Изучение свойств и эпитопный анализ аутоантител с помощью синтетических и рекомбинантных фрагментов β1-адренорецепторов человека

• Автор: Рулева, Наталья Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 92 с.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 .рАдренергические рецепторы сердца человека

1.1 Л.Роль адренорецепторов в нейрогормональной передаче

сигнала, классификация, адренорецепторы миокарда

1.1.2.Механизмы функционирования адренорецепторов

1.1.2.1 .Адренорецепторопосредованная сигнальная система

1 Л.2.2.Регуляция Радренорецепторов

1.1.3.Структура адренорсцепторов

1.1.3.1 .Общие сведения
1.1.3.2.Структура активного ценфа
1.1.3.3.Полиморфизм Радренорецепторов
1.2.рАдренорецепторы миокарда при хронической сердечной недостаточности .
1.2.1 .Патогенное воздействие на кардиомиоциты хронической
активации симпатоадреналовой системы .
1.2.2.Изменения в Радренергической сигнальной системе кардиомиоцитов
1.3.Аутоиммунные реакции и сердечная недостаточность
1.4.Аутоантитела к р 1 адренорецепторам человека
1.4.1 .Свойства аутоантител i vi
1.4.2.Физиологическая роль аутоантител
1.5.Эглин С как вектор для экспрессии белков и пептидов
1 .б.Заключение
Глава 2. Материалы и методы
2.1.Синтез пептидов
2.2.Получение рекомбинантного химерного белка
эглин Сфрагмент р 1адренорецептора
2.3.Элекфофорез в ПААГ по i,
2.4.Аутоантитела к адренорецепторам человека
2.5.Поликлональные антитела и конъюгаты
2.6.Монокяональные антитела и конъюгаты
2.7.Иммуноферменгный анализ
2.8.Иммуноферментный анализ с использованием системы стрептавидинбиотин для иммобилизации пептида
2.9.Получение аффинных сорбентов с рекомбинантным
химерным белком
2Определение связывающей емкости аффинных
сорбентов с химерным белком бетчметодом
2. .Определение концентрации белков
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1.Взаимодействие аутоантител с химически синтезированными фрагментами второй внеклеточной
петли р 1адренорецептора
3.2.Взаимодействие аутоантител с рекомбинантным химерным
белком
3.3.Характеристика аутоантител к радренорецептора
в сыворотке крови человека
Выводы
Список литературы


Глава 1. Л.2. Адренорецепторы миокарда при хронической сердечной недостаточности . Глава 2. Глава 3. ЭДТА этилендиаминтетраацетат. ЬАдренорецепторы, в частности, локализованные на кардиомиоцитах, относятся к семейству в белоксопряженных рецепторов и участвуют в передаче сигналов от симпатоадреналовой системы. Связываясь с нейромедиатором норадреналином, выделяемым симпатическими нервными окончаниями внутри миокарда, р1адренорецепторы стимулируют аденилатциклазу, что приводит к накоплению цАМФ в кардиомиоците и, в конечном итоге, к усилению сократимости сердца. Передача сигнала осуществляется при участии в белков, в первую очередь вйа. Известно, что длительная активация адрелорецепторов за счет повышения внутриклеточной концентрации ионов кальция может приводить к перерождению кардиомиоцитов и развитию сердечной недостаточности. В ответ на повышенный синтез катехоламинов при сердечной недостаточности происходит также десенситизация Р1адренорецепторов кардиомиоцитов, что в конечном итоге приводит к дальнейшему прогрессирующему нарушению сократимости сердца. В последнее время полагают, что, помимо норадреналина, хроническую патогенную стимуляцию кардиомиоцитов могут вызывать и аутоантитела к р1адренорецепторам, впервые выявленные при нарушении регуляции деятельности сердца. Предполагают, что такие антитела могут стабилизировать активное состояние рецептора и играть существенную роль в происхождении и развитии сердечной недостаточности. Целью настоящей работы является изучение иммунохимических свойств и эпитопный анализ аутоантител к р 1адренорецепторам человека. Провести картирование антигенного эпитопа для аутоантител с помощью ряда химически синтезированных пептидов, соответствующих различным фрагментам второй внеклеточной петли рецептора. Исследовать влияние пространственных факторов на связывание аутоантител при помощи рекомбинантного химерного белка с фрагментом рецептора. Охарактеризовать аутоантитела к Р1адренорецепторам в сыворотке крови человека. Глава 1. Адренергические рецепторы сердца человека. Роль радренорецепторов в нейрогуморальнои передаче сигнала, классификация, адренорецепторы миокарда. РАдренорецепторы относятся к семейству Обелоксопряжснных рецепторов и участвуют в передаче сигналов от симпатоадреналовой системы ОоЫтап Ща1, . На основании фармакологических критериев радренорецепторы подразделяют на рь р2, Рзподгииы, классически определяя их как рецепторы сердечной ткани, гладких мышц дыхательных путей и жировой ткани, соответственно ЗоЬпбоп, . Адренергические агонистыкатехоламины, повышенный выброс которых происходит в ответ на физическую нагрузку или стресс, являются сильнейшими стимуляторами сердечной сократимости. В мембранах кардиомиоцитов Радренергические рецепторы представлены в основном р1 и р2подтипами. Соотношение р 1 р2 подтипов в молодом здоровом миокарде составляет . Оба подтипа сопряжены с аденилатциклазой через стимулирующие вбелки. Основным эндогенным агонистом Р1адренорецепторов Р1 АР являегся норадрсналин, или норэнинефрин М. АР адреналин, или эпинефрии М.