Иммунолипосомальные системы направленного транспорта биологически активных веществ в глиальные клетки

• Автор: Рябинина, Анастасия Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.04, 15.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 151 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ЛИПОСОМАЛЬНЫ Е СИСТЕМЫ КОНТРОЛИРУЕМОГО НАПРАВЛЕННОГО ТРАНСПОРТА БИОЛОГИЧЕСКИ

АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ. ОСНОВНЫЕ АСПЕКТЫ

1.1. Липосмы как контейнеры для доставки биологически ак тивных веществ.

1.1.1. Липосомы. Краткое определение.

1.1.2. Преимущества липосомальных форм доставки лекарственных средств

1.1.3. Липосомы. Краткий исторический обзор.

1.1.4. Состав и структура липосом

1.1.5. Образование липосом

1.1.6. Физические свойства липосом
1.1.7. Включение биологически активных веществ в липосомы
1.1.8. Биологические эффекты традиционных липосом
1.1.9. Липосомы как контейнер для генотерапии
1.1 Стерически стабилизированные или з1еакЬлипосомы на правленного действия
1.2. Основной белок миелина как мишень для направленного
транспорта и моноклональные антитела, специфичные к нему, как векторные молекулы, определяющие направленность такого транспорта
1.2.1. Основной белок миелина. Краткая характеристика 5.
1.2.2. Структура и функции миелина
1.2.3. Основной белок миелина. Структура, функции, физико химические свойства
1.2.4. Биологическая роль ОБМ
1.3. Глиофибриллярный кислый белок как мишень для направ
ленного транспорта и моноклональные антитела, специфичные к нему, как векторные молекулы, определяющие направленность такого транспорта.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИСССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект и методы исследований
2.1Л. Приборы и оборудование
2.2. Приготовление иммунолипосом
2.2.1. Приготовление липидной эмульсии
2.2.2. Подготовка антител
2.2.3. Конъюгация антител с линосомами
2.2.4. Стерилизация липосом
2.2.5. Определение размера липосом.
2.3. Приготовление ПЭГилированных липосом с антителами к
ОЬМ в качестве вектора
2.3.1. Подготовка культуры шванновских клеток
2.3.2. Иммуноцитохимический анализ
2.3.3. Инкубирование иммунолипосом с культурой шванновских клеток
2.4. Приготовление ПЭГилированных иммунолипосом, с после
дующей загрузкой доксорубицином
2.4.1. Определение липосомального доксорубицина
2.4.2. Определение липосомального доксорубицина после лиофили зации
2.4.3. Определение стабильности катионных липосом с доксоруби цином в сывороточной среде
2.4.4. Определение срока годности липосом
2.4.5. Подготовка культуры астроцитов
2.4.6. Иммунофлуоресцентный анализ
2.4.7. Инкубирование иммунолипосом, загруженных доксорубици
ном с культурой астроцитов
2.4.8. Подготовка культуры обкладочных клеток
2.4.9. Инкубирование иммунолипосом, загруженных доксорубици пом с культурой обкладочных клеток
2.5. Количественное определение фосфолипидов
2.5.1. Построение калибровочного графика
2.5.2. Определение липидов в водных эмульсиях
2.6. Определение общего белка с бицинхониновой кислотой
2.6.1. Общая процедура и построение калибровочного графика
2.6.2. Определение белка в препаратах иммунолипосом с предвари тельным отделением белка от липидов
ГЛАВА 3. ДОСТАВКА ИММУНОЛИПОСОМ В КУЛЬТУРУ
ШВАННОВСКИХ КЛЕТОК
3.1. Подготовка культуры шванновских клеток
3.2. Испытание препарата иммунолипосом на культуре шван новских клеток
3.3. Характеристика иммунолипосом
3.3.1. Определение подлинности иммунолипосом
3.3.2. определение размера липосом ГЛАВА 4. ДОСТАВКА ИММУНОЛИПОСОМ,
ЗАГРУЖЕННЫХ ДОКСОРУБИЦИНОМ, В КУЛЬТУРУ АСТРОЦИТОВ
4.1. Подготовка культуры астроцитов
4.2. Испытание препарата иммунолипосом на культуре астроци
4.3. Характеристика иммунолипосом
4.3.1. определение степени загрузки иммунолипосом доксоруби 2 ципом
4.3.2. Определение стабильности липосом после лиофилизации
4.3.3. Определение стабильности липосом в сывороточной среде
4.3.4. Определение срока годности липосом
4.3.5. Испытания качества препарата доксорубицина
ГЛАВА 5. ДОСТАВКА ИММУНОЛИПОСОМ В
КУЛЬТУРУ ОБКЛАДОЧНЫХ КЛЕТОК
5.1. Подготовка культуры обкладочных клеток
5.2. Испытание препарата иммунолипосом на культуре обкла 7 дочных клеток
5.3. Характеристика иммунолипосом
ГЛАВА 6. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
КОМПОНЕНТОВ ИММУНОЛИПОСОМ
6.1. Количественное определение фосфолипидов в водных 1 эмульсиях
6.2. Определение общего белка с бицинхониновой кислотой
ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Предварительно культивированные обкладочные клетки сохраняют способность стимулировать регенерацию и рост аксонов нейронов центральной и периферической нервной системы при перерезке корешков и повреждении спинного мозга. Направленная доставка БАВ в культуру этих клеток перед трансплантацией могла бы повысить эффективность лечебных мероприятий. Доставка противоопухолевого антибиотика в астроцигы весьма перспективна для лечения глиальных опухолей мозга. Направленный транспорт в шванновские клетки может быть рекомендован для диагностического и терапевтического применения при заболеваниях, сопровождающихся нарушением целостности миелиновой оболочки. Для селективного векторного транспорта к миелинобразующим клеткам оптимальной мишенью представляется основной белок миелина ОБМ. Он является количественно доминирующим структурным компонентом мембраны таких клеток. В настоящий момент именно он признан главным маркером состояний, сопровождающихся нарушением целостности миелиновой оболочки , 3, 6, , , 0, 0, 1, 5, 4 таких как острый демиелинизирующий процесс, рассеянный склероз, травматические повреждения головного мозга, глиальные опухоли 3, 6, , 1,5,, 8, 8, 8, 1,0,1,7. Для доставки липосомальных систем в астроциты была выбрана мишень глиофибриллярный кислый протеин . В данном случае липосомальные конструкции могут быть загружены противоопухолевым средством, которое будет направленно доставляться к реактивным астроцитам при глиальных опухолях мозга. Кроме того, является одним из маркеров i дословно обкладочные или оболочечные клетки обонятельного эпителия в отечественной гистологической номенклатуре аналога этому термину не существует. Таким образом, обкладочные клетки, выделенные из собственного обонятельного эпителия реципиента, являют собой уникальный клеточный материал для аутотрансплантации при повреждении спинного мозга. В таком случае является перспективным введение биологическиактивных веществ БАВ в культуру обкладочных клеток с помощью липосом перед трансплантацией. Настоящая работа имела целью Создать иммунолипосомальную систему для направленного транспорта БАВ в глиальные клетки нервной ткани. Изучить специфичность взаимодействия полученных иммунолипосомальных контейнеров с культурами клеток. Разработана и стандартизована иммунолипосомальная система для направленного транспорта доксорубицина к астроцитам, для направленного транспорта в i и в живые шванновские клетки. Получены иммунолипосомальные контейнеры, специфичные к шванновским клеткам, астроцитам, и обкладочным клеткам, рекомендуемые для доклинических испытаний. Основные положения диссертации были представлены в периодической печати, на международной конференции i i i i. I Международной конференции Физикохимичские методы исследования нанообъектов в химии, биологии и медицине Россия, Туапсе , а также на совместном заседании Проблемного совета ФГУ ГНЦССП им. В.П. Сербского Росздрава и кафедр биохимии и фармацевтической и токсикологической химии медицинского факультета РУДН 9 июня г. Публикации. По материалам диссертации опубликовано семь печатных работ, из них четыре статьи в рецензируемых журналах перечня ВАК и глава в монографии. Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, шести глав, выводов и библиографического указателя. Работа изложена на 1 машинописной странице и содержит рисунков и 7 таблиц. Список литературы включает отечественных и 0 иностранных источников. Липосомы. ЛИПОСОМЫ от грсч. Преимущества липосомальных форм доставки лекарственных средств 0. Липосомы. Впервые липосомы были описаны в первой половине х годов в работах , . Сначала рассматривавшиеся исключительно как искусственные экспериментальные модели природных биологических мембран, они очень скоро заслужили признание как весьма удобные системы для направленного транспорта пассивного или активного самых разнообразных агентов например, лекарственных препаратов в определенные системы клеток и ткани. Вследствие этого за последние лет исследования в этой области были предметом большого количества статей, обзоров, теоретических монографий и практических руководств , , 5, 4, 5, 6.