Биохимические характеристики фракций тимоцитов крысы, различающихся по плавучей плотности

• Автор: Рещиков, Андрей Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Ленинград
• Количество страниц: 142 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение .

Глава I. Обзор литературы

1.Характеристика клеточного состава тимуса млекопитающих

.Структура и функции тимуса

Б.Дифференцировка и созревание клеток тимуоа

.Препаративные методы разделения клеток тимуса и биологические характеристики фракций

Г.Влияние радиации и глюкокортикоидных гормонов на лимфоциты тимуса .

2.Краткие сведения о структурнофункциональной организации генома высших организмов .

Глава П. Материалы и методы

I.Объекты исследования

2.Облучение животных и культуры клеток
3.Выделение и фракционирование тимоцитов .
4.Определение количества тимоцитов находящихся в стадии метафазы .
5.Оценка адгезивной способности тимоцитов .
6.Анализ суперспиральной структуры ядерной ДНК тимоцитов методом вискозиметрии .
7.Включение тимидина и уридина в фракционированные тимоциты
8.Выделение ядер .
9.Выделение РНК.
а.Получение суммарной РНК .
б. Экстракция РНК из ядер .
в.Выделение цитоплазматической РНК
.Очистка препаратов РНК от примесей ДНК
а.Обработка РНК ДНКазой I
б.Высаливание высокомолекулярной РНК.
Стр.
II.Выделение полиАсодержащей РНК
а.Синтез полиУсефарозы .
б.Хроматография РНК на полиУоефарозе .
.Определение концентрации РНК
.Аналитическое фракционирование РНК
а.Электрофорез высокомолекулярных РНК .
б.Регистрация результатов электрофореза РНК .
в.Определение молекулярной массы РНК
.Выделение ДНК
.Фрагментация ДНК
.Синтез гранулированного оксиаппатита
.Выделение уникальной ДНК
.Иодирование ДНК
. Реассоциация уникальной ДНК.
. Гибридизация 1унДНК с избытком РНК.
.Получение мДНК и нДНК .
.Изучение кинетики реассоциации и гибридизации методом хроматографии на колонке с ГАН .
. Определение концентрации белка
.Определение концентрации ДНК
.Статистические методы .
.Реактивы, иопользуемые в работе .
Глава Ш. Результаты
I.Фракционирование тимоцитов в градиенте фиколлпака и их характеристика
а.Связь плавучей плотности клеток с их биологическими параметрами
Стр.
б. Исследование влияния гидрокортизона и радиации на фракции тимоцитов .
2.Влияние рентгеновского облучения на биосинтез и созревание РНК в субпопуляциях тимоцитов
3.Изучение генетической сложности ядерной и полиаденилированной цитоплазматической РНК фракций тимоцитов
Глава . Обсуждение результатов .
В ы в о д ы
Форма внедрения
Литература


Установлено также, что такое характерное для лимфоцитов пострадиационное нарушение процессинга рРНК, как усиление утечки Б рРНК наиболее выражено в нижней фракции, что коррелирует с е повышенной радиочувствительностью. Полученные результаты вносят существенный вклад в понимание особенностей экспрессии генетической информации в тимоцитах, находящихся на разных стадиях диффаранцировки. Они способствуют также пониманию взаимосвязи процессов дифференцировки клеток с их радиочувствительностью. Практическое значение. Разработан упрощенный, эффективный метод изоплотностного центрифугирования тимоцитов в градиенте фиколлпака, позволяющий разделить лимфоидную популяцию клеток тимуса на фракции, различающиеся по степени зрелости. Результаты молекулярнобиологических, цитологических и радиобиологических исследований этих фракций могут иметь практическое значение для обоснования путей поиска средств защиты критических органов, богатых лимфоидными клетками. АРНК нижней радиочувствительной фракции на 5 выше, чем у РНК верхней и средней фракции. Как известно, важнейшую роль в выполнении иммунной функции организма млекопитающих играет лимфоидная система, состоящая из лимфоидных клеток различных типов, распределенных между периферическими и центральными лимфоидными органами Николаева Н. В. и др. К периферическим лимфоидным образованиям обычно относят лимфатические узлы, селезенку белая пульпа и лимфоидную систему кишечника. К числу центральных лимфоидных органов в первую очередь ОТНОСИТСЯ КОСТНЫЙ МОЗГ ИСТОЧНИК П0ЛИП0Т6НТНЫХ стволовых клеток для всех ростков кроветворения, включая и лимфопоэз. У млекопитающих костный мозг также является местом образования Влимфоцитов Вклеток. Другим центральным лимфоидным органом является тимус. У большинства млекопитающих он расположен в грудной полости, за грудиной, и состоит из широкого коркового слоя и мозгового вещества, занимающего центральную часть органа. Ткань тимуса образована, в основном, клетками двух типов, лимфоидными и ретикулярными. К лимфоидным клеткам относятся клетки с плотным круглым ядром и узкой каймой цитоплазмы Миллер Д. Дукор П. Так, около трах процентов кортикальных тимоцитов обладает повышенными размерами и высокой пролиферативной активностью. Эти клетки расположены в субкапсулярной зоне кортикального слоя и рассматриваются как предшественники тимоцитов Брондз Б. Д.Рохлин О. В.,. Большая часть кортикальных клеток более 8С имеет небольшие размеры и расположена по всему периметру коркового слоя. Они, в свою очередь, подразделяются на ряд субпопуляций, соответствующих определенным стадиям зрелости тимоцитов рис. Лимфоциты медуллярной зоны тимуса около всех тимоцитов состоят в основном из клеток средних и больших размеров. По мнению ряда авторов i. Брондз Б. Рохлин О. В.,, эти клетки являются конечными формами дифференцирующихся тимоцитов. Здесь же, в медуллярной зоне, особенно отчетливо видны ретикулярные элементы тимуса. Обычно это крупные клетки со слабоокрашивающейся цитоплазмой и овальным рыхлым ядром Миллер Д. Дукор П. Большинство ретикулярных элементов, имеющих эпителиальное происхождение, образуют рыхлую сеть строму тимуса, в петлях которой находятся лимфоциты. Другие ретикулярные клетки оказываются типичными макрофагами мезенхимального происхождения Миллер Д. Дукор П. Николаева Н. В. и др. Для мозгового вещества взрослых животных характерны так называемые тельца Гасоаля концентрические скопления уплощенных и веретеновидных эпителиальных клеток. У ряда млекопитающих мыши, крысы в корковом веществе тимуса в течение первых недель жизни обнаруживают четко очерченную субкапсулярную краевую зону, содержащую крупные незрелые лимфобластоподобные клетки с высокой митотической активностью. В более позднем возрасте эта зона уже. РАЗМЕРЫ МЕ гок КОРТИКАЛЬНЫЕ ТИМОциты . Крупные лимфоциты МАЛЫЕ ЛИМФОЦИТЫ 1 Тип1 ИЛЕНЬКИЕ РАННИЕ КОР ТИКАЛЬНЫЕ КЛЕТКУ Тип 2 ПОЗДНИЕ КОРТИКАЛЬ НЫЕ МАЛЫЕ КЛЕТКИ Тип 3 ГРОКОРТИЗОН ЖТОЙЧИВЫЕ КЛЕТКИ ПРЕДШЕСТВЕННИКИ ЗРЕЛЫХ ТЛИМФОЦИтив. Рис. I.Схема расположения различных групп фракционированных тимоцитов в тимусе Бхче е а