Белки плазмы крови как регуляторы гемолитического процесса

• Автор: Тарасова, Юлия Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 123 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Строение эритроцитарной мембраны

2.1.1. Белковый состав эритроцитарной мембраны

2.1.2. Липидный состав эритроцитарной мембраны

2.1.3. Роль холестерина в мембране эритроцита

2.1.4. Возможные изменения липидного состава эритроцитарной мембраны

2.1.5. Способы взаимодействия компонентов эритроцитарной мембраны

2.2. Виды гемолитического процесса

2.3. Механизмы неокислительного гемолиза

2.3.1. Механический лизис эритроцитов

2.3.2. Термогемолиз эритроцитов
2.3.3. Кислотный гемолиз эритроцитов
2.3.4. Детергентный лизис эритроцитов
2.3.5. Комплементзависимый гемолиз
2.4. Характеристика белков плазмы крови, исследованных в качестве
регуляторов гемолитического процесса
2.4.1. Строение и свойства сывороточного альбумина
2.4.2. Строение и свойства СЗ компонента системы комплемента
2.4.3. Строение и свойства фибриногена
2.4.4. Строение и свойства альфа2макроглобулина
2.4.5. Строение и свойства липопротеинов плазмы крови
2.5. Агрегация эритроцитов
СОБСТВЕННЫЕ ДАННЫЕ
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Аппаратура и реактивы
3.2. Получение СЗ компонента комплемента
3.2.1. Этапы выделения и очистки компонента СЗ.
3.2.2. Получение ЯСЗ
3.2.3. Методы регистрации гемолитической активности компонента СЗ
3.2.4. Микрометод регистрации гемолитической активности компонента С
3.3. Кинетические методы регистрации гемолиза
3.3.1. Метод кислотных эритрограмм
3.3.2. Регистрация сапонинового гемолиза
3.3.3. Определение гемолитической активности комплемента по альтернативному и классическому путям
3.4. Трипсинизация эритроцитов
3.5. Метод извлечения холестерина из мембраны эритроцитов
3.6. Методы статистической обработки
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Влияние белков плазмы крови на процесс сапонинопосредованного гемолиза
4.1.1. Особенности динамики лизиса эритроцитов под действием сапонина
4.1.2. Липопротеины плазмы крови как модуляторы сапонинового лизиса эритроцитов
4.1.3. Влияние других белков плазмы крови на сапонинопосредованный гемолиз7
4.1.4. Сапониновый гемолиз и система комплемента
4.2. Влияние белков плазмы крови на протонопосредованный гемолиз
эритроцитов
4.2.1. Общая характеристика кислотного гемолиза
4.2.2. Воздействие сывороточного альбумина на кислотный гемолиз
4.2.3. Влияние липопротеинов плазмы крови на кислотный гемолиз и на эффект его потенцирования альбумином
4.2.4. СЗ компонент комплемента и протонопосредованный гемолиз
4.2.5. Влияние фибриногена и аг макроглобулина на кислотный гемолиз
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В ДИССЕРТАЦИИ ЫаЛБ додецилсульфат натрия УВБ вероналомединаловый буфер, 7,4 АПК альтернативный путь комплемента БСА бычий сывороточный альбумин ЖК жирные кислоты ИОХ ионообменная хроматография КПК классический путь комплемента ЛВП липопротеины высокой плотности ЛНП липопротеины низкой плотности ЛОНП липопротеины очень низкой плотности ЛП липопротеины
ЛПП липопротеины промежуточной плотности
МАК мембраноатакующий комплекс
МГ макроглобулин
ММА монометиламин
СЗЛ сапонинзависимый лизис
ТГ триглицериды
ХС холестерин
ЧСА человеческий сывороточный альбумин ЭБ эритроциты барана
ЭГТА этиленгликоль р,Раминоэтиловый эфир Ы,Ы,Ы,Ы тетрауксусной кислоты тетранатриевая соль ЭК эритроциты кролика ЭХС эфиры холестерина ЭЧ эритроциты человека
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


При этом оказалось, что освобожденные жирные кислоты проявляли, свое потенцирующее в отношении кислотного лизиса действие в сублитических концентрациях. Компонент СЗ комплемента значительно ускорял кислотный гемолиз, но при этом отличался видоспецифичностью, то есть увеличивал скорость лизиса только человеческих эритроцитов. Нами было показано, что эффект СЗ частично обусловлен наличием на эритроцитах человека специфических рецепторов 1. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ Главной целью было исследование влияния белковых компонентов плазмы крови на процесс лизиса эритроцитов, индуцированного гемолитическими агентами различного типа действия. Исследование взаимосвязей между составом эритроцитарной мембраны на примере эритроцитов разных видов и эритроцитов различных групп больных и степенью чувствительности эритроцита к гемолитическим факторам. Исследование влияния белков плазмы крови альбумина, фибриногена, СЗ компонента комплемента, Х2макроглобулина, липопротеинов различной плотности на параметры детергентного лизиса эритроцита. Исследование влияния альбумина, фибриногена, СЗ компонента комплемента, а2макроглобулина, липопротеинов различной плотности на параметры протонопосредованного гемолиза. Выявление общих механизмов в процессах детергентного и комплементзависимого гемолиза. НАУЧНОПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ. Результаты исследования позволят проанализировать взаимоотношения в системе мембранные белки эритроцита эритроцитарные мембранные липиды белки сыворотки крови. Выявление особенностей действия ряда белковых эффекторов в условиях различных механизмов неокислительного гемолиза, позволит получить дополнительную информацию о связях, стабилизирующих мембранную структуру эритроцита и оценить вклад компонентов мембраны в обеспечение устойчивости эритроцита к литическим агентам. Кроме того, устойчивость эритроцита по отношению к различным повреждающим воздействиям определяет совокупность физикохимических свойств эритроцита. Поэтому показатель стойкости может быть использован в качестве характеристики его состояния. Практическое значение может получить выявленная нами более высокая чувствительность эритроцитов больных ишемической болезнью сердца и эссенциальной гипертензией к сапонину как литическому агенту. Полученные данные о влиянии белковых компонентов плазмы крови на стабильность эритроцита позволят оценить вклад дефицита или избытка этих белков в обеспечение гемолитического процесса, а также сделать практические рекомендации по защите клетки в критических условиях. Липопротеины плазмы крови, агмакроглобулин и фибриноген оказывают защитное действие в отношении детергентного и кислотного лизиса эритроцитов человека, кролика и барана. Окисление липопротеинов низкой плотности лишает их защитных свойств. Сывороточный альбумин ускоряет кислотный лизис эритроцитов человека, кролика и барана, путем переноса содержащихся в комплексе с ним жирных кислот на клеточную мембрану. Компонент комплемента СЗ ускоряет кислотный лизис эритроцитов человека, но не кролика или барана. Действие СЗ обусловлено особенностями состава мембраны человеческого эритроцита. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации доложены на конференции молодых физиологов и биохимиков России Биохимические и биофизические механизмы физиологической регуляции СанктПетербург, , на конференции молодых ученых и студентов СПбГМУ, посвященной 0летию Университета СанктПетербург, , на III научной конференции Дни иммунологии в СанктПетербурге СанктПетербург, , на 7 i i i i i, . ВНЕДРЕНИЕ. Разработанные методы внедрены и используются в практике научных исследований и в учебном процессе на кафедре биохимии СанктПетербургского Государственного медицинского Университета имени акад. И.П. М3 РФ, НИИ особо чистых биопрепаратов СанктПетербург. СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 3 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, общего заключения и выводов включает таблиц, рисунков и список литературы, содержащий 5 источников, в том числе 9 зарубежных.