Изучение функций различных доменов нового транскрипционного коактиватора SAYP (E(y)3) Drosophila melanogaster и поиск взаимодействующих с ним белков

• Автор: Николенко, Юлия Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 120 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ РНКПОЛИМЕРАЗОЙ IIУ ЭУКАРИОТ.

1.1 РНКполимераза П.

1.2 Локусы контроля транскрипции генов класса II.

1.3 Базальная транскрипция. Общие факторы транскрипции

1.4 Специфические факторы транскрипции активаторы и репрессоры.

1.5 Корегуляторы

2. ХРОМАТИН.

2.1 Структура хроматина. Модификации гистонов.
2.2 Структурные и биохимические особенности гетерохроматина.
2.3 Гетерохроматин и транскрипция. Эффект положения гена
2.4 Белковые комплексы, изменяющие структуру хроматина
3. ЯДЕРНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ
3.1 Строение и механизмы действия ядерных рецепторов
3.2 Ядсрные рецепторы и гормональная сигнализация у . .
3.3 Корегуляторы ядерных рецепторов.
ОБЪЕКТ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. МАТЕРИАЛЫ
1.1 Штаммы и вектора . vii и . i, использованные в работе.
1.2 Библиотека кДНК.
1.3 Дрожжевые и бактериальные среды.
1.4 Ферменты и реактивы.
1.5 Праймеры.
1.6 Конструкции для анализа активации репортерных генов в дрожжах
1.7 Конструкции i для двухгибридного анализа.
1.8 Конструкция для экспрессии фрагмента белка Нг для получения
поликлональных антител.
1.9 Конструкции для анализа функций доменов белка i viv.
2. МЕТОДЫ
2.1 Работа с дрожжами. Скрининг библиотеки кДНК в двухгибридной системе
2.2 Работа с ДНК.
2.3 Работа с белками.
2.4 Работа с . .
2.5 Использованное программное обеспечение.
РЕЗУЛЬТАТЫ.
1. Изучение роли домена белка в активации транскрипции в дрожжах
2. Изучение влияния белка на транскрипцию в гетерохроматине.
3. Изучение влияния домена белка на выживаемости и активацию
транскрипции i viv.
4. Изучение роли доменов белка в репрессии транскрипции в
гетерохромати не.
5. Поиск белков, взаимодействующих с в двухгибридной системе
6. Подтверждение взаимодействия и 3
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Инициатор I это специфическая нуклеотидная последовательность, которая находится вблизи старта транскрипции и в большинстве случаев определяет его. I обогащен пиримидиновыми основаниями и имеет каноническую последовательность РуI ТС1 у . I обнаружен в промоторов . ТАТАэлемента. Инициатор принимает участие в привлечении II к промотору Vi . это элемент с консенсусной последовательностью в положении от до п. в положении п. обнаружен примерно в промоторов у . всегда присутствует и функционирует вместе с I, поэтому оба этих элемента могут рассматриваться как один. С взаимодействует гетеродимер 69 , . II iv представляет собой 7нуклеотидную консенсусную последовательность в области от до п. 1I. островки присутствуют в промоторах многих генов класса II, в частности генов, кодирующих белки промежуточного метаболизма генов домашнего хозяйства. Транскрипция генов данного типа может начинаться с многих сайтов, расположенных в области длиной 0 п. На данный момент известно три основных тина промоторов ТАТАсодержащие, держащие и не содержащие ни одного из указанных элементов у . Вопрос о функциональной значимости различий в строении промоторов различных генов до сих пор остается неясным. Возможно, вариации состава базальных элементов определяют механизмы регуляции транскрипции. Так, имеются данные, что специфические активаторы могут преимущественно оказывать действие на промоторы определенного типа , , . Проксимальные элементы регуляторной области гена в совокупности получили название регуляторный промотор. Они располагаются непосредственно вьппс базальных элементов промотора, в положении от до 0 п. , . У дрожжей . ivi i , который находится на расстоянии в несколько сот п. Дистальные элементы энхансеры и сайленсеры удалены от промотора на расстояния от 0 до нескольких десятков тысяч п. Энхансерами называют определенный класс регуляторных последовательностей длиной от до 0 п. ДНК на больших расстояниях от него от т. . до 0 т. Энхансеры оказывают действие независимо от ориентации по отношению к промотору, а также от расположения относительно регулируемого гена. Противоположным образом действуют сайленсеры регуляторные элементы, которые оказывают негативное влияние на процесс инициации транскрипции. Типичный энхансер животных это участок длиной п. Несколько энхансеров одного гена работают независимо друг от друга vi i, . Энхансеры являются матрицами для сборки сложных белковых комплексов из активаторов репрессоров, компонентов ремоделирующих комплексов и белков хроматина. Эти комплексы через высокоспецифичные белокбелковые взаимодействия осуществляют передачу регуляторных сигналов основным компонентам транскрипционного аппарата Согласно наиболее распространенной модели, ДНК между энхансером и промотором образует петлю, в результате чего белковые факторы, связанные с энхансером, приобретают способность модулировать экспрессию соответствующего гена, непосредственно взаимодействуя с одним из общих факторов транскрипции или молекулой II Патрушев, , . Сайленсеры, повидимому, инициируют сборку гетерохроматинподобных структур на подконтрольных генах. Такой механизм показан у дрожжей . У высших организмов, вероятно, также имеются другие механизмы , . Было обнаружено, что в ряде случаев целый набор генов может находиться под контролем не только указанных выше элементов, но и так называемого i сайта, контролирующего структуру хроматина и доступ активаторов к ДНК на протяженном участке до 0 . переводит хроматин в открытое состояние на протяженных участках ДНК и обеспечивает высокий уровень активированной экспрессии подконтрольных генов, независимый от окружающего гетерохроматина. Механизм действия на данный момент до конца не ясен.