Аланин- и аспартатаминотрансферазы как индикаторы физиологического состояния рыб

• Автор: Самсонова, Мария Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 166 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ

Глава I. Аланинам и нотрансфераза и аснартатаминотра нефе раза маркерные ферменты физиологического статуса рыб.обзор литературы

1.1. Физикохимическая характеристика амнногрансфсраз

животных

1.2. Использование активности аланин и аспартат

аминотрансфераз в качестве фактора, контролирующего рост, развитие рыб и состояние их популяции.

1.2.1. Активность Ал АТ и АсАТ в онтогенезе рыб

1.2.2. Участие АлАТ и АсАТ в процессах адаптации рыб к

условиям окружающей среды.

1.2.3. Ферменты переаминирования в условиях загрязнения

окружающей среды

1.2.4. Значение показателей активности АлАТ и АсАТ в
диагностике болезней и патологических явлений у рыб
1.2.5. Роль АлАТ и АсАТ в метаболической адаптации рыб к типу
диеты.
1.2.6. Использование АлАТ и АсАТ в качестве генетических
маркеров при анализе популяций
1.3. Влияние опиоидпых пептидов и их синтетических
аналогов на физиологические и биохимические процессы у рыб
1.3.1. Эндогенные регуляторные пептиды рыб.
1.3.2. Опиоидныс пептиды рыб и их физиологическое действие
Глава II. Материалы и методы
.1. Биологическая характеристика материала
.2. Определение общего биохимического состава.
И.4.
.6.
.8.
Глава III.
1.2.
Глава IV
IV.2.
IV.4.
IV.6.
Получение ферментных экстрактов
Выделение субклеточных фракций из эмбрионов и мальков
радужной форели
Определение суммарной аминотрансферазной активности в
гомогенатах и субклеточных фракциях рыб
Электрофоретическое фракционирование растворимых
белков кеты в онтогенезе.
Препаративное изоэлсктрофокусироваиие АлАТ и АсАТ печени кеты и цАсАТ и мАсАТ зародышей форели в слое
ультродекса фирмы ..
Статистическая обработка данных
Биохимические показатели кеты
в раннем онтогенезе
Химический состав икры, личинок и мальков кеты.
Динамика фракционного состава растворимых белков в
раннем онтогенезе кеты.
Физикохимическая характеристика АлАТ и АсАТ
Зависимость активности АлАТ и АсАТ от среды
Зависимость активности аминотрансфераз от концентрации
субстратов.
Зависимость активности аминотрансфераз от концентрации
вносимого белка
Зависимость активности аминотрансфераз от времени
инкубации
Субклеточная локализация аминотрансфераз в зародышах и
мальках радужной форели
Препаративное изоэлектрофокусирование АсАТ
постлизосомальной и митохондриальной фракций
зародышей радужной форели в слое
ультродекса
Глава V. Активность АлАТ и АсАТ у кеты .
V.. Активность АлАТ и АсАТ в раннем онтогенезе кеты
V.2. Активность АлАТ и АсАТ в тканях и органах кеты в период
морского нагула
Глава VI. Изменение активности аминотрансфераз в связи с
патологическими явлениями в органах и тканях кеты.
Глава VII Влияние даларгина на активность аминотрансфераз в
раннем онтогенезе радужной форели.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Из большого числа около аминотрансфераз наибольший интерес представляют аланинаминотрансфераза АлАТ К. Ф. 2. АсАТ К. Ф.2. Поэтому АлАТ и АсАТ являются одними из наиболее хорошо изученных ферментов, глубина исследований которых находится на уровне первичной структуры ферментов, в отдельных случаях изучен аминокислотный состав, получены кристаллы чистого фермента, сделан рентгеноструктурный анализ. Открытые в году отечественными учеными А. Е.Браунштейном и М. КФ 2. КФ 2. Установлены молекулярные масс ы исследуемых ферментов в тканях представителей различных таксономических групп табл. В целом они близки по значениям молекулярных масс, состоят из двух идентичных субъединиц гомодимеры, каждая из которых соединена с молекулой пиридоксальфосфата в качестве простел и ческой группы. Найдена высокогомологичная последовательность из аминокислотных остатков вокруг пиридоксаль5 фосфата АлАТ печени крысы и сердца свиньи Ii , . При разбавлении растворов димеры АсАТ распадаются на каталитически активные мономеры. Исключение составляют некоторые формы АсАТ i i и i. . АсАТ из i ii 4 представлена мономером кД, аминокислотный состав которого характеризуется высоким содержанием глицина, глутамина, валина, изолейцина и низким метионина и тирозина по сравнению с АсАТ iii i и млекопитающих . Расшифрована аминокислотная последовательность АсАТ экстремально термофильной бактерии i 8, которая гомологична АсАТ iii i и i на , и соответственно, что повидимому, связано с одинаковой термостабилыюстыо фермента , . Таблица 1. Молекулярные массы и изоэлектрические точки р Дрожжевой рибок Ал АТ 5,3 . Корень ячменя АлАТ . . Листья сои Ас АТ . Отруби риса гАсАТ 6,5 Vi, ii . Печень крысы Печень человека АлАТ 0 . Почки быка лАс АТ 9. , . Ас АТ 0 6. Сердце свиньи цАсАТ 0 5,0 . АсАТ 0 6. Сердце кур i 0 . . Термофильные бактерии АсАТ 0 . Что касается структуры изоферментов, то субъединица цитозольного изофермента АсАТ гАсАТ из сердца свиньи представлена полииептидной цепью из 2 аминокислотных остатков с молекулярной массой субединицы 4 Да Овчинников и др. АсАТ мАсАТ того же объекта имеет 1 аминокислотный остаток с одной субединицы 1 Да i . АпАТ из печени крысы состоит из 5 амнокислотных остатков с субъединицы равной 8Да Ii , , а , из листьев сои включает 7 аминокислотных остатков и характеризуется 0Да . По литературным данным изоэлектрические точки i данных аминотрансфераз близки но значениям и лежат в слабо кислой области от 5,0 до 6,8 только i лАсАТ из почек быка имеет значение 9,8. По своей активности АсАТ в большинстве тканей животных и растений превосходит активность Ал АТ, хотя есть и исключения. Например, активность АлАТ печени карпа и турбеллярий превышает соответствующую активность АсАТ табл. Исследование субстратной специфичности АсАТ показало, что при использовании якетоглутарата в качестве акцептора аминогруппы фермент участвует в переаминировании следующих субстратов глутамата, аспартата, яаминоадипината, яаминопимелината, фенилаланина и аланина Осадчая, i , , а митохондриальная АсАТ . АсАТ взаимно действует также с 1тирозином, фенилаланином и ,триптофаном Тютюн иков, . АсАТ из iii i обладает высокой специфичностью как к кислым, так и к гидрофобным субстратам и, повидимому, имеет два субстратсвязывающих центра i . Таблица 1. Корни кукурузы 5, 1, мкмол ь ам и но кислотым г белка час Ширшова и др. Летательные мышцы шмеля 8 мкмоль аминокислотымин на г ткани СТаЫгее е1 а1. Печень коров ,0 2. Печень крыс 5. Сыворотка крови телят 8, , Условние едг сырой ткани Розгони и др. Сыворотка крови карася . Турбеллярия .