Идентификация генетических маркеров, ассоциированных с предрасположенностью к сахарному диабету типа 1, на хромосомах 6 и 10

• Автор: Серегин, Юрий Александрович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.
Цель работы

Научная новизна работы.

Практическая ценность работы.

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общая характеристика сахарного диабета типа 1.

1.2. Концентрация сахарного диабета в семьях больных.

1.3. Вклад генетических и негенстичсских факторов в развитие сахарного диабета типа 1

1.4. Полиморфные участки ДНК.

1.4.1. Типы полиморфизма.

1.4.2. Методы детекции полиморфизма ДНК.
1.5. Стратегии изучения мультифакторных заболеваний
1.5.1. Тест на неравновесную передачу аллелей ТОТ.
1.6. Молекулярно генетические маркеры сахарного диабета типа 1
1.7. Молекулярные механизмы возникновения аутоиммунной реакции при сахарном диабете типа 1.
1.8. Структура регуляторных участков гена. Транскрипционные факторы.
1.9. Характеристика исследуемых в работе локусов и генов.
1.9.1. Локус ЮОМ8 на хромосоме 6я.
1.9.2. Локус ЮОМЮ на хромосоме р
1.9.3. Ген транскрипционного фактора ГСГ5.
1.9.4. Ген активатора программируемой клеточной гибели Р0С . Заключение
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Реактивы и ферменты.
2.2. Буферные растворы
2.3. Формирование группы пациентов.
2.4.Выделение геномной ДНК человека методом фенолхлороформной
экстракции
2.5.Амплификация ДНК
2.6. Расщепление продуктов амплификации рестриктазами.
2.7. Электрофоретическое разделение ДНК.
2.8. Секвенирование гена РйС
2.9. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей
2 Статистическая обработка результатов
21. Анализ сцепления.
22. Анализ ассоциации
23. Неравновесие по сцеплению
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Изучение полиморфных маркеров на хромосоме 6ц
3.1.1.Выбор полиморфных маркеров.
3.1.2. Идентификация аллелей полиморфного маркера САОп
3.1.3. Идентификация аллелей однонуклеотидных полиморфных маркеров РгоА1а, Рке7Аьп, Ыу7Уа1, СТ, ТС,С6Т.
3.1.3. Неравновесие по сцеплению между полиморфными маркерами в хромосомной области 6я.
3.1.4. Ассоциация аллелей полиморфных маркеров САОп, ТС, СТи СбТс СД типа 1
3.1.5. Ассоциация гаплотипов с СД типа 1.
3.1.6. Поиск полиморфных маркеров в гене РйСй2.
3.2. Изучение ассоциации полиморфных маркеров в хромосомной области р с СД типа 1.
3.2.1. Выбор полиморфных маркеров в области 1 Ор
3.2.2. Идентификация аллелей полиморфных микросателлитных маркеров в хромосомной области р.
3.2.3. Сцепление полиморфных маркеров в области р с сахарным диабетом типа 1
3.2.4. Ассоциация аллелей полиморфных маркеров в области 1 Ор с СДтипа 1
3.2.5. Возможная роль продукта гена ТСР8 в развитии сахарного
диабета типа 1.
3.2.6 Исследование полиморфных маркеров в гене ТСР8
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ВВЕДЕНИЕ. Научная новизна работы. Практическая ценность работы. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Общая характеристика сахарного диабета типа 1. Концентрация сахарного диабета в семьях больных. Полиморфные участки ДНК. Типы полиморфизма. Методы детекции полиморфизма ДНК. Тест на неравновесную передачу аллелей ТОТ. Молекулярные механизмы возникновения аутоиммунной реакции при сахарном диабете типа 1. Структура регуляторных участков гена. Транскрипционные факторы. Характеристика исследуемых в работе локусов и генов. Локус ЮОМ8 на хромосоме 6я. Ген транскрипционного фактора ГСГ5. Ген активатора программируемой клеточной гибели Р0С . МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Реактивы и ферменты. Формирование группы пациентов. Расщепление продуктов амплификации рестриктазами. Электрофоретическое разделение ДНК. Анализ сцепления. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Выбор полиморфных маркеров. Идентификация аллелей однонуклеотидных полиморфных маркеров РгоА1а, Рке7Аьп, Ыу7Уа1, СТ, ТС,С6Т. Неравновесие по сцеплению между полиморфными маркерами в хромосомной области 6я. Ассоциация гаплотипов с СД типа 1. Поиск полиморфных маркеров в гене РйСй2. Изучение ассоциации полиморфных маркеров в хромосомной области р с СД типа 1. Идентификация аллелей полиморфных микросателлитных маркеров в хромосомной области р. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. Сахарный диабет СД типа 1 является одним из наиболее распространенных и тяжелых наследственных заболеваний человека. Показано, что имеющее место нарушение метаболизма глюкозы возникает изза аутоиммунного разрушения бетаклеток поджелудочной железы, после чего они теряют способность вырабатывать инсулин. Пути развития заболевания к настоящему времени недостаточно изучены. Однако известно, что сахарный диабет первого типа формируется при взаимодействии нескольких генетических компонент и факторов внешней среды. Как правило, при наличии генетической предрасположенности СД типа 1 развивается в раннем возрасте и вызывает тяжелые осложнения, такие как поражения кровеносных сосудов, почечную недостаточность, слепоту, гангрены. С помощью своевременной профилактики заболевания у пациентов с повышенным генетическим риском можно как минимум значительно отсрочить появление симптомов сахарного диабета и снизить опасность развития осложнений. Поэтому в настоящее время одним из наиболее прогрессивных подходов является разработка стратегии ранней диагностики, прогнозирования и превентивной терапии заболевания с использованием генетических маркеров. Полигенная природа СД типа 1 доказана последними работами по поиску локусов предрасположенности к заболеванию с использованием мультилокусного анализа сцепления. Удалось обнаружить более локусов предрасположенности к СД типа 1. К сожалению, результаты оказались противоречивыми и сильно зависели от этнотерриториальной принадлежности использованных выборок. Только для двух локусов существуют четкие доказательства их связи с СД типа 1. Каждая из таких работ вносит свой вклад в понимание процессов, приводящих к СД типа 1. Одними из наиболее значимых локусов по вкладу в семейный риск развития заболевания являются ЮйМ8 и ЮОМЮ, расположенные соответственно в хромосомных областях 6ц и р. К настоящему времени усилиями зарубежных исследовательских групп с использованием семей с сибсами, больными СД типа 1, проведено генетическое картирование хромосомных областей 6 и р в этнических группах Европы и Северной Америки. Оно позволило в той или иной степени определить положения локусов ЮОМ8 и ЮйМЮ. Однако для популяций России подобные исследования ранее не проводились. Кроме того, ранее нигде в мире не изучались конкретные гены в данных областях и полиморфные маркеры внутри этих генов. В настоящем исследовании мы постарались восполнить эти пробелы. Установление ассоциации полиморфных маркеров с сахарным диабетом типа 1 поможет разработать дифференцированный подход к профилактике и лечению данной патологии в зависимости от наследственной предрасположенности конкретного пациента.