Пространственная организация хромосомных территорий в ядрах нормальных и анеуплоидных клеток

• Автор: Петрова, Наталья Валентиновна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 96 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Понятие о хромосомных территориях

Позиционирование и границы хромосомных территорий

Механизмы формирования хромосомных территорий

Позиционирование генов внутри X

Компьютерное моделирование X

Общая картина функциональной архитектуры ядра

Заключение

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Культивирование клеточных линий

Выделение ДНК из клеток человека
Полимеразная цепная реакция
Клонирование продуктов ПЦР
Лигирование
Получение компетентных клеток Е.СО
Трансформация компетентных клеток .i. и скрининг колоний
Флуоресцентная i i гибридизация I
Приготовление препаратов фиксированных клеток
ригоговление препаратов ядерных матриксов i i
Синтез пробы
Гибридизация с центромерными пробами
Гибридизация с пробой к Xi РНК
Совместная гибридизация с пробой к Xi РНК и к центромере Ххромосомы
Компьютерная обработка изображений
Статистический анализ данных
Анализ способности фрагментов асателлитных повторов связываться с ядерным матриксом i vi
Выделение ядериого матрикса
Получение радиоактивно меченых фрагментов ДНК
Анализ связывания фрагментов с ядерным матриксом
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Роль ядериого матрикса в поддержании специфической пространственной организации хромосом в интерфазе клеточного цикла
1.1. Специфичные асагеллитные повторы в центромерных участках хромосом удобный маркер хромосомной территории
1.2. Анализ расположения центромер хромосом X и в ядрах первичных фибробластов человека
1.3. Получение препаратов ядер, частично лишенных ДНК
1.4. Характерные радиальные позиции центромер хромосом X, и 1 поддерживаются ядерным матриксом
1.5. Дополнительное удаление РНК не влияет на радиальные позиции центромерных участков в препаратах ядерного матрикса
1.6. Альфоидиые сателлиты, специфичные для хромосом X и ,
не являююя участками прикрепления к ядерному матриксу
2. Анализ пространственного распределения хромосом в ядрах первичных фибробластов человека с полисомией по Ххромосоме
2.1. Положение Ххромосом внутри ядра изменяется при появлении дополнительных копий этой хромосомы
2.2. Хромосомные территории активных и неактивных копий Ххромосомы характеризуются разными радиальным позициями в ядрах с генотипом ХХХХУ
2.3. Сравнение локализации хромосомы 1 в ядрах нормальных фибробластов и фибробластов с полисомией по Ххромосоме
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ГЛАВА I. ГЛАВА II. Получение компетентных клеток Е. Трансформация компетентных клеток . i. ГЛАВА III. В последнее время фокус исследований, посвященных принципам регуляции экспрессии генов, смещается от детального анализа молекулярных механизмов, контролирующих активность отдельных генов, к глобальному изучению общей картины структурнофункциональной организации генома в пространственном и временном отношении. Становится все более и более очевидным, чго слаженное и оперативное функционирование генома не может обеспечиваться только регуляторными элементами, присутствующими в линейной ДНК. Огромную роль в регуляции экспрессии генов и реализации генетических программ играют эпигенетические механизмы метилирование ДНК, модификации гистоиов, замещение нормальных гистонов на их вариантные формы и пространственная организация клеточного ядра. Активное развитие микроскопии и усовершенствование экспериментальных подходов позволили установить, что внутреннее пространство ядра это не беспорядочная смесь различных составляющих, а четко структурированная система, отдельные компоненты которой связаны друге другом сложными иерархическими взаимоотношениями. Хромосомы на любой стадии клеточного цикла представляют собой более или менее компактные структуры, занимающие отдельные не перекрывающиеся друг с другом области ядерного пространства, получившие название хромосомных территорий ХТ. Хромосомные территории не просто способ компактной упаковки больших объемов хроматина в ограниченном ядерном пространстве, но и, главным образом, аппарат, наилучшим образом приспособленный для обеспечения слаженного функционирования генома. Локализация генов внутри хромосомной территории, взаимное расположение хромосомных территорий и позиционирование их относительно центра ядра имеют важное значения для проявления активности тех или иных генов. Хотя последние в последние лег принципы организации хромосомных территорий очень активно изучались, многое еще остается непонятным. Так. ХТ внутри ядра определенным образом связана с генной плотностью. Но общие закономерности, определяющие позицию каждой ХТ, пока остаются мало понятными. Да и сами структуры и механизмы, обеспечивающие целостность и надлежащую организацию хромосомных территорий, неизвестны до сих пор. Настоящая работа посвящена исследованию роли ядерного матрикса в поддержании упорядоченной пространственной организации хромосом в интерфазе клеточного цикла, а также изучению нарушений этой организации, возникающих при появлении дополнительных копий Ххромосомы.