Идентификация генов-супрессоров опухолевого роста на коротком плече хромосомы 3 человека и возможные пути их инактивации

• Автор: Малюкова, Алёна Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 108 с. : ил.

1. Обзор литературы

1.1 Трансформированная клетка критерии и свойства.

приобретаемые трансформированной клеткой

1.2 Молекулярно генетические изменения в опухолях

1.3 Роль метилирования в онкогенезе

1.3.1. Дсмсгилирование генома

1.3.2.Гиперметилирование отдельных генов

1.4 Критичные районы на коротком плече хромосомы 3 человека

1.5 Кандидаты в генысупрессоры опухолевого роста на коротком плече

хромосомы 3 человека

1.5.1 .Область АР

1.5.2.0бластьШСА
Ген ЯЮТ7Л
Гены ЗетаЗВ и ЗетаЗГ
1.5.3.ОбластьР
Ген Ц8Р4
I .б.Заключение
2. Масриаль и методы
2.1.Сбор материала
2.2. Выделение геномной ДНК из ткани человека
2.3. Выделение тотальной РНК из ткани человека
2.4. Получение компетентных клеток Е.СоП.
2.5. Трансформация компетентных клеток Е.СоП
2.6. Выделение плазмидной ДНК
2.7. Обработка ДНК рестрикционными эндонуклеазами
2.8. Бисульфитная конверсия ДНК
2.9. Метилчувствитсльный рестрикционный анализ
2 Полимеразная цепная реакция
2 Количественная ПЦР в режиме реального времени
2 Реакция обратной транскрипции, синтез кДНК
2 Клеточные линии и их культивирование
2 Трансфекция плазмидных конструкций
2 Иммунофлуорссцснтный анализ содержания белков в клетке
2 Секвенирование нуклеотидных последовательностей
3. Результаты и обсуждение
3.1.1 Анализ уровня метилирования промоторного района гена
в опухолях шейки матки
3.1.2.Сравнение частоты метилирования гена ЯАР1Л и других
аббераций в данном районе.
3.1.3 Метилирование гена Л1 один из доминирующих
способов его инактивации при плоскоклеточном раке шейки матки
3.2.1 Эпигенетическая инактивация гена 8ета ЗВ в первичных
опухолях и клеточных линиях рака почки, легкого и яичников.
3.3.1 Кандидат в генысупрсссоры опухолевого роста
3.3.2 Анализ экспрессии гена С8Р
3.3.3 Мутационный анализ гена Р
3.3.4 Доменная организация иБР
3.3.5 Влияние экспрессии гена на регуляцию клеточного цикла
3.4.1 Идентификация нуклеотидной последовательности 5 района гена ЯВЯРЗ, определение двух вариантов альтернативного сплайсинга ЯВйРЗА и КМРЗВ
3.4.2 Анализ экспрессии гена ВВ8РЗ в клеточных линиях эпителиального рака различной локализации и биопсиях рака почки, рака молочной железы и карциномы яичников.
3.4.3 Мутационный анализ гена ЯВ8РЗ
3.4.5 Статус метилирования промоторного района гена ЯВ8РЗ
3.4.6 Определение специфической мишени фосфатазной активности белка 1В5РЗ
3.4.7 Предполагаемый механизм действия ВВ8РЗ в патогенезе опухолей.
3.4.8 Синергичное действие геновсупрессоров расположенных на коротком плече хромосомы 3.
4. Выводы
5. Список литературы
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВС i карцинома молочной железы
СС vi i карцинома шейка матки
I iivi тест геновсупрессоров на инактивацию
гомозиготная делеция i V вирус папилломы человека ivi
i потеря гетерозиготности
район хромосомы 3, где локализованы геныкандидаты в супрессорные гены рака легкого
i нсмслкоклеточный рак легкого
ОС vi i карцинома яичников
I полиэтиленимин
i клеточная карцинома почки
I v i Iii тяжелый комбинированный иммунодефицит
i мелкоклеточный рак легкого
генсунрсссор опухолевого роста .
аминокислотные остатки
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
кДа килодальтон
кДНК комплиментарная ДНК
млн. п.н. миллион пар нуклеотидов
мРНК матричная информационная РНК
МЧРА анализ с применением метилчувствительных рестрикционных эндонуклеаз и последующей ПЦР
ПЦР полимеразная цепная реакция РК рибонуклеиновая кислота т. п.н. тысяча пар нуклеотидов рКЬ белок ретинобластомы
ррЯЬ фосфорилированная форма белка ретинобластомы
ВВЕДЕНИЕ


Трансформированная клетка критерии и свойства. I . Получение компетентных клеток Е. СоП. Трансформация компетентных клеток Е. Анализ экспрессии гена ВВ8РЗ в клеточных линиях эпителиального рака различной локализации и биопсиях рака почки, рака молочной железы и карциномы яичников. Предполагаемый механизм действия ВВ8РЗ в патогенезе опухолей. Синергичное действие геновсупрессоров расположенных на коротком плече хромосомы 3. ПЦР полимеразная цепная реакция РК рибонуклеиновая кислота т. С самого начала исследование молекулярных основ канцерогенеза вселяло надежду на разработку более эффективных терапий рака. Так как рак имеет разную этиологию и опухолевая прогрессия связана с бесконечной комбинацией генетических и эпигенетических изменений, порождающих несоизмеримый ряд аномалий, возникло убеждение, что и лечение рака должно быть, таким же разнообразным, как и нарушения. Действительно, так как рак не является единообразным заболеванием, то не может существовать и единственного варианта его лечения. Поиск оптимальной терапии раковых заболеваний представлялся Геракловой и практически невозможной задачей. Однако эти утверждения оказались слишком пессимистичными. Хотя злокачественные новообразования чрезвычайно разнообразны и гстерогеины, в основе этих изменений находится относительно небольшое количество критических событий, одновременное проявление которых требуется для развития любых злокачественных новообразований. Хотя в развитие неоплазии вовлечено множество процессов, в основе профессии опухолей лежит неконтролируемое размножение клеток и уход от апоптоза. Поэтому необходимо определить и понять молекулярную анатомию основных этапов опухолевого патогенеза и создать терапевтические схемы, направленные на элиминацию этих этапов. Движущая сила рака эго случайные соматические мутации в генах, которые управляют пролиферацией и дифференцировкой. Трансформированная клетка. Критерии и свойства. Канцерогенез многоступенчатый процесс накопления мутаций и других генетических изменений, приводящих к нарушениям регуляции клеточного цикла, апоптоза, дифференцировки, морфогенетической патологии, а также, вероятно, к неэффективному функционированию факторов специфического и неспецифического противоопухолевого иммунитета. Накопление генетических повреждений в клетках сопровождается селекцией клона, способного к неконтролируемой пролиферации, и в дальнейшем способного к метастазированию. При этом в силу высокой генетической изменчивости и селекции в популяции клеток такого клона постоянно возникают и отбираются все более и более автономные и агрессивные субклоны, что описывается термином опухолевая прогрессия. В результате довольно длительной эволюции неопластического клона формируется опухоль, способная убить организм. Предполагается, что в основе малигнизации лежит каскадный процесс генетических повреждений, затрагивающих не менее генов 2осЬЬаиегМиег е1 а1.