Активность Ca2+ /Mg2+-зависимых эндонуклеаз в эндометрии

• Автор: Колобова, Елена Александровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 95 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ З

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Концепция алоггоза, морфологическая характеристика программированной клеточной гибели

1.2. Этапы реализации апоптоза

1.2.1. Фаза индукции апоптоза

1.2.2. Эффскторная фаза апоптоза

1.2.3. Фаза деградации клетки при апоптозс

1.2.3.1. Структурные изменения хроматина и фрагментация ДНК при апоптозе

1.2.3.2. Изменения клеточной мембраны и фагоцитоз

1.3. Эндогенные регуляторы апоптоза
1.3.1. Эндогенные ингибиторы апоптоза
1.3.2. Эндогенные активаторы апоптоза
1.3.3. Взаимодействие активаторов и ингибиторов апоптоза
1.4. Роль апоптоза в многоклеточном организме
1.4.1. Апопгоз в патогенезе различных заболеваний
1.4.2. Роль апоптоза в атрофии гормонзависимых тканей
1.4.3. Апопгоз и канцерогенез в эндометрии
1.5. Методы выявления апоптоза
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и реактивы
2.2. Характеристика клинического материала
2.2.1. Выделение мононуклеарных клеток периферической крови человека
2.2.2. Подготовка операционного материала
2.3. Методы исследования
2.3.1. Определение активности СМЭ
2.3.2. Приготовление срезов тканей и их окрашивание гематоксилинэозином
2.3.3. Выявление клеток с фрагментированной ДНК i i i ii i i,
2.3.4. Статистическая обработка результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Модификация метода определения активности 2завиекмых эдонуклеаз
3.2. Оценка активности 2V23ix эдонуклеаз в различных тканях
3.3. Оценка активности эндонуклеаз в неизмененном эндометрии в различные фазы менструального цикла
3.4. Оценка активности эндонуклеаз при различных пшерпластических и неопластических состояниях эндометрия
3.5. Активность СМЭ в ткани аденокарциномы эндометрия
3.6. Оценка активности СМЭ в мопонуклеарных клетках периферической крови
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Наиболее изученными заболеваниями, при которых происходит ингибирование апоптоза, являются лейкозы и лнмфомы, развитие которых сопряжено с изменением экспрессии регуляторов апоптоза, в частности, с гиперэкспрсссией ингибитора апоптоза 2 . . В то же время данные литературы о нарушениях процесса апоптоза и его роли в патогенезе пролиферативных заболеваний эндометрия очень противоречивы. Выбор эндометрия в качестве объекта исследования обусловлен тем, что в течение менструального цикла в этой ткани происходят последовательные процессы пролиферации, дифференциации и элиминации клеток, в связи с чем эндометрий представляет собой хорошую модель для изучения процессов клеточной пролиферации и гибели. По данным литературы апоптоз играет ключевую роль в опосредованном гормонами циклическом отторжении клеток функционального слоя эндометрия . Несбалансированность гормональной стимуляции эндометрия в течение менструального цикла приводит к нарушению баланса пролиферации и гибели клеток и гиперпластнческим изменениям эндометрия. Гиперпластичсские процессы в эндометрии в ряде случаев являются предвестником неопластической трансформации клеток и развития адснокарциномы. Савельева и Серов, . Для четкого представления клеточной динамики при заболеваниях опухолевого генеза важна адекватная оценка не только процессов клеточной пролиферации и дифференцировки, но и клеточной гибели. В этой связи необходим поиск маркеров, позволяющих оценить изменения, которые происходят при переходе от нормальной пролиферации, контролируемой конкурентным процессом клеточной гибели, к неконтролируемой пролиферации, приводящей к гиперплазии и неоплазии тканей эндометрия. Одним из главных критериев апоптоза является расщепление ДНК на олнгонуклсосомныс фрагменты, которые выявляются при электрофорезе в виде дискретных полос i . . Межнуклсосомная фрагментация ДНК осуществляется, главным образом, Са2М2зависимыми эндонуклеазами, локализованными в клеточном ядре ii , . v , . Изменения активности Са2зависимых эндонуклеаз отмечены при некоторых патологических процессах iv . . В частности, наблюдаемое при лимфопролиферативных заболеваниях значительное снижение активности ядерных СаТКзависнмых эндонуклеаз, считается признаком нарушения апоптоза Соколова и соавт. Ткачева и соавт. В этой связи представляется актуальным исследование активности ядерных Са зависимых эндону клеаз в эндометрии. Исследование активности ядерных СаМзависимых эндонуклеаз при физиологических и патологических состояниях эндометрия, сопровождающихся изменением баланса пролиферации и гибели клеток. Разработать метод определения активности СаМ Исследовать зависимость активности СМЭ в эндометрии от фазы менструального цикла. Определить активность Са7Мзавнсимых эндонуклеаз в тканях эндометрия с разной степенью выраженности гиперпластическкх и неопластических процессов. Оценить уровень активности СМЭ в мононуклсарных клетках периферической крови в зависимости от состояния эндометрия. Впервые показано, что гиперплазия ткани эндометрия сопровождается уменьшением активности СМЭ в измененных участках ткани, но не в клетках периферической крови. Активность СМЭ в ткани эндометрия при его гиперпластичсских и неопластических изменениях снижается в ряду неизмененный эндометрий гиперпластичсский эндометрий адснокарцинома эндометрия. Активность Са ЪЛ зависимых эндонуклеаз снижается по мере уменьшения степени дифференцировки аденокарцином. Проведена адаптация метода количественной оценки активности СаМйзависимых эндонуклеаз для исследования эндометрия. Показано, что снижение активности СМЭ зависит от степени выраженности патологического процесса в эндометрии. Снижение активности СаМзависимых эндонуклеаз, повидимому, является маркером нарушений процесса апоптоза, приводящих к изменению баланса клеточной пролиферации и гибели в ткани эндометрия. Предложенный метод измерения уровня активности СМЭ позволяет выявить нарушения механизмов регуляции апоптоза в ткани эндометрия и оценить степень риска их малигнизащт.