Структурные и функциональные особенности рекомбинантных белков вируса гепатита C

• Автор: Гудим, Елена Александровна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 101 с.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений.

Введение

Глава 1. Обзор литературных данных.

1.1. Строение вируса гепатита С ВГС.

1.2. Молекулярная биология ВГС

1.2.1. Клеточная культура и модели животных.

1.2.2. Организация генома и генетическая вариабельност

1.2.3. Структура белков ВГС и их функции

1.2.4. Цикл репликации ВГС

1.2.5. Патогенез, диагностика и лечение гепатита С

1.3. Взаимодействие белка Е2 ВГС с клеточной
поверхностью
1.3.1. Функциональная организация белка Е2
1.3.2. Структура рецептора .
1.3.3. Взаимодействие белка Е2 с рецептором
1.3.4. Взаимодействие белка Е2 с другими рецепторами для ВГС.
1.4. Структурные и функциональные особенности белка 3 ВГС.
1.4Л. Сериновая протеаза 3 и механизмы ее
ингибирования.
1.4.2. Структура и функции хеликазы 3.
1.5. Роль белков ВГС в гуморальном и клеточном иммунитете
Глава 2. Материалы и методы исследования.
2.1. Клетки, плазмиды, культивирование
2.2. Клонирование рекомбинантного белка Е241 ВГС для экспрессии в .i
2.3. Клонирование рекомбинантного полноразмерного белка 3 ВГС для экспрессии в .i
2.4. Экспрессия рекомбинантных белков Е2, 3 и в клетках .i.
2.5. Очистка телец включения
2.6. Очистка рекомбинантного Е2 на i смоле.
2.7. Очистка рекомбинантного рецептора на глютатионсефарозе 4В
2.8. Взаимодействие рекомбинантного белка Е2 с рецептором .
2.9. Твердофазный иммуноферментный анализ I
2 Иммуноблоттинг
Глава 3. Результаты и обсуждение.
3.1. Получение рекомбинантного функционально активного белка Е2 41 ВГС.
3.1.1.Клонирование рекомбинантного белка Е2 41
3.1.2. Экспрессия Е241 в клетках .i 3
3.1.3. Выделение и очистка белка Е2 на i
3.1.4. Взаимодействие полученного рекомбинантного белка Е241 с моноклональными антителами.
3.1.5. Экспрессия, выделение и очистка рецептора
3.1.6. Взаимодействие рекомбинантного белка Е241 с рецептором
3.2. Получение рекомбинантного полноразмерного белка ВГС. Изучение его взаимодействия с антиВГС антителами в сыворотках инфицированных ВГС.
3.2.1. Клонирование рекомбинантного полноразмерного белка ВГС.
3.2.2. Экспрессия и очистка полноразмерного белка в клетках Е.со МКЕР4.
3.2.3. Взаимодействие рекобинантного белка с сыворотками больных гепатитом С.
3.3. Определение диагностического, прогностического, клинического значения детекции антител к полученному
рекомбинантному белку .
Список литературы


Список сокращений. Глава 1. Обзор литературных данных. Строение вируса гепатита С ВГС. Клеточная культура и модели животных. ВГС. Структура рецептора . Взаимодействие белка Е2 с другими рецепторами для ВГС. Структурные и функциональные особенности белка 3 ВГС. Структура и функции хеликазы 3. Глава 2. Материалы и методы исследования. Клонирование рекомбинантного белка Е241 ВГС для экспрессии в . Клонирование рекомбинантного полноразмерного белка 3 ВГС для экспрессии в . Экспрессия рекомбинантных белков Е2, 3 и в клетках . Очистка рекомбинантного Е2 на i смоле. Взаимодействие рекомбинантного белка Е2 с рецептором . Глава 3. Результаты и обсуждение. Получение рекомбинантного функционально активного белка Е2 41 ВГС. Экспрессия Е241 в клетках . Взаимодействие полученного рекомбинантного белка Е241 с моноклональными антителами. Получение рекомбинантного полноразмерного белка ВГС. Изучение его взаимодействия с антиВГС антителами в сыворотках инфицированных ВГС. Клонирование рекомбинантного полноразмерного белка ВГС. Экспрессия и очистка полноразмерного белка в клетках Е. МКЕР4. Взаимодействие рекобинантного белка с сыворотками больных гепатитом С. Список литературы. Вирусом гепатита С ВГС инфицировано более 0 миллионов человек во всем мире. ВГС известен как один из наиболее распространенных факторов, вызывающих острые и хронические гепатиты у человека и шимпанзе. Хроническая инфекция развивается приблизительно в случаев и в конце концов приводит пациентов к циррозу и приблизительно 5 пациентов к гепатоклеточной карциноме , , , . Гликопротеиновую часть вирусной оболочки представляют собой гетеродимерные нековалентные комплексы оболочечных гликопротеинов и Е2. Основным рецептором для ВГС считается , который взаимодействует с белком оболочки Е2. Одним из механизмов элиминации вируса является выработка антиЕ2 антител, нейтрализующих связывание ВГС с клетками. В белке оболочки Е2 ВГС найдены как линейные, так и конформационные эпитопы. . ВГС высоко изменчив, что определяет трудности в его изучении , . Поэтому при анализе иммунного ответа необходимо учитывать все изоляты вируса. Поскольку изза высокой скорости мутации ВГС постоянно появляются новые вирусные варианты, гуморальный иммунитет к этим вирусным инфекциям сохраняется лишь до появления нового сероварианта возбудителя, что не позволяет рассчитывать на долговременный эффект вакцинации только одним белком v . В острой фазе антитела к неструктурным белкам определяются позже, чем антитела к структурным белкам. Высокие титры антител к 3 в острой фазе гепатита С рассматривают как маркер хронизации vi . Таким образом, получение рекомбинантных функционально активных белков ВГС имеет огромное диагностическое и клиническое значение. Дальнейшие исследования с использованием данных белков важны не только для понимания различий в механизме иммунного ответа на вирусы к различным генотипам, но и получения терапевтической вакцины. Цель и задачи работы. Целью данной работы является изучение структурных и функциональных особенностей рекомбинантных белков вируса гепатита С. Получить рекомбинантный функционально активный белок Е2 вируса гепатита С, изучить его взаимодействие с рецептором . Получить рекомбинантный полноразмерный белок 3 вируса гепатита С, изучить его взаимодействие с антиВГС антителами в сыворотках инфицированных ВГС. Определить диагностическое, прогностическое, клиническое значение детекции антител к полученным рекомбинантным белкам. Научная новизна и практическая ценность работы. Получены и охарактеризованы рекомбинантные белки Е2 и 3 ВГС, экспрессированные в . Показано, что негликозилированная форма Е2 эффективно взаимодействует как с моноклональными антителами, полученными против эукариотического гликопротеина Е2, так и с человеческим клеточным рецептором .