"Строгий" контроль транскрипции гена rela в клетках E.coli

• Автор: Бочканов, С.С.
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

РЕГУЛЯЦИЯ ЭКСПРЕССИИ РИБОСОМНЫХ ОПЕРОНОВ В КЛЕТКАХ .i

ГЛАВА I. Организация рибосомных оперонов и общие принципы

их регуляции

ГЛАВА 2. Строгий контроль транскрипции рибосомных оперонов

Раздел I. система синтеза .

Раздел 2. как регулятор транскрипции генов

рРНК и рбелков.

ГЛАВА 3. Посттранскрипционная регуляция биосинтеза рбелков

Раздел I. Влияние дозы генов рбелков на их биосинтез
Раздел 2. Авторегуляция биосинтеза рбелков
Раздел 3. Некоординированная экспрессия генов опе
Раздел 4. Механизм автогенной регуляции биосинтеза
рбелков.
Раздел 5. Значение автогенной регуляции биосинтеза
рбелков.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
ГЛАВА I. Влияние дозы гена на содержание в
голодающих клетках .i
ГЛАВА 2. Функция гена в растущих клетках .i
1. Участие системы в поддержании базального
уровня в растущих клетках .i .
2. Зависимость скорости роста культуры клеток бактериального штамма от внутриклеточного уровня .
Стр.
ГЛАВА 3. Клонирование, локализация и ориентация гена
на хромосоме .
ГЛАВА 4. Роль в регуляции транскрипции гена
1. Строгий контроль транскрипции гена в
клетках .i в условиях деацилирования тРНК
2. Регуляция транскрипции гена в растущих клетках ..
ОБСУЖДЕНИЕ
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Для выяснения вопроса о роли в экспрессии гена , этот ген был клонирован в составе плазмид, различающихся числом копий в клетках . Была измерена эффективность транскрипции генов в таких штаммах. Отдельная задача состояла в изучении роли гена в растущих клетках . Необходимо было выяснить, зависит ли транскрипция генаге1А от скорости роста культуры, как это наблюдается ДЛЯ рибОСОМНЫХ оперонов. Кроме ТОГО, был поставлен вопрос О , как внутриклеточном факторе, ограничивающем скорость роста культуры. Эту задачу мы решали с использованием штаммов, имеющих различную дозу гена . Новизна результатов. Уточнена рестрикционная карта области хромосомы . А и направление его транскрипции. Генге1А клонирован в составе фрагмента хромосомы с молекулярной массой 3,2ш, что позволяет использовать его для измерения скорости синтеза мРНК методом РНКДНК гибридизации. Впервые показано, что транскрипция генаге1А координирована с транскрипцией рибосомных оперонов. Установлено, что при дефиците аминоацилтРНК синтез мРНК подавляется в клетках ге1А штамма и продолжается в клетках мутанта. В растущих клетках . А понижается с уменьшением скорости роста культуры. При увеличении дозы генаге1А возрастает чувствительность рибосомного аппарата к деацилированию тРНК, что выражается в увеличении скорости синтеза и содержания в клетках . Возросший уровень ограничивает транскрипцию гена . . Использование плазмид, содержащих ген , позволило показать, что является тем внутриклеточным компонентом, который ограничивает скорость роста культуры на средах различного состава. Сделан вывод, что при изменении источников питания в клетках изменяется степень аминоацилирования тРНК, которая регистрируется ПОПуЛЯЦИеЙ рИбОСОМ, Образующей . Научнопрактическое значение работы. Способность бактериальных клеток регулировать уровень составляет основу их адаптации к разнообразным источникам питания. Роль особенно велика при несбалансированном росте, сопровождающемся дерепрессией аминокислотных оперонов. В этих условиях от уровня зависит протекание таких жизненно важных процессов, как точность трансляции мРНК, интенсивность транскрипции рибосомных и аминокислотных оперонов, трансмембранный потенциал, уровень дыхания и т. Научнопрактическое значение данный работы состоит в возможности регуляции уровня в растущих клетках нетрадиционным путм увеличения дозы гена . Значение работы заключается и в том, что идентифицирован, как внутриклеточный метаболит, уровень которого является важным фактором регуляции скорости роста культуры клеток бактериальных штаммов. Благодаря этому открываются дополнительные возможности управления процессами микробиологического синтеза, протекающими при ограничении скорости роста микроорганизмов. РЕГУЛЯЦИЯ ЭКСПРЕССИИ РИБОСОМНЫХ ОПЕРОНОВ В КЛЕТКАХ . Структурная организация рибосомных оперонов стала известна относительно недавно, благодаря новым методическим подходам, обусловленным развитием техники конструирования рекомбинантных молекул. По этому вопросу в настоящее время имеются достаточно подробные обзоры литературных данных , . . , , в связи с чем целесообразным представляется ввделить те стороны организации рибосомных оперонов . В хромосоме . РНК а. I6 рРНК тРНК рРНК 3. В клетках . РНКазу Ш, обнаруживается предшественник рибосомных рРНК, содержаищй все три вида рРНК. Это свидетельствует о том, что каждый оперон рРНК представлен одной транскрипционной единицей, а синтезирующийся предшественник в норме подвергается РНКаза Шзависимому процессингу а. iv . Интересно, что между генами I6 и рРНК располагаются гены тРНК . . РНК7 , а в другом гены тРНКа и тРНК. РНК содержат гены тРНК в дистальной части . Гены рбелков не повторяются, большая их часть располагается в двух участках хромосомы i на минуте и минуте генетической карты.