Влияние стероидных гормонов и их комплексов с аполипопротеином А-1 на структуру ДНК

• Автор: Кузнецов, Павел Александрович
• Шифр специальности: 03.00.04, 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 119 с.

Оглавление Список сокращений Введение

Актуальность темы Цели и задачи исследования Научная новизна

Теоретическая и практическая значимость работы Основные положения, выносимые на защиту Апробация работы и публикации Обзор литературы Липопротеины Аполипопротеины Стероидные гормоны Взаимодействие аполипопротеинов и стероидных гормонов Факторы транскрипции в регуляции экспрессии генов
Описание базы данных ТВАКБЕАС Описание базы данных ТИКО Заключение Материалы и методы

Использованные реактивы и материалы

Основные использованные растворы

Использованное оборудование

Выделение липопротеинов высокой плотности

Делипидирование

Разделение белков электрофорезом

Электроэлюция

Г ельфильтрация белков
Иммуноферментный анализ
Выделение ДНК
Выделение ДНК с использованием проназы
Выделение ДНК с использованием
гуанидин тиоцианата
Анализ выделенной ДНК с помощью
электрофореза в агарозном геле
Ферментативный анализ ДНК
Ферментативный анализ влияния холестерина и стероидных гормонов на структуру ДНК
Получение комплекса апоЛПстероид
Взаимодействие комплекса апоЛПстероид с ДНК
Гидрол из нуклеазой 5
Конкурентное ингибирование взаимодействия комплекса апоА1 с ДНК
Сканирование фотопленок и радиоавтографов
Копирование оц. участков ДНК с использованием фрагмента Кленова
Анализ связывания олигонуклеотидов с апоА1 и с комплексом апоА1гормон
Оценка нуклеотидной специфичности взаимодействия комплексов апоА1ТГК, апоА1ДЭАСсульфат с ДНК Результаты
Анализ выделенных препаратов
Б1 нуклеазочувствительные участки в ДНК
Взаимодействие ДНК со стероидами
Взаимодействие ДНК с комплексом
аполипопротеинстероид
Влияние структурных особенностей ДНК
на гидролиз нуклеазой
Количество нуклеазочувствительных
участков в ДНК
Взаимодействие комплекса апоА1гормон с ол и гону кл еоти дами
Копирование ДНК фрагментом Кленова Оценка нуклеотидной специфичности связывания комплекса апоА1гормон с ДНК Обсуждение результатов
Взаимодействие ДНК с комплексом аполипопротеин А1сгероиды Повторяющиеся структуры ДНК, расщепляемые нуклеазой Количество нуклеазочувствительных участков в ДНК
Нуклеотидная специфичность участков ДНК, взаимодействующих с комплексом апоА1гормон Заключение Выводы
Список литературы


Несомненно, ключом к пониманию важнейших приспособительных реакций организма на действие экстремальных факторов является регуляция экспрессии генов. Эндокриннометаболические взаимоотношения, которые складываются в различных органах и тканях, имеют особое значение для понимания интегративных процессов целостного организма. Именно от них зависит развитие адаптивных или дизадаптивных реакций при действии на организм чрезвычайных раздражителей Панин Л. Е., , Меерсон Ф. Пшенникова М. Г., . Н.ГТ. Мертвецов Н. П., гормонов на экспрессию отдельных генов. В частности, хорошо известен рецепторопосредованный механизм глюкокортикоидной индукции ферментов глюконеогенеза и катаболизма аминокислот Мертвецов Н. П., . В то же время влияние различных метаболитов и дериватов стероидных гормонов на геном клетки изучено недостаточно. Классическим представлением в биохимии стероидных гормонов до сих пор считается отсутствие какой бы то ни было биологической активности у тетрагидрокортизола метаболита глюкокортикоидного гормона кортизола. В нашем институте НИИ Биохимии СО РАМН было открыто явление стимуляции резидентными макрофагами биосинтеза белка в паренхимных клетках органов и тканей в условиях регенерации Панин Л. Е. и др. В результате проведенных исследований были получены ранее неизвестные данные о кооперативном действии глюкокортикоидов и липопротеииов высокой плотности ЛГТВП в регуляции экспрессии генов по механизму, принципиально отличающемуся от механизма глюкокортикоидной индукции Панин Л. Е. и др. На основании полученных экспериментальных фактов было сделано предположение, что комплекс аполипопротеина АI апоА1 с тетрагидрокортизолом ТГК может служить индуктором транскрипции генов, оказывая влияние на структуру ДНК в составе хроматина и инициируя начало процесса транскрипции Панин Л. В настоящее время можно считать доказанным, что липопротеины плазмы крови оказывают выраженное регуляторное влияние на различные типы клеток организма Панин Л. Е., , . Показано регуляторное воздействие основного белкового компонента липопротеииов высокой плотности аполипопротеина АI на экспрессию некоторых генов . Данная работа имеет отношение к изучению молекулярных механизмов регенерации. Процессы внутриклеточной регенерации относятся к фундаментальным явлениям. Они связаны с регуляцией экспрессии генов и синтезом огромного количества белков. Эти процессы в клетке протекают непрерывно и направлены на поддержание структурного гомеостаза организма в целом. Молекулярные механизмы их очень сложны и не изучены до сих пор. Они включают образование биологически активною комплекса стероидный гормон аполипоиротеин АI, которое протекает в резидентных макрофагах. Затем осуществляется перенос данного комплекса в ядра соматических клеток, где и происходит его
взаимодействие с депротеинизированными участками ДНК. В данной работе изучался последний этап взаимодействие различных стероидных гормонов, их метаболитов и комплексов с аполипопротеином А1 с эукариотической ДНК. Большую важность представляло определение сайтов взаимодействия и их распределение в эукариотической ДНК, изменения е структуры в сайтах взаимодействия с комплексом. Решение этих вопросов позволяет нам приблизиться к пониманию молекулярных механизмов индукции синтеза белков при регенерации и пролиферации клеток. Целью настоящей работы являлось изучение механизма действия некоторых стероидных гормонов кортизола, тетра гидрокортизола, андростерона, дегидроэпиандростерона, и дегидроэпиандростеронсульфата, а также их предшественника холестерина на вторичную структуру ДНК крыс и роль в этом механизме таких белков как аполипопротеин А1 и аполипоиротеин Е. Изучить воздействие кортизола, тетрагидрокортизола, андростерона, дегидроэпиандростерона, дегидроэпиандростеронсульфата и холестерина на структуру ДНК. Изучить воздействие стероидных гормонов в присутствии апоА1 и апоЕ на структуру нативной ДНК крыс с использованием ферментативных методов анализа. Оценить нуклеотидную специфичность в области взаимодействия комплекса апоА1тетрагидрокортизол с ДНК.