Изучение нуклеиново-белковых взаимодействий в вирусах группы ВТМ и в коротких ВТМ-подобных рибонуклеопротеидных частицах

• Автор: Мизенина, Ольга Алексеевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 162 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ .

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Нуклеиновобелковые взаимодействия в

составе палочковидных вирусов растений .

1.1.1. Структура палочковидных вирусов

группы ВТМ

1.1.2. Оптические характеристики внутривкрусной РНК ВТМ.

1.1.3. Механизмы самосборки вируса табачной мозаики

1.1.4. Действие формальдегида на палочковидные вирусы и возможность образования формальдегидных РНКбелко
вых сшивок
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Спектры КД ряда вирусов группы ВТМ и их внутривирусных РНК
3.1.1. Характеристика препаратов используемых вирусов
3.1.2. Спектры КД цельных вирусов .
3.1.3. Спектры КД вирусных белков .
3.1.4. Спектры КД внутривирусных РНК
3.2. Сшивание РНК ВТМ с белком в ЗОБ РНП частицах.
3.2.1. Характеристика ЗОБ РНП частиц
а зависимость эффективности образования РНП от условий сборки.
б спектры поглощения и кругового обзора дихроизма ЗОБ РНП
Стр.
в Равновесное центрифугирование препаратов ЗО Б РНП в градиенте плавучей плотности солей тяжелых металлов Сз2бо, и СэС1
г Действие РНКазы на фрагменты РЖ в
составе ЗО Б РНП.
д Влияние на стабильность э РНП .
е Электронная микроскопия препаратов
ЗО Б РНП.
ж Антигенные характеристики ЗО зРНП
3.2.2. Сшивание РЖ ВТМ с белком в составе
ЗО БРНП под действием формальдегида
а Кинетика сшивания РЖ с белком в составе
3РНП под действием формальдегида. III
б Центрифугирование обработанных формальдегидом ЗО бРНП в градиенте плотности
в Электрофорез формалинизированного 3
РНП в полиакриламидном геле
г Гельфильтрация формалинизированного
э РНП.
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Оптическая активность РЖ в частицах палочковидных вирусов .
4.2. Характеристика Б частиц
4.3. Возможность сшивания РЖ с белком в составе
Бчастиц.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


В связи с этим долгое время не удавалось получить рентгенограммы ВТМ с высоким разрешением. Наиболее значительные успехи в изучении структуры ВТМ и его штаммов были достигнуты в конце х годов. Прежде всего это связано с совершенствованием с алого метода рентгеноструктурного анализа, но в большой степени и с исследованием структуры так называемого парного диска белка ВТМ. Дело в том, что для белка ВТМ характерна способность образования нескольких видов дискретных агрегатов ,,0,1 , одним из которых является парный диск подробнее вопрос об агрегационных свойствах белка ВТМ будет рассмотрен ниже. Парные диски играют важную роль в процессе инициации сборки ВТМ. Они образуются при С в растворе с ионной силой 0,10,3 М и 7,07,2 ,,, и представляют собой агрегаты, обладающие цилиндрической симметрией, образованные субъединицами, полярно уложенными в два слоя в виде двух дисков по субъединиц белка в каждом ,, . Чемпнессу и др. А0, используя изоморфные замещения производными тяжелых металлов . На основании этих данных была построена первая модель структуры диска. Прежде всего были подтверждены полученные ранее результаты о полярности диска субъединицы белка в двух слоях ориентированы голова к хвосту. В области больших радиусов А0 слои диска сближены, но на малых радиусах между верхним А и нижним В слоями диска образуется полость шириной 7 А0, которая вместе с полостью диска открывает доступ к РНКсвязывающему центру, расположенному между слоями в радиусе А0. Сравнив эти данные с данными рентгеноструктурного анализа ВТМ с разрешением 6,7 А0, полученными группой Холмса 0 , Чемпнесс и др. РНК ВТМ взаимодействует с диском именно через эту полость между слоями субъединиц. Это взаимодействие приводит к упорядочению структуры белка в радиусе А0 и дислокации диска, то есть превращению диска в спиральноупакованную структуру завиток. Каждая субъединица диска содержит два отрезка полипептидной цепи с высокой электронной плотностью в области между и А0, которые были идентифицированы Чемпнессом и др. Ь и правая н спирали, а также отклоненная Б или радиальная и спираль в соответствии с ориентацией относительно радиуса диска. А0, хотя она несомненно нике, чем в области А0. Более поздние данные рентгеноструктурного анализа для вируса с разрешением 4 А0, полученные в лаборатории Холмса 8 для области А0 по радиусу частицы, в принципе также не являются достаточными для построения атомной модели ВТМ. Тем не менее, в сочетании с данными рентгеноструктурного анализа для дисков белка ВТМ с разрешением 2,8 А0, полученными в лаборатории Клуга , и данными по изучению вероятного расположения различных аминокислотных остатков в составе белковой субъединицы ВТМ ,0,5 , они позволили Холмсу предложить 6 модель структуры ВТМ на участке А0, содержащую важную информацию о взаимном расположении и возможном характере РНКбелковых взаимодействий в вирусной частице. Рассмотри1 сперва результаты, полученные на дисках разрешение 2,8 А0 . В основе структуры каждой белковой субъединицы диска лежит 46спиральных участка, расположенных в последовательности ьб, вб, ее, ье и включающих аминокислотных остатков из 8. В составе дисков ьб спираль образована АК остатками , ЕБ спираль , ЕЕ спираль , ье спираль 44 см. Спираль ЬБ начинается на радиусе А0, продолжается до радиуса А0 и, совершив поворот, переходит в ЕБспираль, параллельную ЬБ спирали ьб, ЕБ спирали образуют верхнюю половину субъединицы. Спираль ее направлена к центру диска, продолжается до радиуса А0, делает поворот и в радиусе А0 переходит в ЪЕ спираль, продолжающуюся до радиуса А0, ВВ, ье спирали образуют нижнюю половину субъединицы. Рис. А и Вслоев, вид сбоку аксиальные контакты изображены три области контактов гидрофобный контакт Про с Ала и Вал, водородные связи между Трп и Сер7 и 8 и система солевых мостиков в радиусе А0 область белка, не имеющая упорядоченной структуры, изображена ломанной прерывистой линией.