Исследование структуры РНК и белка нуклеопротеида вируса гриппа в растворе и в составе РНП

• Автор: Соколова, Марина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 160 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ I. ОБЗОР Ж ТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОРТОШКСОШРУСОВ

1. Классификация, морфология и физикохимические свойства.

2. Структура и полипептидный состав вирионов гриппа.

ГЛАВА П. РНК СРТОМИКСОВИРУСОВ.

1. Структура и физикохимические свойства РНК вируса гриппа.

2. Характеристики отдельных сегментов РНК

. Гены, кодирующие полимеразные белки

Б. Ген., кодирующий геыагглютинин.

. Ген, кодирующий Рбелок
Г. Ген, кодирующий нейраминидазу.
Д. Ген, кодирующий Мбелки .
Е. Ген, кодирующий М1 и белки.
ГЛАВА Ш. НУКЛЕОКАПСИД ОРТОШКСОШРУСОВ
1. Структура и физикохимические свойства
белков РНП вируса гриппа.
А. Белок цуклеопротеида Рбелок.
Б. Белки полимеразного комплекса РВ1, РВ2 и РА
2. Структура РНП вируса гриппа.
. Физикохимические свойства РНП
Б. Морфология РНП .
. Природа РНКбелкового взаимодействия
3. Взаимодействие РНП вируса гриппа с Мбелком. ЧАСТЬ П. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
ГЛАВА I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
ГЛАВА П. ШЗШОЖШЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ РНП
ШРУСА ГРИППА
1. Основные характеристики интактного РНП
вируса гриппа
2. Протеолитическое расщепление Рбелка ферментом бромелином.
ГЛАВА Ш. ВТОРИЧНАЯ СТРУКТУРА РНК ШРУСА ГРИППА
В РАСТВОРЕ
1. Использование катионного детергента детилтриметиламмоний бромида ЦГАБ при выделении РНК вируса гриппа
2. Исследование влияния ионной силы на тепловую денатурацию РНК вируса гриппа в растворе
3. Определение содержания АУ и ГД пар оснований
в двухцепочечных участках РНК вируса гриппа
4. Спектр кругового дихроизма РНК вируса
гриппа в растворе
ГЛАВА 1У. ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРЫ РНП ШРУСА ГРИППА
МЕТОДОМ КРУГОВОГО ДОХРОИЗМА
1. Спектры КД.
2. Исследование термоденатурации РНК и РНП вируса гриппа.
3. Исследование природы связей в РНП вируса гриппа
А. Влияние мочевины на спектры КД РНП вируса гриппа.
Б. Влияние солей и
на спектры КД РНП вируса гриппа.
ГЛАВА У. ОБРАШМАЯ ДИССОЦИАЩЯ РИБОНУКЛЕОПРОШДА
ВИРУСА ГРИППА.
1. Условия дассоциации РНП.
2. Морфология и физикохимические характеристики белка, полученного в результате диссоциации
комплекса
3. Реассоциация РНКбелкового комплекса ДО
ГЛАВА У1. ПОЛУЧЕНИЕ ШОСПВДШЧВСКИХ СЫВСРОГОК К
УРБЕЛКУ ВИРУСА ГРИППА И ИХ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДАМИ РАДНСЙММУНОПРЕЩПИТАЩИ И ИММУНОФЕРМЙГГНОГО АНАШЗА.
I Анализ сывороток методом двойной имцуно
диффузии. по
2. Радиоищунопреципитация. НО
3. Иммуноферментный анализ. ПО
ГЛАВА УП. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗ
1. Протеолитическое расщепление УРбелка и матриксного белка вируса гриппа ферментом
броме лином. .
2. Вторичная структура РНК вируса гриппа в растворе. 7.
3. Вторичная структура РНК в составе рибонуклеопротеида вируса гриппа
4. Природа РНКбелковых взаимодействия в РНП
вируса гриппа.
5. Обратимая диссоциация РНП вируса гриппа
6. Имифгнологические свойства УРбелка вируса
гриппа
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Таким образом, можно полагать, что гетерогенность популяции вирионов гриппа может бшгь обусловлена по крайней мере отчасти различиями в методах их выделения и очистки и зависеть от способа приготовления вирусных образцов для анализа. Вирионы гриппа имеют сложный химический состав и содержат белка, липидов, 58 углеводов и около 1 геномной РНК , 7, 7. Плавучая плотность вирионов гриппа в изоплотностном градаенте сахарозы составляет 1,1, гсм3 . Вирионы гриппа всех трех типов А, В и С имеют сходную структуру и полипептидный состав ,,8,9. В зрелом вирионе сегменты однонитчатой РНК см. Р с омм 0, образуя гибкие рибонуклеопротеидные тяжи 7. Наряду с У Рбзлком в состав РНП входят белки I, РВ2 и РА омм . РНКзависимойРНКполимеразы транскриптазы 2, 6, 4. Белки полимеразного комплекса являются минорными а составляют незначительную часть 1,12,2 от общего количества белка в вирионе. В каждой вирусной частице содержится около молекул каждого УРбелка 3, 4, 3, 5. А, который образован молекулами матриксного или мембранного М белка. Мбелок гидрофобен, имеет омм 0 и представлен в вирионе в наибольшем количестве ,,5,3. На каждую вирусную частицу приходится молекул Мбелка 3, 5, что составляет от до от общего содержания белка в вирионе 4, 7. Предполагают, что Мбелок стабилизирует структуру вириона. Слой матриксного белка прилегает к внутренней стороне липидной мембраны, которая служит внешней оболочкой вириона. Внешняя оболочка представляет собой липидный бислой, получаемый вирусом от хозяйской клетки в процессе созревания и почкования 6, 7. Электронномикроскопические исследования показали, что на поверхности вирусной частицы имеются выступы 2х типов. НА и нейраминидазой УА. Эти гликопротеиды гидрофобными концами своих молекул погружены в липидный бислой. Эти выступы образованы тримерами белка НА с омм 5. Молекулярная масса мономзрнсгоНА составляет 70, из них . Каждая молекула НА, в свою очередь, содержит две субъединицы I и НА2, которые образуются путем посттранс ляционного протеолитического нарезания единой полипептидной цепи и соединены дисульф1дной связью. НА взаимодействует с поверхностными рецепторами клетки, с концевым остатком V ацетилнейраминовой кислоты , и участвует в инициации инфекционного процесса 6. Нарушение процесса нарезания не влияет на это взаимодействие. Второй тип выступов представлен тетрамерами нейраминидазы Ук с омм 0. Мономерная Vгликопротеид с омм . Функция У А не совсем ясна. У ацетилнейрашновую кислоту от клеточных и вирусных субстратов, предотвращает агреггацию вирионов и повторную ассоциацию их с уже зараженной клеткой . Кроме того, возможно, что У к обеспечивает необходимые условия для нарезания НА на I и НА2 6, а также способствует освобождению новых вирусных частиц с клеточной мембраны 6. Предполагают, что У к играет определенную роль в слиянии вирусной оболочки и клеточной мембраны в момент заражения клетки. НА и Мк являются наиболее полно охарактеризованными среди белков вируса гриппа. В последние годы эти белки были получены в кристаллической форме и методом рентгеноструктурного анализа, изучена трехмерная структура гемагглютинина серотипа НЗ и нейраминидазы серотипа 2, а также определено положение основных антигенных участков на поверхностях обеих молекул и положение активного центра нейраминидазы , 4, 9. В заключение следует отметить, что у вирусов гриппа типа С обнаружен только один вид выступов длиной 8 нм и диаметром 45 нм. Эти выступы расположены на поверхности вирусной частицы в виде гексагональной решетки . Они образованы единственным гликопротеидом с омм . По своей структуре и функциям он скорее подобен гемагглютинину вирусов типа А и В . Что же касается его ферментативной активности. Определенно можно лишь сказать. С фермент. ГЛАВА П. Шрус гриппа относится к РНКсодержащим вирусам с отрицательным геномом, т. РНК не является информационной нитью . Отличительной особенностью этой группы вирусов является то, что функционирование их генома происходит в составе РНП , 1.