Поиск генов Schizosaccharomyces pombe, участующих в инициации анафазы

• Автор: Грищук, Екатерина Леонидовна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1997
• Место защиты: Б. м.
• Количество страниц: 110 с.

Оглавление

Глава 1. Вступление.

Циклы всех клеток регулируются

Вступление в митоз

События начала анафазы

Контроль начала анафазы

Убиквитинзависимый протеолиз 1

Резюме

Обзор будущей работы

. рот , как модельная система

Глава 2. Материалы и методы.

Методы работы с клетками .
Генетические методы
Получение диплоида
Трансформация клеток .
Молекулярные методы. Методы клонирования
Полимеразная цепная реакция ПЦР
Использование метода для подтверждения гомологичной рекомбинации
Глава 3. Поиск мутантов i , дефектных в инициации анафазы, используя чувствительность к
ингибитору протеаз, ТРСК.
Обсуждение
Глава 4. Генетический скрининг на митозных мутантов i , дефектных в инициации анафазы.
Описание скрининга и его результатов.
Характеризация фенотипа штамма 2
Генетические взаимодействия между пис23, т12 и си5т2 указывают на функционального взаимодействие между
продуктами этих генов
Обсуждение
Глава 5. Клонирование и характеризации супрессора т. Клонирование мультикопнйного супрессора 1т12.
5о кодирует белок, схожий с Рас2р из Б.сегеуЫае и кофактор Е клеток человека, участвующим в сборке тубулина
Ген 8Ю1 жизненно необходим в митозе
Обсуждение
Глава 6. Обсуждение.
Список литературы


В 2 переходе общее количество внутриклеточных белоксвязанных фосфотаз увеличивается сильно, показывая, что фосфорилирование составляет главный механизм, вызывающий глубокую структурную реорганизацию, которая сопровождает вступление в митоз. У позвоночных типичные события митоза включают конденсацию хромосом, разрушение ядерной оболочки, разборку цитоплазматического цитоскелета и образование митотического веретена I i, , , . Сравнительно мало известно о физиологических субстратах для , которые вызывают эти сильные кординальные перестройки i, . Возможно лучше всего понятен процесс разборки л амин, который сопровождает разрушение ядерной оболочки. Повидимому, это является результатом прямого фосфорилирования ламина с помощью с1с2циклин В киназы i, . Есть также данные, что и другие киназы контролируют сборку веретена и динамику микротрубочек . V а Пол электронным микроскопом кинстохоры промстафазных хромосом выглядят триламинарными структурами, имеющими дискообразную форму. Их точный молекулярный состав еще неизвестен, но было показано, что ряд белков, включая микротрубочкозависимые двигатели, располагаются на кинетохорах например, ii, . Эти моторы и, вероятно, некоторые до сих пор не идентифицированные белки придают кинетохорам способность захватывать микротрубочки и двигаться вдоль них. Микротрубочки образуют ядро таким образом, что их минус концы находятся около центросом и их плюс концы являются свободными для взаимодействий с кинетохором. В начате митоза число и лабильность микротрубочек, которые растут из центросом, увеличивается, в то время как средняя длина микротрубочек уменьшается. Зрелые веретена возникают, когда две центросомы расходятся и становятся полюсами веретена. Некоторый набор микротрубочек, вырастающих из каждого из этих полюсов, взаимодействует с их аналогами с противоположных полюсов. В это время фосфорилнрующис участки, которые узнаются различными антителами, присутствуют на обеих центросомах и кинетохорах, но киназы, ответственные за эти участки, так же как и их субстраты, неизвестны V i, i. . i, . В результате взаимодействия между микротрубочками, кинетохорами и цеггросомами хромосомы достигают биполярного прикрепления и выстраиваются в линию на экваторе веретена. Переход в новую митотическую стадию, которая называется анафаза, отмечает необратимое намерение выйти из митоза и войти в следующую фазу роста. Многие из веретен микротрубочек, включая тс, которые соединены с кинстохорами, укорачиваются в результате деполимеризации их плюс концов анафаза А. В то же время и полюсные микротрубочки веретена и астральные микротрубочки удлиняются, приводя к дальнейшему расхождению центросом анафаза В. Центросомы изменяют свою степень фосфорилирования V i, и теряют свою способность инициировать новые трубочки . Вскоре после этого ядерная оболочка восстанавливается, хромосомы декондснсируются и происходит физическое разделение клетки на две дочерние цитокинез. Начало анафазы представляет собой один из тех ключевых переходов в клеточном цикле, успех которого является жизненно важным для выживания организма. К примеру, удлинение веретен никогда не должно встречаться раньше выравнивания хромосом на экваторе веретена, в то же время цитокинез никогда не должен предшествовать удлинению веретена. Поэтому обязательно, чтобы все события анафазы были упорядочены во времени. Имеет место значительное уменьшение степени фосфорилирования белка, сопутствующего митотическому выходу, таким образом возвращение к стадии интерфазы может просто отражать синхронное возвращение событий фосфорилирования, которое имело место в 2 переходе, га точка зрения в значительной мерс подтверждается способностью ингибиторов протсинфосфатаз вмешиваться в митотический выход V i, i , . Более того, мутация генов протеинфосфатазы или их регуляторных субъединиц делает дрожжевые клетки неспособными закончить митоз должным образом ii i, ii i, .