Биохимический и иммунохимический анализ пространственной организации актинового цитоскелета клеток высших растений

• Автор: Соколова, Марина Константиновна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 131 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение.

1. Обзор литературы.

1.1 Понятие цитоскелета и цитоматрикса клетки.

1.2 Организация и элементы цитоматрикса растительной клетки.

1.2.1 Морфогенез и синтез клеточной стенки растений.

1.2.2 Внутриклеточные движения в растениях

1.3 Локализация и роль актина в клетках растений

1.3.1 Организация актинового цитоскелета растений.

1.3.2 Участие актина в передаче сигналов и сигнальных каскадах

1.4 Участие акгинового цитоскелета в пространственной организации хлоронластов

1.5 Современные методы идентификации и визуализации актинового цитоскелета
2. Экспериментальная часть
2.1 Объекты исследования, приборы и реактивы
2.2 Получение тяжелого меромиозипа и определение его ферментативной активности
2.3 Выделение протопластов из растительных тканей.
2.4 Подготовка растительных тканей к микроскопии.
2.5 Другие использованные методы
3. Результаты и их обсуждение.
3.1 Разработка и получение функционального маркра к Бактину на основе тяжелого меромиозипа.
3.2 Электронномикроскопическое изучение взаимодействия маркра тяжелый меромиозинколлоиднос золото с Рактином
3.3 Получение аптиактиновых антител с помощью технологии фагового дисплея миниантител.
3.4 Создание тестсистем к различным формам актина на основе золотых маркров.
3.5 Исследование топографии цитоскслета растительных клеток с помощью сканирующей электронной микроскопии.
3.6 Изучение топографии и объмной организации хлоропластов в протопластах
3.7 Усиление чувствительности маркра фаллоидинколлоидное золото ионами серебра.
3.8 Применение маркра фаллоидинколлоидное золото в световой микроскопии.
3.9 Иммунохимичсский анализ белков актинового цитоскелега растений с использованием фаговых миниантитсл
3. Сравнительный анализ актинсодержащих структур в клетках растений
Заключение.
Выводы.
Список использованной литературы


Сыктывкар, Россия, апрель , Конференции Цитоскелет и клеточная регуляция, Пущино, Россия, май , I. . ii , , i, 57, I. . ii ii i , i, i, . Международной конференции Анатомия и морфология растений, СанктПетербург, Россия, VIII I. . i i vi i, v, i, . V съезде общества физиологов растений России и Международной конференции Физиология растений основа фитобиотехнологии, Пенза, Россия, сентябрь , Всероссийской конференции Молекулярные механизмы взаимодействия микроорганизмов и растений фундаментальные и прикладные аспекты, Саратов, Россия, июнь , I. . i iii i i, , i, , VI съезде общества физиологов растений России и Международной конференции Современная физиология растений от молекул до экосистем, Сыктывкар, Россия, июнь , . Публикации. По теме диссертации опубликовано работ, в том числе 2 статьи в рецензируемых журналах из списка ВАК. Замечательное достижение последних десятилетий открытие и исследование системы структур, ответственных за динамичную архитектуру клетки, за со движения и форму. Эта система в клетках называется цитоскелстом. Первые предположения о наличии внутри некоторых клеток, лишенных экстраклеточной оболочки, так называемых скелетных белков были высказаны Н. К. Кольцовым ещ в году до открытия актомиозина 2. Развитие взглядов на архитектуру отдельной клетки можно разделить на три этапа. Сначала считали, что клетка это мешок, где мембрана окружает жидкий цитозоль, в котором плавают отдельные органеллы. На втором этапе было обнаружено несколько сетей фибрилл цитоскелета, проходящих через всю клетку от мембраны до ядра и направляющих движения оргаиелл. В последние годы сложилось представление, что речь идет не о статическом каркасе, а о динамичной, быстро реагирующей на воздействия и перестраивающейся сложной сети белковых фибрилл с целым комплексом ассоциированных белков . Накопленные данные о наличии сложного и динамичного каркаса белков, состоящего из актиновых филаментов, тубулиновых микрогрубочек и промежуточных филаментов, привели к становлению теперь уже сложившегося понятия цитоскелста любой клетки, в том числе и растений 1, . Клетка оказалась сложным комплексом сбалансированных сил. При соответствующих способах экстракции клетки неионными детергентами получающийся препарат цитоскелетного каркаса содержит все перечисленные структуры. Отт отличается весьма сложным строением, в нем сохранены многие элементы, связывающие цитоскслет с ядерным матриксом и клеточной мембраной. Еще больше структур, отвечающих за пространственную организацию, включает в себя гак называемый цитоплазматический матрикс, который виден только после фиксации клеток рис. Рис. Цитоскелет зафиксированной эндотелиальной клетки из бычьей лгочной артерии. Окраска моноклональные мышиные антитела к тубулину x 7 розовый эндог енный биотин митохондрий стрептавидин x 8 зелный ДЬ1К I синий, . В его состав входят и такие белки, связь которых с цитоскслстом относительно динамична и может быть кратковременной 1. Цитоплазматический матрикс содержит множество мелких гетерогенных структур, соединяющих элементы цитоскелета друг с другом и с различными органеллами. Белки цитоскелета соединяются друг с другом специфичным для каждого типа клеток образом и формируют сложные, динамические, взаимодействующие между собой структуры. Эти структу ры и отвечают за согласованное поведение частей клетки. Белки, входящие в состав трх основных систем цитоскелетных филамситов. Эти белки имеют общие свойства, отражающие функциональные возможности и характер взаимодействия рассматриваемых комплексов. Цитоскелет состоит из актиновых филаментов. Каждый полимер формируется из различных белковых единиц. Микротрубочки прочные пустотелые стержни, способные противостоять как сжатию, так и растяжению.