит. Канышкова Т. Г. и соавт. Пол У. Известно, что I человека представлены двумя подклассами I и I2. Определенные различия в первичной структуре района талии приводят к высокой устойчивости I2 к действию протеаз. Каньгшкова Т. Г. и соавт. Концентрация остальных классов иммуноглобулинов в молозиве и в зрелом молоке существенно ниже. Происхождение I и I полностью до сих пор не выяснено. Есть данные, говорящие о том, что суммарный пул I формируется за счет транспорта из кровотока и в резульii локальной секреции собственными Вклстками молочной железы Грачев И. И. и соавт. Еще меньше известно об источнике I. Интересно отметить, что концентрация I и I практически не зависит от срока лактации Канышкова Т. Г. и соавт. Существуют данные о том, что антитела разных классов обладают различными функциями в молоке и других секретах человека. Так, I отводится основная роль в иммунорегуляторных процессах , . Функция I не совсем ясна, однако, показано, что в случае ряда патологий, вызванных дифицитом I, I могут восполнять недостаточность Iответа и осуществлять некоторые специфические для I функции. Будучи основным классом иммуноглобулинов секретов человека, I обладает широким спектром свойств. Известно несколько механизмов действия I по защите организма от инфекций М. В. . Канышкова Т. Г. и соавт. Так, молекулы I могут непосредственно участвовать в нейтрализации токсинов, ряда ферментов, и целых вирионов М. В. .